DNA重组技术的基本工具王京礼.ppt

知识回顾1、限制性核酸内切酶：准确切割DNA；DNA连接酶：将DNA片段再连接起来；运载体：运输工具，将体外重组好的DNA导入受体细胞。基因工程需要的工具有限制酶、DNA连接酶和运载体；需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶。2、限制性核酸内切酶又称限制酶，其主要从原核生物中分离出来，能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的部位进行切割。其作用部位为两个核苷酸之间的磷酸二酯键，形成黏性末端和平末端。3、DNA连接酶是将DNA片段连接起来，恢复被限制酶切割开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。根据酶的来源不同，可分为从大肠杆菌中分离出来的Ecoli DNA连接酶和从T4噬菌体中分离出来的 T4 DNA连接酶，前者只能连接黏性末端，后者既可以连接黏性末端也可以连接平末端，但连接平末端的效率比较低。4、将外源（目的）基因送入受体细胞的载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒，常用质粒作为运载体，具有以下特点：（1）能自我复制（2）具有一个或多个限制酶切割位点，便于外源基因插入（3）具有标记基因，可以鉴定目的基因是否进入受体细胞。,专题一基因工程,1.1 DNA重组技术的基本工具,学习目标1、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用2、总结基因工程运载体需要具备的条件3、模拟制作DNA重组分子，培养学生合作、动手能力4、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新,预习反馈1、问题（1）三种工具及作用表述不确切（如分子运输车：质粒；限制酶：切割DNA分子，获取目的基因）（2）质粒的特点总结不全面2、表扬王福香、李浩、田雨、陈玉洁、刘荣、张慧君、赵伟、郑华涛、孙翰卿、徐小磊、孙希凯、任锡昌、张嘉楠、祝丽超、许玉萍、戴晶晶、王跃鹏、王天宇、刘丽庆,合作探究,EcoRI（在G和A之间切割）,Smal（在G和C之间切割）,黏性末端,平末端,同一种限制酶切割后形成的两个末端是什么关系？,反向重复序列,练习以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：CTGCA(2)AC(3)GC（4）G G TG CG CTTAA(5)G(6)GC(7)GT(8)AATTCACGTC CG CA G请用DNA连接酶将它们连接起来:_和_能连接;_和_能连接;_和_能连接;_和_能连接。,2和7；3和6；4和8；1和5,GAATTCCGTAGAATTCGGATT,CTTCATGAATTCCCTAA,GAAGTACTTAAGGGATT,CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA,含目的基因的DNA片段,运载体DNA片段,重组DNA分子片段,EcoRI,EcoRI,模拟制作,一、基因工程的概念.二、DNA重组技术的基本工具1.限制性核酸内切酶-“分子手术刀”2.DNA连接酶-“分子缝合针”3.运载体“分子运输车”,本课小结：,分类作用,来源作用特点结果,种类作用特点条件,