实验三 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用.ppt

实验三丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用,一 实验目的（Experimental Objectives）：1掌握竞争性抑制作用的概念和特点。2了解影响酶活性的其它因素。3分析实验现象。,二、实验原理(Experimental Principles)：影响酶活性的因素：温度 pH值 激活剂 抑制剂,对酶活性的抑制作用分类,不可逆性抑制作用 竞争性抑制作用 反竞争性抑制作用,可逆性抑制作用,非竞争行抑制作用,竞争性抑制作用,抑制剂(I)与底物(S)的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制作用称为竞争性抑制作用。,反应模式,SI：高浓度的底物可解除抑制,竞争性抑制作用特点,1、I结构常与S结构类似2、I/S与酶的结合部位相同:酶的活性中心3、S可以降低甚至消除抑制作用4、(表观）Km值增大，Vm值不变,无氧,丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶,甲烯蓝（MB）,甲烯白（MBH2）+FAD,三、实验材料、主要仪器和试剂（Equipments,Materials and Agents）,（一）主要仪器：离心机、恒温水箱。（二）主要试剂：10.2mol/L 琥珀酸20.02mol/L 琥珀酸30.2mol/L 丙二酸40.02mol/L 丙二酸上述四中溶液调节pH值为7.4。50.02%甲烯蓝61/15mol/L的Na2 HPO4,四、操作步骤（Operating Procedure）,1 酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g左右，加入1/15mol/L的Na2 HPO4溶液5ml研成糊状后，再加入5ml1/15mol/L的Na2 HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中，2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其它试管备用。,2、取试管5支，按照下列表格操作：,3、各管混匀后，沿试管的内壁加入石蜡油（隔绝空气），放置到37水浴中保温，观察各管甲烯蓝的褪色情况，并记录褪色的所需要的时间，解释其现象。,五、结果与分析：（Results and Analysis）根据实验的现象，观察得到的结果，并解释其相关的实验现象。为什么滴石蜡油？六、思考题：(Questions)什么叫酶的竞争性抑制作用？举例说明在医学上的应用。,七.注意事项：(Notices)1注意密切观察颜色变化。2加入各种试剂要注意看清标签，不能混用各试剂瓶瓶盖。,