尿液蛋白质检验一.ppt
病例,患者，男，68岁，因浮肿、无尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用庆大霉素和复方新诺明而出现浮肿，尿量进行性减少。体格检查：眼睑浮肿，双下肢可凹性水肿。1.初步诊断为什么疾病？2.要明确诊断需要哪些进一步的实验室检查？,急性肾小管坏死,尿液蛋白质检验,Urine Protein Analysis,黄 辉,教学目标,了解蛋白尿的定义,理解蛋白尿形成的原因和机制,掌握尿液蛋白质检查的检测原理、方法学评价、质量保证及临床意义,教学内容,蛋白尿形成的原因和机制,尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质检验的临床意义,一、蛋白尿的定义,肾小球的滤过,肾小管与集合管的重吸收,肾小管的分泌,正常人尿液中蛋白质的含量很少！,一、蛋白尿的定义,健康人尿液蛋白质含量很少，当尿液蛋白质超过150mg24h-1或超过100mgL-1时,蛋白质定性试验为阳性称为蛋白尿(proteinuria)。,二、蛋白尿形成的原因和机制,肾性蛋白尿renal proteinuria,肾小球性蛋白尿glomerular proteinuria,混 合 性 蛋 白 尿mixed proteinuria,肾小管性蛋白尿tubular proteinuria,二、蛋白尿形成的原因和机制,肾前性蛋白尿prerenal proteinuria,溢出性蛋白尿overflow proteinuria,二、蛋白尿形成的原因和机制,肾后性蛋白尿postrenal proteinuria,组织性蛋白尿histic proteinuria,二、蛋白尿形成的原因和机制,肾小球性蛋白尿：蛋白尿的选择性,选择性蛋白尿：肾小球损伤程度较轻，以分子量49万中相对分子量的白蛋白为主。,非选择性蛋白尿：肾小球损伤程度较重，尿液中大分子量蛋白质和中分子量蛋白质同时存在。,二、蛋白尿形成的原因和机制,二、蛋白尿形成的原因和机制,三、尿液蛋白质的检验,尿液中有无蛋白质？,尿液中蛋白质的量？,尿液中有哪一类蛋白质？,三、尿液蛋白质的检验,蛋白质理化性质,蛋白质的两性电离和等电点,蛋白质的变性,蛋白质的沉淀,蛋白质的呈色反应,尿液蛋白质定性,加热乙酸法,磺基水杨酸法,干化学试带法,三、尿液蛋白质的检验,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定性：加热乙酸法,蛋白质,加热,蛋白质变性,蛋白质沉淀,稀乙酸,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定性：加热乙酸法,方法经典而准确，为蛋白定性确证实验；特异性强，干扰因素少；灵敏度较低，为150mg/L；pH值、盐离子浓度对实验结果的影响。,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定性：磺基水杨酸法,蛋白质,酸性条件,氨基酸阳离子,蛋白盐沉淀,磺酸根离子,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定性：磺基水杨酸法,操作简便、反应灵敏、结果显示快；检测灵敏度高，为50mg/L；造影剂、青霉素钾盐等可以造成假阳性。,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定性：干化学试带法,蛋白质,酸碱指示剂,复合物,+,酸碱指示剂电离,发生颜色改变,尼龙膜层：防止大分子物质对反应污染。,碘酸盐层：破坏维生素C等干扰物质。,试剂层：与尿中所检测化学物质发生反应。,支持层：塑料片，起支持作用。,试带组成,尿液蛋白质的检验,尿干化学分析仪工作原理示意图,机械系统,光学系统,电路系统,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定性：干化学试带法,操作简便、快速、易于标准化；对球蛋白、本周蛋白的敏感度低；不同类型试带灵敏度有一定的区别，在70100mg/L。,三、尿液蛋白质的检验,如何选择这些定性方法？,尿液蛋白质定性,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定性,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定性,采用干化学法或磺基水杨酸法进行尿蛋白初查。,加热乙酸法作为尿蛋白定性确证实验。,当不同定性实验方法结果不一致时如何处理？,三、尿液蛋白质的检验,1.尿液中存在的蛋白质为球蛋白。,加强与临床医师的沟通非常必要！,磺基水杨酸法阳性，干化学试带法为阴性,2.蛋白质含量介于两种方法灵敏度之间。,3.尿液中含有青霉素或者造影剂等物质。,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定量,双 缩 脲 法,比 浊 法,染料结合法,需要对尿液标本进行浓缩处理！,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定量,三、尿液蛋白质的检验,如何选择这些定量方法？,尿液蛋白质定量,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质定量,1.根据实验室条件选择合适的定量方法。,2.卫生部临检中心推荐双缩脲法和丽春红S法。,3.加强尿液蛋白质定量的质量控制非常必要！,尿液蛋白质分类,SDS-PAGE凝胶电泳,双向凝胶电泳,三、尿液蛋白质的检验,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质分类：SDS-PAGE凝胶电泳,SDS与蛋白质结合，消除了蛋白质分子中的电荷差异，再通过聚丙烯酰胺的分子筛作用，将蛋白质按分子量大小相互分离。,三、尿液蛋白质的检验,尿液标本,葡聚糖、PEG等,SDS-PAGE凝胶电泳,染色、光密度扫描,1 肾小球性蛋白尿2 肾小管性蛋白尿3 生理性蛋白尿4 混合性蛋白尿,三、尿液蛋白质的检验,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质分类：双向凝胶电泳,蛋白组学的重要技术，第一向基于蛋白质的等电点不同进行分离，第二向则按蛋白质分子量的不同进行分离。,三、尿液蛋白质的检验,尿液蛋白质分类,1.SDS-PAGE凝胶电泳用于对尿液蛋白质进行分类。,2.双向凝胶电泳主要用于科学研究。,三、尿液蛋白质的检验,三、尿液蛋白质的检验,质量保证,分析前质量控制；分析中质量控制：坚持室内质控、遵守SOP操作规程、注意实验过程中的影响因素；分析后质量控制：完善的报告审核制度，结果不符合时及时分析原因。,生理性蛋白尿病理性蛋白尿,四、尿液蛋白质检验的临床意义,肾前性蛋白尿肾性蛋白尿肾后性蛋白尿,功能性蛋白尿（functional proteinuria）体位性蛋白尿(postural proteinuria)偶然性蛋白尿(accidental proteinuria),四、尿液蛋白质检验的临床意义,生理性蛋白尿,病理性蛋白尿,四、尿液蛋白质检验的临床意义,患者，男，68岁，因浮肿、无尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用庆大霉素和复方新诺明而出现浮肿，尿量进行性减少。体格检查：眼睑浮肿，双下肢可凹性水肿。1.初步诊断为什么疾病？2.要明确诊断需要哪些进一步的实验室检查？,病例,急性肾小管坏死,课堂小结,尿液标本,蛋白质定性,干化学试带法磺基水杨酸法,蛋白质定量,染料结合法比浊法,蛋白质分类,思考题,自主设计实验,合成三种人工尿液，要求：,Thanks!,
