实验四植物总基因组DNA的提取.ppt

实验四 植物总基因组DNA的提取,指导老师：苏 乔 副教授 电话：84706356-606,概 述,1、总基因组DNA一般为109左右；所分离的 DNA大小通常50Kb2、液氮研磨破壁3、植物细胞中储存了大量的、种类繁多的次生物质，如多酚等，与DNA共沉淀抑制限制性内切酶和Taq DNA聚合酶的活性，因 此在提取缓冲液中通常加入-巯基乙醇、PVP等,4、在低浓度琼脂糖凝胶（0.65%)中，加入约 50-100ng样品DNA，并排依次加入25-200ng未经酶解的 DNA标准，高相对分子质量DNA应为一条靠近 DNA的清晰条带。比较样品DNA条带与 DNA标准条带的亮度，即可对样品DNA进行定量。,CTAB改进提取法提取的植物基因组DNA M：Marker；1-4：烟草；5、6：玉米；7、8：小麦；9、10：大豆；11、12：红薯,技术要点及注意事项,1、新鲜材料2、液氮研磨后迅速转移到提取缓冲掖中，迅速上下摇晃，充分混匀，尽量缩短叶片在室温放置的时间3、一旦DNA释放出来，应尽量降低剪切破坏程度：转移上清时将微量移液器吸头剪去部分以减少剪切；混合操作时应轻缓,思 考 题,在实验过程中应注意哪些步骤才能获得较完整的大分子量基因组DNA,再 见！,