《药物分析》维生素类药物的分析.ppt
第九章 维生素类药物的分析 Analysis of Vitamines,维生素A维生素B1维生素C维生素E,第一节 维生素A(Vit A),2-Cis Neovitamin Aa 2,6-dicis Isovitamin Ab4-Cis Neovitamin Ab2,4-dicis Neovitamin Ac6-Cis Isovitamin Aa,Retinol(Vit A alcohol),VA acetate,VA polmitate,Vit A含量表示,I.U.(international Unit)国际单位效价(I.U./g)按WHO规定 VA acetate VA alcohol效价(I.U./g)2.907106 3.33106 1g pure VA acetate 2.907106I.U.,按WHO规定 VA acetate,VA alcohol,Vit A含量表示,I.U.(international Unit)国际单位,效价(I.U./g),效价(I.U./g)2.907106,3.33106,1g pure VA acetate 2.907106I.U.,第一法,测定VA acetate 环己烷为溶剂 max328nm,Vit A UV法校正公式,第一法 A328(校正)=3.25(2A328-A316-A340),若 在3%范围，则仍以A328计算含量,若 在-15%-3%范围，则以A325(校正)计算含量,若 3%，或-15%，则采用第二法,第二法 测定其他维生素,第一法未通过，包括：,则A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334,酯 乙醚提取VA醇，洗涤，过滤 溶于异丙醇,在 300，310，325，334nm处分别测A当max为323327nm，A300nm/A325nm0.73,若 在3%范围，则仍以A325计算含量,若max不在323327nm，或者 A300nm/A325nm0.73,表明干扰杂质含量过高，则可采用色谱法将未皂化部分纯化后再进行测定,第一法 A328(校正)=3.25(2A328-A316-A340),Vit A sample,pure VA acetate,impurities,校正公式由来,用几何图形推导出公式,A325(校正)=7A325-2.625A310-4.375A334,比实际值高出2.62.7%故扣除2.65%得第二法校正公式,A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334,称取Vit A滴剂0.1082g(标示量50 000I.U./g)，加环已烷至50.0ml，取出5.0ml置于另一50 ml量瓶中，加环已烷至刻度，摇匀后置石英比色皿中，以环已烷为空白，分别于以下波长处测得相应的吸收度值，试求此滴剂中Vit A的标示量百分率：,精密称取Vit A滴剂0.06126g(标示量50000 I.U./g)，置于25ml量瓶中，加环已烷至刻度，精密吸取2ml置于另一25ml量瓶中，加环已烷至刻度，并混匀，置石英比色皿中，以环已烷为空白，分别于以下波长处测得吸收度值，试求此滴剂中Vit A为标示量的百分含量：,第二节 维生素B1(Vit B1),H2O,结构特点与鉴别,噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素B1所特有,生成沉淀反应,分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂(碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸，雷氏盐等作用形成组成恒定的沉淀,维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S,与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS,含量测定 Assay,硅钨酸重量法 Silicotungstic Acid Gravimetry,非水溶液滴定法 Non-aqueous Titrimetry,硫色素荧光法 Thiochrone Fluoremetry,Vit B1 硅钨酸重量法,2Vit B1+过量硅钨酸*,第三节 维生素C(Vit C),L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸,有生物活性 有生物活性 无生物活性,H2O,含量测定,碘量法,2,6-二氯靛酚法,第五节 维生素E(Vit E),Vit E(dl-Tocopheryl Acetate),-Tocopheryl 52.0 68.0,-Tocopheryl 9.3 22.0,-Tocopheryl 28.0 5.0,-Tocopheryl 10.7 5.0,ChP VE 中检查生育酚,取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml,固定液：5%SE30柱 温：25510检测器：FID内 标：十六酸十六醇酯,鈰量法(%)GC(%)97.91 83.53 97.99 82.51 98.48 85.09,14.54VE,24.40内标,中国药典 维生素E色谱条件与系统适应性试验 System Suitability Tests SST,以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2%；柱温为265，理论板数按VE峰计算，应不低于500，VE峰与内标峰的分离度应大于2。内标：正三十二烷,校正因子测定,取正三十二烷适量，加正已烷溶解并稀释成每1ml中含1.0g的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取Vit E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解；取13l注入气相色谱仪，计算校正因子测定法 取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解；取13l注入气相色谱仪，测定，计算，即得,JP Vit E:dl-生育酚,色谱柱：ODS 1530cm4mm 510m流动相：甲醇-水(491)流 速：调整到生育酚的tr10minUVD：292nm R2.6人血清中VA和VE的含量测定Waters-Bondapak C18 30cm3.9mm Resolve C18 预柱甲醇-水(964)，1.2ml/minUVD：08min 330nm 8min后 292nm血清样品的制备血样离心后，分离血清，置5ml塑料试管中，充N2密封，于-40保存备用,4,6 Cholestadienol,USP 24,Cleanup column 30cm4.6mm C8Mobile phase A CH3CNCH3OHH2O 25 25 1 The amount of H2O&the flow rate may be varied to meet system suitability requirement.,Analytical column 25cm4.6mm porous silica particle 510m,Mobile phase B n-amyl alcoholDehydrated hexane 3 1000,UVD：254nm,
