葡萄糖淀粉酶.ppt

,淀粉酶,葡萄糖淀粉酶GA,基本结构,三个功能区,基本结构,黑曲霉糖化酶,GA,GA,催化域CDO-糖基化域淀粉结合域SBD,不含淀粉结合域SBD，少数甚至不含O-糖基化域,催化域CD结构,含13股-螺旋，折叠成桶状（/）6结构，桶的核心为一个口袋状，催化中心位于其中,催化机制,酸碱催化,连接域结构,起连接CD和SBD的作用，一般被O-糖基化修饰不同真菌来源的糖化酶该区域的氨基酸序列可变性较大在生物活性条件下，甘露糖比半乳糖更容易以O-方式连接到连接域的Ser和Thr残基上,连接域结构与功能的关系,GAGpI:增加了一段重复的O-糖基化连接域,2个重组蛋白酶,GA470-493：缺少O-糖基化连接域中Ala470-Thr493氨基酸序列,结果：GAGpI的热稳定性及PH稳定性都有所提高，这主要是由于它含有额外的O-糖基化连接域，增加了糖基化位点，因此碳水化合物的含量也增加,淀粉结合域结构,具有八条折叠股，形成两个主要的片层：第一个包括五个反平行的链，第二个包括一个平行和一对反平行的链,淀粉结合域功能,使得不溶性底物与溶液中的酶相互作用,使底物结合到催化区域的活性位点上,破坏淀粉颗粒的表面，提高淀粉水解率,水解过程,先为吸附，然后形成一种复合体，破坏维系淀粉分子螺旋结构的氢键，然后不断水解淀粉的糖苷键，水解使得淀粉颗粒的表面形成一系列的空穴，最后达到破坏淀粉结构的效果。,水解速率,实际应用中存在的问题及拟解决途径,水解-1,6糖苷键的性能差,热稳定性不够,PH稳定性低,1.添加普鲁兰酶2.改变CD中回环3和回环5结构,1.定点突变某些氨基酸2.选用产糖化酶稳定性高的菌株,定点突变,Thank you,