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DNA定量细胞学简介,郑州大学第三附属医院 张琳琳,细胞病理及其辅助技术,细胞病理学检测：创伤小，特异性较好，敏感性较差受细胞学医生的水平影响受制片质量影响辅助细胞技术：FISH（荧光原位杂交）免疫组化：HPV L1蛋白计算机判断与人主观判断相结合：自动细胞定量分析系统,机器代替人自动细胞定量分析系统 分为二类：计算机根据细胞形态的分析、比较、测定将可疑细胞筛选出来，再由细胞病理医生诊断自动阅片机DNA染色后再通过细胞核DNA含量和形态的测定，挑出DNA含量异常的细胞，再由医生结合常规细胞学检查做出诊断DNA定量细胞学,60年代，Airbrone仪器实验室设计Cyto Analyzer 自动细胞测定仪细胞涂片质量不好计算机功能不足价格昂贵现有技术的改进现有液基薄层制片技术计算机的计算、储存能力大大改善成本降低,基本原理,细胞生长周期,G1期（23对染色体）S期（2346对染色体）G2期（46对染色体）M期（46对染色体-23对染色体）,Feulgen染色1924Feulgen 和Rossenbeck 发现的细胞核内DNA染色技术原理：Schiff试剂或与它相似功能的试剂可以和酸化水解后的DNA上的醛基相结合而显色染色的深浅与DNA的含量呈正比,DNA含量23对染色体为7.18pgDNA定量细胞学常用单位：c1个c为正常G0/G1细胞DNA含量的一半G0/G1期细胞为2c细胞、二倍体细胞（23对染色体）积分光密度（IOD，Integrated Optical Density）待测目标的光密度总和，可反映光密度与面积的总和变化IOD像素总数N平均光密度DNA指数（DI)：测量时，代表DNA含量DI被测细胞的DNA IOD值/正常细胞IOD平均值淋巴细胞DNA含量及形态较稳定，作为正常细胞的参照,肿瘤细胞染色质的变化DNA突变染色体重组染色体片段丢失或增多染色体对数改变非整倍体细胞肿瘤细胞株肿瘤恶性程度越高染色体越不稳定非整倍体细胞越多,正常细胞染色体,异常细胞染色体,多倍体肿瘤异常增生：SG2-M期多倍体肿瘤：4c，8c非整倍体肿瘤散在的5c的非整倍体肿瘤非整倍体细胞峰,工作原理显微镜拾取细胞涂片的光学信号后，被数码相机转化为模拟电信号，再经模数转换成数字信号，经计算机处理，将运算产生的各种参数、储存的图象和数据进一步分析诊断,工作流程,DNA定量分析诊断报告,结果解读,二倍体DNA图像主峰见于GO/G1期，DI=1，2C细胞为主,多倍体DNA图像-可见独立的二倍体峰（DI=1,2C）和四倍体峰（DI=2,4C）,异倍体DNA图像-除二倍体细胞峰外（DI=1,2C）可见大量异倍体细胞（DI2.5）及异倍体峰,影响因素,标本因素固定、酸化、染色：DNA固定不好脱落DNA含量减少酸化不好DNA不易与Schiff试剂结合，影响IOD染色中的浓度、时间和PH值均影响IODCV(coefficient of variance）表示同种组织细胞DNA含量测定时的差别同种组织一般2,不同组织10%DNAICM的CV应5%系统因素噪声、GAMMA值、杂散光、阴影、聚焦、细胞核的分割边缘、相机成像系统,质控和标准,操作过程标准化系统质量保证质控细胞内对照细胞：同一样品内的淋巴细胞或粒细胞外对照细胞：正常大鼠肝脏印片细胞对照细胞与被测细胞一起制片、染色、同时或相近时间测定；CV6%,C刻度的确定用对照细胞光吸收单位来确定C刻度单位估计对照细胞和被测二倍体细胞的差别，并作出这种差别的标准差运用标准差相同的二倍体细胞在30个视野下，IOD的CV3%G1/G0期的二倍体细胞群（n30，例如淋巴细胞），在30个视野下，IOD的CV5%,DNA定量细胞学在宫颈癌中的应用,局限性,无法区分其他因素引起的非整倍体细胞无法区分整倍体细胞肿瘤二倍体肿瘤肿瘤早期：DNA序列的变化还未引起染色体对数的改变二倍体肿瘤：某些白血病、鼻咽癌自动DNA定量分析系统的软件和硬件,机器完全代替医生尚需时日！,