实验一血涂片及骨髓片.ppt

血涂片及骨髓片的制备及瑞氏染色,一、目的,掌握血涂片、骨髓涂片的制作及染色技术。鉴别外周血中各种白细胞的形态特点及分类计数方法。,二、原理,瑞氏染液是由伊红美兰所组成的复合物，经物理吸附及化学作用对细胞进行染色。,三、材料,血针、玻片、酒精棉光学显微镜、香柏油、二甲苯、一次性采血针,四、方法,血涂片的制作 采血：每组两个同学，练习耳垂采血（包括消毒、扎针、挤压、取血），用推片取血液一滴，于玻片右端，从其右侧接触血液，使之成40度角，均匀平稳地向左侧推进，至血滴推尽为止，其厚度要适中，且有头体尾之分。待血片干后，滴加瑞氏染液数滴（盖住血膜），静置40 秒，加缓冲液等量混匀，染1020分钟，用水冲洗，干燥后镜检。镜检计数：在血膜头尾交界处，计数100个白细胞，并对其进行分类。,骨髓片的制备,将临床医生所取骨髓至玻片高端（在准备涂片时，将两玻片倾斜放置），使过多血液流下。蘸取骨髓适量（选择骨髓小粒部分），以3045度角，用力推开，速度适宜。然后将玻片于空中挥动，使之干燥，以免细胞缩小或细胞皱缩。骨髓片制备好后，用标记笔在膜的头部注明病人的姓名、取材部位及穿刺部位。,五、结果,杆状核粒细胞(Stab Granulocyte)细胞呈圆形，直径1015um。胞核狭长，弯曲呈带状，两端钝圆。核染色质粗糙呈块状，染深紫红色。胞质中含特异性颗粒的不同，也可分为中性、嗜酸性、嗜碱性杆状核粒细胞三种，颗粒特点同中幼粒细胞。,中性分叶核细胞细胞呈圆形，直径1015um。胞核常分为25叶，以分3叶者多见，叶与叶之间有细丝状相连或完全断开，核染色质浓集或呈小块状，染深紫红色。胞质丰富，呈淡红色，布满细小紫红色的中性颗粒。,嗜酸粒细胞嗜酸粒细胞胞体直径1116um，胞核多分为近似对称的两叶。胞质中充密集粗大、大小均匀的桔红色嗜酸性颗粒。,嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞胞体直径10-12um胞核分叶不明显，或融合呈堆集状。胞质中有稀疏的大小不一、分布不均、呈紫黑色的嗜碱性颗粒，颗粒常掩盖在核上，致使核的轮廓和结构模糊不清。,大淋巴细胞呈圆形，直径13-18um。胞核圆形或椭圆形，偏于一侧或着边。染色质常质密呈块状，排列均匀，深染呈深紫红色。胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量大而稀疏的嗜天青颗粒。,小淋巴细胞呈圆形或椭圆形，直径6-10um胞核圆形或椭圆形，或有切迹，核着边，染色质粗糙致密，呈大块状，染深紫红色。胞质量极少，仅在核的一侧见到少量淡蓝色胞质，有时几乎不见而似裸核，一般无颗粒。,单核细胞(Monocyte),圆形或不规则形，直径12-20um，边缘常见伪足突出。胞核形状不规则，常呈肾形、马蹄形、笔架形、“S”形等，并有明显扭曲折叠。染色质疏松细致，呈淡紫红色丝网状。胞质丰富，呈淡灰蓝色或淡粉红色，可见多数细小、分布均匀、细尘样淡紫红色颗粒。,血 小 板 直径2-5um，约为成熟红细胞的1/4-3/4，类圆形，星形与不规则形，淡红色，无核。,成熟红细胞 正常形态呈双凹盘形，直径7.5um，瑞氏染色为红色中心稍淡染,