蛋白质含量的测定测定蛋白质含量的方法`.ppt

蛋白质含量的测定,掌握蛋白质含量测定的原理和方法学会标准曲线的绘制熟练使用分光光度计,实验目的,测定蛋白质含量的方法,测定蛋白质含量的方法较多基本上都是根据蛋白质的理化性质和生物学活性建立起来的。,实 验 原 理,二、比色法：利用蛋白质与不同试剂的呈色反应，测定蛋白质的含量，如双缩尿法和酚试剂法（lowrys method）。三、紫外分光光度法：利用蛋白质对280nm紫外光有最大的吸光度而采用,一、凯氏定氮法：根据蛋白质的含氮量来测定蛋白质的含量 公式:每g样品中含氮克数 6.25 100,蛋白质与酚试剂呈色深浅与蛋白质的含量成正比，利用蛋白质的浓度与呈色的关系，制备标准曲线，来测定样品中的蛋白质含量。,用已知浓度的标准牛血清白蛋白溶液（浓度为50mg%）配成一系列不同浓度的蛋白质溶液。取七支试管，编号，按下表操作,实 验 操 作,冷却后在波长650nm条件下比色,测定其光密度值。以空白管调零.,50水浴10分钟,标准曲线的绘制,以蛋白质的含量（g）为横坐标，光密度值（OD）为纵坐标，绘制出蛋白质含量的标准曲线。根据样品中的OD650,从蛋白质标准曲线中找到样品中蛋白质的g数。,计 算,每100ml血清中所含蛋白质的克数为：g%=样品中蛋白质含量（g数）1/0.510010-6500,注 意 事 项,测定蛋白质的浓度最好在25100g之间，故血清稀释倍数一般为200500。各管加酚试剂应快，必须立即混匀，否则就会出现浑浊。,2、绘制出标准曲线：要求规范作图 铅笔作图、横、纵坐标名称及单位 日期、作者、曲线名称 曲线上体现出待测样品的OD值及 ug数。3、计算：100ml血清中的蛋白质含量。要求：写出公式、代入数据、写出结果。,1、原始数据:各管的OD值,实 验 结果,分析实验误差产生的原因 总结该方法测定蛋白质含量的优缺点。,实 验 讨论,