实验一蛋白质的两性反应及等电点的测定.ppt

实验一 蛋白质的两性反应及等电点的测定,一、实验目的,1、了解蛋白质的两性解离性质。2、初步学会测定蛋白质等电点的方法。3、学会正确使用吸量管吸量试液。,二、实验原理,蛋白质分子除含有一定的自由氨基和羧基外，还含有酚基、巯基、胍基、唑基等，因此，蛋白质和氨基酸一样也有两性电离的性质。在溶液中，蛋白质的解离状态受溶液酸碱度影响，酸性溶液中蛋白质解离成阳离子，碱性溶液中则解离成阴离子。等电点时，蛋白质分子所携带的正负电荷相等，以兼性离子存在，在电场中不向正负电极移动，在溶液中溶解度最小，容易沉淀析出。,不同的蛋白质等电点不同，可利用溶解度来测定其等电点。向各种不同pH值的缓冲溶液中加入酪蛋白，以沉淀出现最多的缓冲液的pH值为酪蛋白的等电点。,等电点时，蛋白质以兼性离子存在，容易沉淀析出。,三、试剂和器材1、试剂（1）0.5%酪蛋白溶液（2）酪蛋白乙酸钠溶液：称取纯酪蛋白0.25克，加蒸馏水20毫升及1.00 mol/L氢氧化钠溶液5毫升(必须准确)，摇荡使酪蛋白溶解。然后加1.00 mol/L醋酸5毫升(必须准确)，倒人50毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀，结果是酪蛋白溶于0.10 mol/L乙酸钠溶液中，酪蛋白的浓度为0.5%。（3）0.01溴甲酚绿指示剂。（4）0.02 mol/L盐酸溶液。（5）0.10 mol/L醋酸溶液。（6）0.01 mol/L醋酸溶液。（7）1.00 mol/L的醋酸溶液（8）0.02 mol/L氢氧化钠溶液。,剂i,2、仪器（1）恒温水浴箱（2）温度计（3）100 mL容量瓶（4）50 mL容量瓶（5）吸量管（6）试管（7）试管架等,四、操作方法（一）蛋白质的两性反应 1、取1支试管，加0.5酪蛋白溶液20滴和0.01%溴甲酚绿指示剂57滴，混匀。观察溶液呈现的颜色，并说明原因。2、用细滴管缓慢加入0.02 mol/L盐酸溶液，随滴随摇，直至有明显的大量沉淀发生，此时溶液的pH按近于酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化。3、继续滴入0.02 mol/L盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色的变化并说明原因。4、再滴入0.02 mol/L氢氧化钠溶液进行中和，观察是否出现沉淀，解释其原因。继续滴入0.02 mol/L氢氧化钠溶液，为什么沉淀又会溶解？溶液的颜色如何变化?说明了什么问题？,剂i,剂i,（二）酪蛋白等电点的测定 1、取7支粗细相近的干燥试管，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂。加入每种试剂后应混合均匀。,剂i,剂i,2、静置约20分钟，观察每支试管中溶液的混浊度，以一，十，十十，十十十，十十十十符号表示沉淀的多少。根据观察结果指出哪一个pH是酪蛋白的等电点？该实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。实验中应严格按照定量分析的操作进行。,剂i,思 考 题何谓蛋白质的等电点？在等电点时蛋白质的溶解度为什么最低？请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质加以说明。,