实验六聚合酶链式反应.ppt

生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,实验六 聚合酶链式反应,指导老师：苏 乔 副教授 电话：84706356-606,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,概 述,1、常用PCR反应条件94 5min 94 30s 72 7min 4 55 45s 35cycle 72 1min 退火温度根据扩增特异性调整延伸时间根据扩增片段长度调整,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,2、防止污染，设置严格的对照体系，包括：阳性对照 空白对照 阴性对照,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,植物基因组中actin基因片段的电泳图1-3：小麦；4-6：烟草；7-9：玉米；10-12：大豆 M：DL2000 E：空白对照,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,3、如果PCR扩增出现非特异条带，解决方 案包括：a.提高退火温度 b.Hot-start PCR c.Touch-down PCR d.重新设计引物,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,技术要点及注意事项,1、同时进行多个PCR反应，仅DNA样品 不同，可配置反应混合液后分装2、常用模板量：质粒DNA 植物DNA 可设计梯度实验进行优化,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,思 考 题,1、如何确定PCR反应体系正常且无污染？2、如果PCR扩增中出现非特异条带，其可能的原因是什么？应如何解决？,生物科学与工程系生物化学实验教学研究室,再 见！,