芳香胺类药物的分析1医学.ppt

芳胺类药物指氨基直接与苯环相连。,芳胺类*:对氨基苯甲酸酯类、酰胺类 芳烃胺类:苯乙胺类.苯丙胺类,芳烃胺类药物指氨基在烃基侧链上。,第七章芳香胺类药物的分析,本章重点介绍芳胺类和芳烃胺类药物,一、对氨基苯甲酸酯类,具有对氨基苯甲酸酯的母体。具有游离的芳伯氨基（盐酸丁卡因除外）。,1基本结构特点：,第一节 芳胺类药物的分析,典型药物有：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺,盐酸普鲁卡因,苯佐卡因,盐酸丁卡因,2性质：,具有芳伯氨基（盐酸丁可因除外）发生重氮化-偶合反应；Schiff碱反应；易氧化变色,弱碱性脂烃胺侧链含叔胺氮原子（苯佐卡因除外）弱碱性，能与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应，非水酸碱滴定。,水解特性 具有酯的结构，容易水解。,其他特性 难溶于水，可溶于有机溶剂，其盐酸盐均为白色结晶性粉末，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。,1.结构特点：,苯胺的酰基衍生物，具有芳酰胺基；酰胺基邻位或对位有取代基。,二、酰胺类,代表药物有：对乙酰氨基酚、盐酸利多卡因、盐酸布比因盐酸罗哌卡因、醋酸苯砜、盐酸托卡尼等。,对乙酰氨基酚,盐酸利多卡因,2性质：,利多卡因，酰胺基邻位上有两个甲基，有很大空间位阻，水解较为困难。（利多卡因在80%的硫酸溶液中加热才能水解）,水解后显芳伯氨基特性具有芳酰胺结构共性。在酸性溶液中水解成芳伯氨基，发生重氮化偶合反应。,弱碱性侧链中具有叔胺或伯胺N原子，显弱碱性，能与酸成盐，且能与生物碱沉淀试剂或重金属离子反应。,酚羟基特性具有酚羟基或水解后能产生酚羟基（对 乙酰氨基酚），可与FeCl3作用呈色。,与重金属离子发生沉淀反应酰胺氮在水溶液中与铜离子或钴离子配位，生成有色配位化合物沉淀，能溶于氯仿等有机溶剂后呈色,水解产物易酯化对乙酰氨基酚和醋氨苯砜水解后产生醋酸，可在硫酸介质中与乙醇反应，发出醋酸乙酯的香味。,三、鉴别试验,（一）重氮化偶合反应 芳香第一胺类鉴别反应,直接：盐酸(氯)普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺，对氨基水杨酸钠的鉴别。,盐酸普鲁卡因鉴别（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。,间接：对乙酰氨基酚(盐酸溶液水解)、醋氨苯砜(硫酸溶液水解)、贝诺酯(酸水解)等的鉴别。,对乙酰氨基酚鉴别（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。,特例：盐酸丁卡因的鉴别（具芳仲胺氮）,可与具有芳伯氨基的同类药物区分,（二）三氯化铁反应 可鉴别对乙酰氨基酚的鉴别，显蓝紫色。,（三）与重金属离子反应 1.与铜和钴离子反应,可用于盐酸利多卡因的鉴别,2羟肟酸铁盐反应盐酸普鲁卡因胺的鉴别,具有酰胺结构的药物,羟肟酸,羟肟酸铁,（四）水解产物的反应,1.盐酸普鲁卡因的鉴别,鉴别（2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。,2.苯佐卡因的鉴别,鉴别（2）取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5m1，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。,（五）制备衍生物测熔点,1三硝基苯酚衍生物,盐酸利多卡因的鉴别鉴别 取本品0.2g，加水20ml溶解。（1）取溶液10ml，加三硝基苯酚试液10ml，即生成沉淀；滤过，沉淀用水洗涤后，105干燥，依法测定（附录C），熔点为228232，熔融时同时分解。盐酸布比卡因的鉴别也采用该方法,2.硫氰酸盐衍生物,盐酸丁卡因的鉴别鉴别 取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80干燥，依法测定（附录C），熔点约为131。,盐酸布比卡因的鉴别鉴别 取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录A）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.530.58与0.430.48。醋氨苯砜等的鉴别也采用UV方法,（六）UV,（七）IR,盐酸普鲁卡因，盐酸普鲁卡因胺等鉴别 本品的红外光吸收图谱与对照的图谱一致。,四、特殊杂质检查,（一）对乙酰氨基酚1.乙醇溶液的澄清度与颜色杂质来源 原料药生产时所用催化剂铁粉 中间体对氨基酚的有色氧化产物方法为与浊度标准液进行比较,2.有关物质杂质来源 中间体、副产物及分解产物 检查方法 TLC对氯乙酰苯胺 杂质对照品法,3.对氨基酚,杂质来源 中间体、水解产物,反应原理,对乙酰氨基酚无此反应,检查方法 对照法（原料药）,取本品1.0g，加甲醇溶液（12）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50g用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005）。,制剂均采用高效液相色谱法,（二）.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查,检查方法 TLC 杂质对照品法,杂质来源 水解产生,精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含30g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各10 l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（141 1 4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。,（一）亚硝酸钠滴定法 1.原理 具芳伯氨基(或潜在)的药物,五、含量测定,具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺基药物（对乙酰氨基酚等）经水解，也可用本法测定。,2.主要测定条件（1）加入适量KBr加速反应 KBr为催化剂,NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2O,在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：,（1）K1,（2）K2,K1 300 K2 加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所以能加快重氮化反应速度,不同矿酸的种类及其浓度对反应的影响,在不同酸中重氮化反应的速度为：HBrHCl H2SO4 HNO3HBr昂贵，多用HCl，为加快反应速度，往往加适量KBr，使得HCl与 KBr其到HBr的作用，Ch.P规定加入量2g。,（2）加过量的盐酸加速反应 反应摩尔比为1:2 加入量约1：2.56；加入过量盐酸的有利于：重氮化反应速度加快；重氮盐在酸性溶液中稳定；防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果,（3）室温条件下滴定 提高温度既加快正反应速度，也加快逆反应速度，所以滴定一般在室温（1030）下进行，15 以下结果较准确。,（4）滴定速度：先快后慢 重氮化反应速度较慢，故滴定速度不宜太快。为避免亚硝酸挥发和分解，滴定管尖端插入液面下2/3处，滴定液一次大部分放下，近终点时方改为慢速滴定。,3.指示终点的方法（1）永停滴定法,永停滴定法（附录A）用作重氮化法的终点指示时，调节R1使加于电极上的电压约为50mV。取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水40ml与盐酸溶液（12）15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾2g，插入铂铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。,（2）电位法,（3）外指示剂法,（4）内指示剂法,4.测定举例 盐酸普鲁卡因 取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录A），在1525，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的C13H20N2O2HCl,（三）紫外分光光度法 对乙酰氨基酚在0.4氢氧化钠溶液中，于257nm波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含量测定。,（二）非水溶液滴定法具弱碱性氮原子。醋酸溶剂，高氯酸滴定，结晶紫指示剂，需加入醋酸汞消除盐酸对滴定的干扰。,对乙酰氨基酚 取本品约40mg，精密称定，置25ml量瓶中，加0.4氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5m1，置100ml量瓶中，加0.4氢氧化钠溶液10m1，加水至刻度，摇匀，在257nm的波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系数 为715 计算，即得。,原料药 吸收系数法,USP 对照法,（四）HPLC法 盐酸普鲁卡因注射液,可同时测定盐酸普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸 离子抑制色谱法 内标法定量,1盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有（）A.重氮化偶合反应B.羟肟酸铁盐反应C.氧化反应D.磺化反应E.碘化反应,2采用亚硝酸钠法测定含量的药物有（）A.苯巴比妥B.盐酸丁卡因C苯佐卡因D.醋氨苯砜E.盐酸去氧肾上腺素,3下列药物中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者（）A.乙酰水杨酸B.对氨基水杨酸钠C.对乙酰氨基酚D.普鲁卡因E.苯佐卡因,4.亚硝酸钠滴定法中，加KBr的作用是()。防止亚硝酸逸失 B.防止重氮盐分解 C.延缓反应 D.加速反应 E.使终点清晰,5亚硝酸钠滴定法中，可用于指示终点的方法有（）A.自身指示剂法B.内指示剂法C.永停法D.外指示剂法E.电位法,6.以下那种药物中应检查对氨基苯甲酸（）A.盐酸普鲁卡因B.盐酸普鲁卡因胺C.注射用盐酸普鲁卡因D.盐酸普鲁卡因胺片E.盐酸普鲁卡因注射液,7.盐酸普鲁卡因采用亚硝酸钠滴定法测定含量时的反应条件是（）A.强酸B.加入适量溴化钾C.室温（1030）下滴定D.滴定管尖端深入液面E.永停法指示终点,第二节 苯乙胺类药物的分析,（一）、基本结构与典型药物,*,具有烃胺侧链，属于芳烃胺类药物。多数在苯环上有12个羟基取代基。如在苯环3、4位上有羟基取代，则为儿 茶酚胺类药物。,常见的苯乙胺类药物,盐酸克仑特罗,硫酸沙丁胺醇,（二）主要性质,1.脂烃胺基侧链含仲胺氮，显弱碱性 2.酚羟基，易氧化变色，可发生三氯化铁反应 3.具手性碳原子，具旋光性,4.溶解性 游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水,二、鉴别试验,1 与三氯化铁反应具酚羟基的药物，可用此法鉴别,Ar-OHFeCl3,络合显色 碱液,紫色或紫红色,氧化反应 酚羟基易被碘、过氧化氢、铁青酸钾等氧化剂氧化呈现不同颜色 肾上腺素在酸性条件下，被过氧化氢氧化为血红色肾上腺素红,与甲醛硫酸反应 某些药物与甲醛在硫酸中反应，形成具有醌式结构的有色化合物 如：肾上腺素显红色，盐酸异丙肾上腺素显棕色至暗紫色，重酒石酸去甲肾上腺素显淡红色。UV与IR 具紫外及红外吸收可用于鉴别,5.与亚硝基铁氰化钠反应（Rimini反应）脂肪族伯胺的专属反应,可用于重酒石酸间羟胺,6 双缩脲反应 是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，盐酸去氧肾上腺素鉴别 盐酸麻黄碱的鉴别如下：,D CuSO4+NaOH,显蓝紫色,乙醚，醚层(紫红色)水层(蓝色),(一)酮体检查 本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得，若氢化不完全，易引入酮体杂质。采用UV法检查：原理：利用酮体在310nm有吸收，本类药物无吸收。例如：肾上腺素本项检查 配2.0mg/ml=310nm A0.05 盐酸去氧肾上腺素 配2.0mg/ml=310nm A0.02 盐酸异丙肾上腺素 配2.0mg/ml=310nm A0.15,三、特殊杂质检查,(二)有关物质的检查 盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇TLC 盐酸苯乙双胍-PC 盐酸氨溴索HPLC采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。,盐酸氨溴索的检查方法对照样品制备：本品供试品溶液对照溶液供试样品制备：本品甲醇溶解加甲醛溶液加热吹干溶剂用水和流动相溶解HPLC分析色谱条件：RP-HPLC 0.01mol/lNH4H2PO4-CH3CN(50:50);248 nm分析：对照溶液主成分峰为满量程的2025%，记录至主成分峰保留时间的2倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之一。,（三）盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查 检查方法：纸色谱法（PC）分离后，洗脱，照分光光度法于232nm波长处测定吸收度，控制吸收度以控制有关双胍的量,样品制备：本品甲醇溶解即得展开：7.550 cm，EtOAc-ethanol-water(6:3:1)显色：10铁氰化钾10亚硝基铁氰化钠10NaOH检测：剪下显色斑点后甲醇萃取用UV法测定,四、含量测定,（一）非水溶液滴定法 原料药 脂烃胺基侧链，显弱碱性,（二）溴量法 盐酸去氧肾上腺素及其注射液、重酒石酸间羟胺,（三）紫外分光光度法与比色法 盐酸克仑特罗栓具芳伯氨基，可发生重氮化偶合反应,对照法定量,（四）提取酸碱滴定法 硫酸苯丙胺及其制剂,盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂,游离碱不溶于水，易溶于有机溶剂,依据性质,碱化,有机溶剂提取,（五）HPLC法,重酒石酸去甲肾上腺素注射液 离子对反相高效液相色谱法 内标法定量 调节溶液pH为3.8，加入离子对试剂十二烷基磺酸钠,例1.能和重酒石酸去甲肾上腺素发生颜色反应的试液为（）A.浓硫酸B.甲醛试液C.氨试液D.甲醛硫酸试液E.茚三酮试液,例2.盐酸异丙肾上腺素的检查项目是（）A.有关物质B.二苯酮C.盐酸D.醛E.酮体,练习与思考,A型题,1盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是A.水杨醛 B.间氨基酚 C.水杨酸 D.对氨基苯甲酸 E.氨基酚2对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是A.水杨醛 B.间氨基酚 C.对氨基酚 D.苯甲酸 E.苯酚3肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是A.水杨醛 B.间氨基酚 C.对氨基酚 D.酮体 E.苯甲酸,B型题,A。硫酸铜反应 B.氧化反应 C.还原反应 D.水解后重氮化-偶合反应 E.重氮化-偶合反应 1.盐酸利多卡因 2.肾上腺素 3.盐酸普鲁卡因 4对乙酰氨基酚,A,B,E,D,X型题,1.直接能与FeCl3产生颜色反应的药物有A。盐酸普鲁卡因 B.盐酸去氧肾上腺素 C.对乙酰氨基酚 D.盐酸利多卡因 E.盐酸丁卡因 2.直接和水解后能发生重氮化-偶合反应的药物有A。盐酸丁卡因 B.盐酸普鲁卡因 C.对乙酰氨基酚 D.对氨基酚 E.盐酸肾上腺素,简答题：1、简述亚硝酸钠法的滴定原理和应注意的实验条件？2、简述对氨基苯甲酸酯类药物的基本理化性质和鉴别法？,第三节：苯丙胺类药物的分析,一 基本结构与主要性质,ACE抑制剂,马来酸依那普利,盐酸贝那普利,代表药物,西那普利,赖诺普利,主要性质1、酸碱性：分子中含有-COOH，显酸性；含有烃氨链，显弱碱性2、氨基酸特性：结构是脯氨酸的衍生物3、光学活性：分子中含有不对称中心，具有旋光性4、水解特性：本类药物大多是前体药物，在体内转化为活性代谢物,二、鉴别试验,(一)、物理与化学鉴别法1、熔点测定法BP(马来酸依那普利）2、高锰酸钾反应红色消失（氧化还原反应鉴别马来酸依那普利及其片剂及胶囊）3、溴间苯二酚反应：先进行溴代反应，使溴颜色消失，再与间苯二酚反应，显棕红色4、羟胺三氯化铁反应：先进行羟胺的生成（羟胺甲醇液KOH乙醇液）FeCl3 显棕红色,（二）、旋光法,（三）、光谱与色谱法鉴别,三、特殊杂质的检查,1、马赖酸依那普利有关物质的检查：依那普利那依那普利双酮采用HPLC法检查2、西那普利中有关物质的检查：A、B、C、D四个主要杂质杂质A-TLC法检查（硅胶G板，目视比较），不得超过0.1BP杂质B、C、D及其它杂质HPLC法，分别不得超过0.5、0.1、0.2和0.1BP,（三）残留溶剂的测定,1、马赖酸乙那普利中残留溶剂乙腈的检查 capillary GC法0.041样品溶液的制备：本品加二甲基甲酰胺溶解100mg/ml对照溶液的制备：取乙腈加二甲基甲酰胺溶解40g/ml分析方法：PEG-20M为固定液的毛细管柱，FID检测器，程序升温洗脱：,四、含量测定,一、酸碱滴定法：利用本类药物结构中的-COOH和氮原子氨基，可进行酸碱滴定法进行含量分析1、非水滴定法 马赖酸依那普利非水碱量法滴定，以冰醋酸和无水二氧六环为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸为滴定液,2、水溶液中的滴定马赖酸依那普利：供试品新沸过的冷水溶解NaOH滴定电位法指示终点3、在醇水混合溶液中滴定 供试品甲醇和水溶解后进行碱液滴定（雷米普利和西拉普利）,二、HPLC法,举例说明：马赖酸依那普利片的含量测定色谱条件：C8柱，乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，检测波长215 nm，柱温50色谱系统适用性：n300，T2.0,主峰与其它杂质峰的R4.0进样与计算：20 l，外标法定量,