天然药毒物和毒品法医毒物分析.ppt

潘爱华,Tel:87330563（o）,第六章 天然药毒物,天然药毒物的特点：,1.中毒原因复杂,2.毒物来源复杂,3.化学成分复杂,4.化学结构和理化性质差异大,5.（药）毒理作用各异且毒性差异较大,6.检材的性状、组成和含量各异,天然药毒物分析的特点：,1.确定分析目的物难,2.筛查毒物难,3.提取分离毒物难,4.检测毒物难,对策：了解常见有毒动植物和中草药的名称和俗称、来源、成分、形态、分布、用途；了解其毒性大小、中毒症状、体内过程等方面的知识；了解案情、分析案情，以寻找检验方向、合理制定分析方案。,第一节 形态学检验,天然药毒物案例，其体外检材往往都保留有原植物的部分形态特征。针对天然药毒物检材的这一特点，可应用形态学方法对天然药毒物进行检验。,第一节 形态学检验方法,1外观性状鉴别：形状，大小，颜色，表面特征，质地，折断面，气和味。2显微形态鉴别：通过对组织结构、细胞形态、细胞后含物等某些特征进行鉴别。细胞后含物是细胞中的非生命物质，是新陈代谢的积累物。后含物：营养物、代谢后废物可见形状（淀粉）；溶解状态无形物（生物碱，甙类，鞣质）形态和成分是观察的重点（特征性）。,显微形态鉴别,第二节 天然毒品,一、阿片类,中枢神经抑制剂主要包括:阿片类生物碱 海洛因（二乙酰吗啡）二氢可待因酮 二氢吗啡酮等。,半合成,鸦片类生物碱：吗啡(morphine)、可待因(codeine)、那可汀(narcotine)、罂粟碱(papaverine)、蒂巴因(thebaine)吗啡是鸦片的主要成分，具有麻醉镇痛作用；可待因是鸦片中镇咳止痛的有效成分。,种植地域：（原产地：小亚细亚）经世界卫生组织批准，只允许印度、土耳其等少数国家种植限量的罂粟。非法种植区：“金三角”：亚洲缅甸、泰国、老挝三国交界和“金新月”：阿富汗、巴基斯坦和伊朗交界,Heroin,Chasing Dragon,Injection,海洛因滥用情况简介,阿片类是当今滥用最为广泛、依赖性最强、对社会危害最大的毒品。海洛因的滥用尤为严重。,（一）毒品鉴定,1.形态学检验,（1）罂粟果（壳）的形态和性状,1）外观,与易混淆植物区别：野罂粟、丽春花（虞美人）,2）显微形态,（2）鸦片的外观性状,生鸦片：棕黑色膏状物 熟鸦片：棕色带金黄，光滑，大量掺杂物,1-4号海洛因 颜色从黑色、暗褐色、棕色到灰白色、白色,（3）海洛因外观性状,（3）海洛因外观性状,常见非法贩卖形态：粉末、压成长方块状，一般用塑料薄膜热封，外面通常用黄色不透明的胶带纸缠绕，有250g、350g等不同规格包装。零散毒品交易中的海洛因，一般用方形或长方形白纸包装，每包0.1g到1g不等。,2.阿片生物碱的检验,（1）结构性质和检材处理,吗 啡：两性，只能在弱碱性(pH8.5-9.3)从水溶液游离 析出,不溶于氯仿,溶于氯仿-醇的混合溶剂；盐 酸盐溶于水，不溶于氯仿可待因：不具两性,溶于氯仿、乙醚、乙醇等有机溶剂海洛因：溶于氯仿，盐酸盐易溶于氯仿,碱水解成单乙酰 吗啡和吗啡，镇痛作用是吗啡的4-8倍那可汀、蒂巴因、罂粟碱：碱性,盐酸盐易溶于水或氯仿,（2）显色反应（预试验）,1）甲醛硫酸（Marquis试剂）反应,2）钼酸铵硫酸（Frohde试剂）反应 吗啡、海洛因，紫转灰紫；可待因，蓝绿,3）亚硒酸浓硫酸（Mecke试剂）反应 吗啡、海洛因显深绿色 可待因显蓝绿色 罂粟碱显暗蓝色,吗啡、海洛因、可待因，显紫红色或紫堇色,（3）薄层色谱法 灵敏度较低，仅适用于体外检材 改良碘化铋钾显色,（4）高效液相色谱法,固定相：C18最普遍，氰柱分离效果较好,色谱条件：YWG-C18柱(4 6mm250mm）;流动相为甲醇:水(3:7),内含0.5%三乙胺,用冰醋酸调pH=6.8；流速1mL/min；检测波长254nm；柱温30,（5）气相色谱法,色谱柱：OV-17（12m0.53mm）载气：氮气，流速 2ml/min；柱温：起始温度 150（1min）10/min20020/min270(6min)进样口温度 260检测器温度 280。检测器：FID或NPD。,检测对象：吗啡、可待因、那可汀、蒂巴因、罂粟碱,（6）海洛因中掺杂物的检验,用于海洛因中掺杂物分析的常用方法有GC/MS、IR、UV、原子发射光谱、溶解度试验和沉淀反应等。主要掺杂物：有机小分子 掺杂物：扑热息痛、咖啡因、茶碱、苯巴比妥 分析方法：气质联用分析,气质联用分析,色谱柱：BPX-5（30m0.22mm0.25m）载气：氦气，流速 1.5ml/min；柱温：初温 160（1min)10/min280(23min)进样口温度 280传输线温度 260。质谱条件：EI电离源，电子能量70eV，离子源温度 200，扫描范围40450amu。,（二）体内海洛因及其代谢物的检测,1.体内代谢与取材,确认滥用海洛因的证据。,尿液：海洛因定性分析的最佳检材。检出时限：不超过72hr。组织和其它体液：中毒死亡案例，胆汁含量较高 血液：含量很低 毛发：一般在尿检阴性时，需了解涉毒史,2.筛查,尿液：免疫分析,3.确证,（1）检材处理：适于尿、血液、组织（匀浆）游离吗啡、O6-乙酰吗啡检测调节pH8.7,添加内标（如乙基吗啡）二氯甲烷:异丙醇（9：1）提取可酸反提净化(必要时）挥干有机溶剂衍生化（丙酰化、硅烷化等）总吗啡、O6-乙酰吗啡检测需在提取前水解。若检测吗啡，可酸水解；若检测O6-乙酰吗啡，需酶解，不能采取乙酰化衍生法,3.确证,（1）检材处理：毛发处理依次用甲醇、水超声清洗2次，晾干，剪成1mm长小段称取20-30mg，添加内标，水解调节pH8.7氯仿:异丙醇（9：1）提取挥干有机溶剂衍生化（丙酰化、硅烷化等）残留物可做衍生化（如TFA法），备检。,（2）气/质联用确认,色谱柱：DB-5（30m0.25mm0.25m）载气：氦气，流速 1.0ml/min；柱温：初温 200（1min)10/min280(10min)进样口温度 280传输线温度 260。质谱条件：EI电离源，电子能量70eV，离子源温度 250，扫描范围40450amu。,检测:6-乙酰吗啡，确证海洛因滥用,GC/MS：GC时衍生（甲基硅烷化）,二、大麻(marijuana，cannabis),简介致幻药；盛产于亚洲与北美，以印度大麻最为著名。主要活性成分为：四氢大麻酚，THC(tetrahydrocannbinol)大麻酚，CBN（cannabinol）大麻二酚，CBD（cannabidiol）大麻酚酸，cannabinolic acid,二、大麻(marijuana，cannabis),简介 吸食方式：大麻草手卷烟 把大麻草/精放在普通香烟内燃吸 把大麻油涂于香烟顶端,1大麻的形态学检验,(1)植物形态,(2)大麻制品及性状：,大麻草：雌花、嫩叶、果实等活性成分量高部位加工而成，绿、黄、或褐色大麻树脂：活性部位分泌的树脂样物质大麻油：大麻草或树脂的有机溶剂萃取浓缩物,(3)显微形态：碎片，水合氯醛透化,稀甘油封片非腺毛(刚毛):单细胞长弯曲尖叶状,基部膨大处有碳酸钙钟乳体；腺毛；薄壁组织中有细小草酸钙；花的乳突状毛绒,2.大麻酚类化合物的检验,（1）化学结构和理化性质,不溶于水，易溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂；性质不稳定，双键、酚羟基易被氧化,四氢大麻酚 大麻酚 大麻二酚,（2）化学方法:体外检材，筛选实验荧光反应：紫外光下，石油醚提取物干燥后喷冰醋酸，显绿色荧光快速Duguenois试剂：香夹兰素+乙醛的乙醇液，显绿色，加盐酸为紫色，氯仿萃取紫色快蓝B反应：碱性，大麻酚类与快蓝B显红紫色（快蓝B试剂：快蓝B和无水硫酸钠1:100固体混合）,（3）薄层色谱：,吸附剂：硅胶G展开剂（1）环己烷：丙酮：二乙胺（80：15：5）（2）正己烷：苯：二乙胺（20：70：10）（3）石油醚：丙酮：浓氨气（80：18：2）显色剂：称50mg快蓝B溶解在20ml0.1M NaOH溶液中，注意现用现配,TLC分析结果：多个斑点（与已知品对照）,恒比洗脱HPLC色谱条件,（4）高效液相色谱法,梯度洗脱HPLC条件,HPLC：反相色谱，紫外检测、电化学检测器,a reversed phase column(Lichrocart,C18 125-4 mm,5 m,Merck)；The mobile phase,a mixture of acetonitrilephosphate buffer(pH 5.0)(65:35(v/v);The flow rate,1.5 ml/min,（5）气相色谱法,色谱柱：OV-17（30m0.25mm0.25m）载气：氮气，流速 1mL/min；柱温：起始温度 150（1min）10/min260(6min)进样口温度 300检测器温度 300 检测器：FID,（二）体内大麻酚类化合物的检测,1.THC的体内代谢过程 长期吸食可在脂肪中积蓄，体内排除较慢 尿中主要为四氢大麻酚酸，尿样常呈酸性。2.检测采集与处理 一般采集尿、血或毛发，若可检出四氢大麻酚酸，则可作为吸食大麻的直接证据。提取：先碱水解，己烷-乙酸乙酯混合溶剂提取。溶剂挥干，必要时衍生化。,THC的体内代谢途径,3.GC/MS分析(羧基和酚羟基衍生)：,方法1：适于尿、血液 三种大麻酚分析和三种代谢物（各有两异构体）取样1mL添加内标，磷酸缓冲液调节pH6.8,酶解2mol/L HCl调节pH7-8，己烷:乙酸乙酯（7：1）提取冰醋酸调节pH4-5，己烷:乙酸乙酯（7：1）提取合并提取液，60挥干有机溶剂衍生化（五氟丙酰化、硅烷化等）,方法1续：适于尿、血液 大麻酚酸的提取取样1mL添加内标，磷酸缓冲液调节pH6.8,酶解调节至pH4-5己烷:乙酸乙酯（7：1）提取60挥干有机溶剂衍生化（五氟丙酰化、硅烷化等）,方法2：毛发处理（大麻酚酸的提取）依次用二氯甲烷，晾干，剪成1mm长小段称取50-100mg，添加内标加1mL1mol/mL NaOH，80水解20min1mL冰醋酸酸化己烷:乙酸乙酯（9：1）提取挥干有机溶剂衍生化（五氟丙酰化、硅烷化等）,气/质联用确认,色谱柱：DB-5（30m0.25mm0.25m）载气：氦气，流速 1.0ml/min；柱温：初温 150（1min)30/min240(0.5min)3/min280(1min)30/min300(0.5min)进样口温度 290传输线温度 280。质谱条件：EI电离源，电子能量70eV，离子源温度 250，扫描范围40450amu。,体内主要代谢物THC-COOH衍生化质谱图,三、可卡因(cocaine),盛产于南美（古柯叶）早在5000年前这种植物就出现在厄瓜多尔一带，被安第斯山的土著居民古印第安人奉为“圣草”，1860年德国化学家尼曼(Alert Niemann)从古柯叶中分离,热带山地常绿灌木-古柯树，性喜温暖、潮湿，株高约2-4米，树叶茂密，叶片长3-7厘米，呈长椭圆形，边缘光滑，其形状和味道均类似茶叶。古柯树花小，每朵5瓣，花色黄白。果实呈红色，核内含一枚种籽。古柯树根系发达，生命力强，每年可采摘古柯叶3-4次，一般在3月、6月、9月、及11月采摘，每棵树约可采摘40年。,早期咀嚼古柯叶曾是王族的特权16世纪后才普及到一般平民，包括西班牙的移民。现在它已是土著文化不可缺少的一个组成部分，90%的印第安人至今仍保持着这一嗜好，同时也逐渐成为阿根廷西北部、哥伦比亚、玻利维亚、秘鲁和亚马逊河谷等地约800万人的日常习惯。,能阻断神经传导，产生局部麻醉作用，对眼、鼻、喉恶粘膜神经的效果尤其明显，因此在早期曾被广泛用于眼、鼻、喉等五官的外科手术中作为麻醉剂。但由于可卡因盐酸盐的不稳定性，表面局部麻醉会引起角膜混浊，因此现在在临床上已经用新的、毒副作用更小的麻醉药取代了可卡因。,一种中枢兴奋剂，其药理作用：,可卡因通过加强人体内化学物质的活性刺激大脑皮层兴奋中枢神经，并继而兴奋延髓和脊髓，表现为情绪高涨、思维活跃、好动、健谈，能较长时间地从事紧张的体力和脑力劳动，甚至胜任繁重的、平时不能承担的工作。尤其危险的是服用可卡因具有一定的攻击性。,可卡因能使呼吸加深、加快，换气量增大，同时心率也加快，心脏收缩力加强，血管平滑肌松弛，对肺血管、冠状动脉等全身血管都有程度不同的扩张作用，对支气管平滑肌、胆道和胃肠平滑肌也有一定的舒张效应。,表征：,滥用影响：,吸食可卡因可产生很强的心理依赖性，长期吸食可导致精神障碍，也称可卡因精神病。易产生触幻觉与嗅幻觉，最典型的是皮下虫行蚁走感，奇痒难忍，造成严重抓伤甚至断肢自残，情绪不稳定，容易引发暴力或攻击行为。长时间大剂量使用可卡因后突然停药，可出现抑郁、焦虑、失望、易激惹、疲惫、失眠、厌食。长期吸食者多营养不良，体重下降。,1.可卡因制品及性状：,古柯叶和古柯茶：可卡因含量0.5%-1%古柯膏:粗制可卡因可卡因:其盐类呈白色晶体状，无气味，味略苦而麻，易溶于水和酒精掺杂物：普鲁卡因、利多卡因等,（一）毒品鉴定,爱康宁与可卡因的结构式左：爱康宁；右：可卡因,爱康宁(ecgonine)双酯生物碱,2.可卡因生物碱的检验(1)理化性质与检材处理可卡因纯品为白色晶体易溶于氯仿、乙醚、乙醇等有机溶剂，难溶于水强碱性，可与酸成盐；不稳定而易水解简单检材可直接溶解待检复杂检材,酸化,分离酸性溶液;调pH9,氯仿提取；挥干,残渣溶解后待检,可卡因水解过程,（2）Scott法（改良硫氰酸钴反应）蓝色；（干扰：PCP、安眠酮）鉴别：盐酸存在时蓝变粉红；氯仿萃取液显深蓝（3）苯甲酸甲酯试验 苛性碱醇液，特殊气味,（4）溶解度与阴离子试验 是否有掺杂物 阴离子类型（5）TLC法 展开剂：添加弱碱 改良碘-碘化铋钾：橙色 碘铂酸钾：蓝紫色（6）UV：稀硫酸，233nm、275nm（7）HPLC、GC、GC/MS,（二）体内可卡因及其代谢产物的检测,体内吸收、代谢：吸收迅速，代谢分解迅速 尿中原药在服用后8-12h消失，最多不超过24h 代谢产物复杂，主要代谢产物：苯甲酰爱康宁、爱康宁甲酯,滥用判定依据：尿中检出,（二）体内可卡因及其代谢产物的检测,采样：尿、血液、唾液等 毛发（长程检验）,检材处理,方法1（液液萃取）：适于尿、血液、唾液碱化至（弱碱）氯仿:异丙醇（9：1）酸反提净化己烷洗涤杂质碱化至（弱碱）氯仿:异丙醇（9：1）提取60挥干有机溶剂气相前衍生化（五氟丙酰化、硅烷化等）,检材处理,方法2（固相萃取）：适于尿、血液磷酸缓冲液调pH6，离心上清液过柱（Bond Elut）0.1mol/L醋酸和水洗涤杂质氯仿:甲醇：氨水（40：10：1）洗脱60挥干有机溶剂气相前衍生化（五氟丙酰化、硅烷化等）,方法3：毛发处理依次用二氯甲烷，晾干，剪成1mm长小段称取50-100mg，酸水解碱化至（弱碱）氯仿:异丙醇（9：1）提取60挥干有机溶剂气相前衍生化（五氟丙酰化、硅烷化等）,气/质联用确认分析方法1：硅烷化产物分析,色谱柱：DB-5（30m0.25mm0.25m）载气：氦气，流速 1.0ml/min；柱温：初温 70（1min)20/min300(2min)进样口温度 250传输线温度 280。质谱条件：EI电离源，电子能量70eV，离子源温度 230，扫描范围40450amu。,气/质联用确认分析方法2：PFP产物分析,色谱柱：DB-5（12m0.2mm0.33m）载气：氦气，流速 1.0ml/min；柱温：初温 145（4.5min)60/min210(8min)60/min280(1min)进样口温度 260传输线温度 280。质谱条件：EI电离源，电子能量70eV，离子源温度 230，扫描范围40450amu。,HPLC法,色谱柱：Brownlee C-18柱，100mm2.1mm ID，5m流动相：甲醇：乙腈：25.8mmol/L醋酸钠（12.5:10:77.5，用12.9mmol/L四丁基磷酸铵调节 pH2.2 流速：0.3mL/min检测器：紫外检测器，检测波长235nm,HPLC分析结果,第三节 有毒中草药,中毒毒物检验要点：了解中草药的来源、分布和用药注意收集处方、尚未煎熬中药、熬过或泡酒的药渣以及与事（案）件相关的同种中草药等如有剩余的中草药或药渣，结合处方可先根据形态学方法，从中分拣出可疑的有毒中草药进行鉴定，而后再有针对性的进行成分分析,一、乌头,乌头（主根），毛茛科乌头属植物；盛产于我国西南、东北；药典收录：川乌、附子（侧根）、草乌（北乌头）、雪上一枝蒿。,1.乌头成分和毒性,（1）乌头生物碱的结构和毒性,乌头植物中的剧毒成分主要为双酯型的二萜类生物碱 剧毒，纯乌头碱2-4mg致死,吸收快,很不稳定,易水解减毒。,（2）乌头种类和毒性,中毒及检验特点：毒性乌头生物碱入体后很快被吸收，中毒发作快、死亡快，口舌发麻及至四肢全身发麻。烈性乌头的中毒致死量因产地、品种及炮制方法等不同而异。乌头中草药的品种繁多、成分复杂、生物碱中毒量小且性质不稳定易水解，检验工作应重视体外检材的检验。,（1）外观性状,三种乌头属中草药外观形态左：乌头；中：北乌头；右：短柄乌头,2.形态学检验,（2）显微形态,乌头（横切面）及其中石细胞和淀粉粒形态,3.乌头生物碱的检验,（1）理化性质和检材处理 毒性较大的双酯型乌头生物碱均不稳定，酯结构在水溶液中或碱性条件下极易水解，即使纯品在醇溶液中放置数日也可见其浓度明显下降。,乌头碱结构式,乌头碱(aconitine)与稀酸或稀碱水解为非晶形乌头次碱(picraconitine，benzolaconine)与乌头原碱(aconine)注：14-C水解，乌头原碱；8-C水解，乌头次碱,重视体外检材检验,检材立刻加乙醇（放置不宜太久），注意收集对照药材分离提取过程中，不宜过多和过久地接触水和酸碱，并尽量避免长时间加热。氨碱性条件下，乙醚或二氯甲烷提取，浓缩（温度不宜高，尽快分析）,检材采集与处理：,（2）检验方法 乌头中毒检材的成分比较复杂，而且含量低、毒物易分解。对乌头生物碱无特殊、灵敏的化学反应，检验主要以色谱法和色/质联用法为主。由于水解原因，中毒检材中有时可能查不到乌头生物碱原药，必要时，可对水解产物单酯型生物碱或乌头醇胺进行检验。,2）薄层色谱法,1）舌尖味觉试验 试液一滴于滤纸尖，舌尖尝之麻，灼 烧（及时漱口）,氯仿-丙酮-二乙胺（5：4：1）展开，碘熏显色，注意与已知品对照,3）高效液相色谱法 乌头生物碱的检测可用反相抑制色谱,色谱柱：C18柱，250mm4.6mm ID，10m流动相：甲醇:水:氯仿:三乙胺（70:30:2:0.1）流速：1.0mL/min紫外检测器：检测波长230nm,检材处理：固相萃取 血液3高氯酸超声萃取、尿液离心取上清液氨碱化至pH8水洗涤杂质乙腈洗脱60挥干有机溶剂,4）液/质联用法,4）液/质联用法,LC/MS分析条件色谱柱：ODS-2柱，150mm3m 流动相：乙腈:0.3%三氟乙酸，线性梯度洗脱FAB-MS检测,二、马钱子（番木鳖）,马钱子科植物的干燥成熟种子产地:印度、越南、泰国等，中国云南成分：吲哚类生物碱，主要为士的宁（番木鳖碱）、马钱子碱（布鲁生）马钱子中含量在1.53.5。,简介,硝酸盐在临床上用作脊髓中枢兴奋药，因毒性大，安全范围小，现已少用。马钱子碱的生物活性比士的宁弱，主要用作化学试剂。马钱子浸膏或粗制士的宁有被用作毒品掺加物的。毒性较强，中毒量5mg，致死量30mg。马钱子碱的毒性为士的宁的1/8-1/30。主要中毒症状有颈项僵直、牙关紧闭等阵发性痉挛，最后窒息而死，尸体僵直,临床应用、毒性：,士的宁入体后很快被吸收，排泄缓慢，有积蓄作用；在活体内可逐渐被氧化分解消失，但在尸体中可经久不变，埋葬数年的尸体内脏中仍有检出的可能。,1马钱子的形态学检验,（1）外观性状,马钱子（上）与云南马钱子（下）的形态1.种脐；2.隆起线纹；3.珠孔；4.胚乳；5.胚,（2）显微形态,马钱子(左)与云南马钱子(右)表皮毛茸图1.表皮毛茸；2.颓废组织；3.胚乳,（1）结构性质和检材处理,2.马钱子生物碱的检验,（1）结构性质和检材处理,士的宁难溶于水、乙醚，易溶于氯仿马钱子难溶于水，易溶于氯仿化学性质稳定，可与酸成盐检材处理：酸性醇液浸泡，浓缩，氨性碱化，氯仿萃取,(2)显色反应,Mandelin试剂 士的宁，蓝至蓝紫红橙；马钱子，红棕（含氮有机碱性化合物也可显色）重铬酸钾-硫酸反应 士的宁，紫堇色黄橙色黄硝酸反应 马钱子，深红色；加氯化亚锡，深红转紫 士的宁，淡黄色，蒸干后残渣遇氨变紫红,（3）紫外光谱,士的宁（左）与马钱子碱（右）的紫外吸收光谱（酸性水溶液）,（4）薄层色谱法 碱性展开剂，碘-碘化铋钾显色,（5）HPLC:色谱柱：platinum silica（Alltech）150mm46mm3流动相：正己烷-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液（47.547.550.35）流速：1.2mL/min检测波长：254nm,（7）HPLC/MS,色谱柱：Alltima 18（5m,200mm4 6mm）流动相：乙腈-水-甲酸-三乙铵(208010.01)流速：0.4mL/min柱温：室温质谱：ESI，采用一级、二级和多级全扫描几种方式同时测定。,（6）气相色谱法,色谱柱：OV-101（25m0.32mm0.25m）载气：氮气，流速 2mL/min；柱温：起始温度 240（3min）10/min280(6min)进样口温度 280检测器温度 280 检测器：FID或NPD,士的宁（A）、马钱子（B）的二级全扫描色谱及质谱图、尿样中m/z335的二级全扫描色谱图（C）1.异士的宁 2.士的宁 3.马钱子碱,士的宁葡糖醛酸结合物的二级（A）和三级（B）全扫描色谱及相应质谱图1.异士的宁葡糖醛酸结合物 2.士的宁葡糖醛酸结合物,3.动物试验（青蛙毒性试验）,检材中的生物碱经过萃取、挥干后，使成可溶性盐，用少量生理盐水制成中性溶液注入青蛙背部的淋巴囊内，观察青蛙动态。如有士的宁存在，则于给药后数分钟至半小时，出现间歇性、强直性四肢肌肉痉挛，蛙体及后腿僵直，前肢合抱，稍有外界声音或光线刺激，立即再次引起全身强直性痉挛。,三、颠茄类,原生植物：茄科颠茄属植物。颠茄生物碱：莨菪烷生物碱(tropane alkaloids)活性成分：莨菪碱（hyoscyamine，又名天仙子胺）东茛菪碱（scopolamine，又名天仙子碱）山莨菪碱（anisodamine，又称6542）樟柳碱（anisodine）常用中草药：洋金花（花）天仙子（种子）三分三（根）,简介,中草药：解痉、镇痛、止咳、平喘莨菪生物碱：抗胆碱药物阿托品（atropine)：莨菪碱外消旋体。阿托品和东莨菪碱毒性较大，阿托品中毒量5mg，致死量50mg。,临床应用、毒性：,毒物鉴定案例：用药过量和麻醉抢劫体内过程：吸收和排泄都较快，且易水解检验注意事项：及时取材，尽快检验。,其它：,洋金花原植物及蒴果形态图左：白曼陀罗植物；右上：白曼陀罗果；右下：毛曼陀罗果,1.形态学检验,（1）洋金花,洋金花剖面图及粉末显微形态1.花粉粒；2.非腺毛；3.腺毛；4.导管；5.花粉囊内壁细胞；6.草酸钙晶体；7.花冠表皮（7a上表皮，7b下表皮）,（2）天仙子的性状,天仙子（左）和南天仙子（右）的外形,2.颠茄生物碱的检验,（1）结构性质和检材处理,莨菪生物碱结构式,（1）结构性质和检材处理,化学性质：碱性化合物，可与酸成盐；溶于乙醇、氯仿、乙醚等；难溶于水；酸、碱性条件下易分解。检材处理：氨碱性条件下，氯仿提取。,Vitali反应：莨菪酸硝化成三硝苯衍生物(苛性碱醇液中，成醌式,紫-暗红-褪色)氯化汞反应：阿托品黄色氧化汞红；东莨菪碱白色复盐碘-碘化钾结晶：阿托品飞鸟状深棕色结晶,（2）化学检验方法,（3）紫外光谱：B带,弱吸收（4）薄层色谱法：展开剂：25%氨水-甲醇（1.5：100）显色：碘化铋钾（5）高效液相色谱法：反相离子对（6）毛细管电泳法 3.动物试验：猫眼括瞳，筛选,马兜铃酸毒理毒性 毒理机制主要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死与凋亡，加速肾间质纤维化进程，干扰花生四烯酸、前列腺素的代谢，并有较强的致癌、致突变作用。,简介,四.马兜铃酸类,马兜铃酸中毒临床病理表现：急性肾功能衰竭 肾小管变性及萎缩 肾间质纤维化致慢性肾功能衰竭 泌尿和消化道肿瘤 低血钾性瘫痪,马兜铃酸中毒事件 国外：1993年，比利时医学界发现马兜铃酸导致肾病，国外将其称为“中草药肾病”2000年，美国食品药品管理局（FDA）告知各保健专业机构，因服用含马兜铃酸的产品而出现威胁生命安全的不良反应。2001年6月，美国FDA宣布禁用关木通、马兜铃等13种植物药。,马兜铃酸中毒事件 国外：2002年2月世界卫生组织国际肿瘤研究所致癌源鉴定评价中心，在法国里昂召开的关于传统草药、某些真菌毒素、萘和苯乙烯等致癌性的讨论评议工作组会议上（有14国28位专家参加）讨论了马兜铃属某些植物和马兜铃酸致癌性问题及相关机理的研究报告，有关研究结果得到与会专家（包括中国国内专家）的认同。2002年6月，美国FDA宣布禁售70多种含马兜铃酸的龙胆泻肝丸等中成药。,马兜铃酸中毒事件 国内：1964年，医学报道马兜铃酸造成肾损害，因其只是个例，所以未引起医务界的重视。1998年，南京军区总医院报告了富含马兜铃酸的关木通可引发慢性肾损害的病例，引起了医务界的警觉。1998年10月2003年6月，北京中日友好医院肾内科有100多例此类患者入住，其中最多的就是服用龙胆泻肝丸导致的肾损害病人。,马兜铃酸中毒事件 国内：2003年2月22日，28位自称因长期服用龙胆泻肝丸而致肾病的受害者与北京炜衡律师事务所联合召开“新闻通报会”，正式宣布向龙胆泻肝丸最大的制造商，具有300多年历史的中药金字招牌“同仁堂”提出损害赔偿。至3月10日，起诉人数达106位。至此，国内舆论界形成了一个类似的“马兜铃酸风波”。国内的几家报纸上，连续刊载了“中药吃出肾病，祸起马兜铃酸”、“知名中成药被指严重致病”等报道，并有临床专家及药物学家的分析评论，一时间对人们长期以来认为中药安全无毒的概念形成了一种冲击。,马兜铃科马兜铃属植物主要毒性成分：马兜铃酸A（Aristolochic acid A，主）马兜铃酸B 马兜铃酸C,1.来源,（1）含马兜铃酸的中草药：关木通、广防己、马兜铃、天仙藤、青木香、寻骨风和朱砂莲以及铁线莲马兜铃、蛇根马兜铃、印度马兜铃。（2）复方中药制剂 龙胆泻肝丸、甘露消毒丸、妇科分清丸、排石冲剂、导赤丸等,1.来源,2.形态学检验,左 中 右,马兜铃植物及其药材形态左：马兜铃药材；中：马兜铃植物；右：青木香药材1.果实；2.种子；3.花枝；4.根,三种木通药材原植物左：木通马兜铃；中：白木通；右：小木通1.花；2.果；3.茎叶,2.形态学检验,粉防己和广防己原植物及药材形态上：粉防己；下：广防己,3.马兜铃的检验,（1）结构性质和检材处理 硝基菲类化合物 具羧基，酸性较强,马兜铃酸A结构式,药材处理：可先用含2甲酸的甲醇或丙酮提取，过滤，挥干；残渣用0.5氢氧化钠溶解，乙醚萃取除去碱性和中性有机杂质；将碱水液用稀硫酸酸化至pH2，再用乙醚萃取，挥干乙醚，残渣用醇溶解后供检。血、组织：三氯乙酸沉淀蛋白，乙醚、氯仿萃取，必要时碱水反提。,（2）薄层色谱法 吸附剂：硅胶 展开剂：加入少量有机酸避免马兜铃酸解离而导致斑点脱尾 定位：黄色（3）高效液相色谱法和液/质联用法 马兜铃酸具有较强的酸性，分析宜采用反相离子抑制色谱或离子对色谱,色谱条件色谱柱:Hypersil C18(200 mm 416 mm,5m)流动相:甲醇1.28%四丁基溴化氨pH 3.6 醋酸-醋酸钠缓冲液(体积比211),流速1.0 mL/min 检测波长:316 nm,Chromatography by HPLCA Radix Aristolochiae;B Standard;s Aristolochic acid A,五、斑蝥有效成分：斑蝥素(cantharidin)g可致死；皮肤、粘膜发泡斑蝥外观：,斑蝥（左）与绿芫青（右）的形态图,一般性质 斑蝥酸酐,遇碱开环遇酸闭环,升华提取净化,斑蝥素不溶于冷水，易溶于丙酮、氯仿。斑蝥素易升华。,斑蝥素 斑蝥素盐阴离子,检验方法：检材处理：碱水浸提，有机溶剂除杂质，水层酸化，氯仿萃取化学检验 对二氨基苯甲醛反应:紫红色 间苯二酚反应:绿色荧光 升华与显微结晶试验：无色透明短棒状或棱柱状晶体滴加氢氧化钡，束状针晶簇,检验方法：气质联用分析：分子离子峰：196；质谱峰：128（B）、96、70、39、41等,斑蝥素质谱图,六、钩吻碱,钩吻，俗称大茶药、断肠草、大炮叶等剧毒，叶35片可中毒致死钩吻生物碱，易溶于乙醚、氯仿、乙醇,主要成分：钩吻素子(koumine)钩吻素甲(Gelsemine)钩吻素寅(Koumincine)钩吻素卯(kouminidine)钩吻素辰(kounidine)钩吻素酉(sempervine)钩吻素丁(koumicine)钩吻素戊(koumidine)钩吻素己(Gelsenicine)钩吻素庚(elsenidine)等,国产钩吻中所含生物碱以钩吻素子、钩吻素甲含量最高,为其主要成分。,钩吻素甲(Gelsemine)结构示意图,毒性最大,钩吻的药理作用及临床应用：抗肿瘤作用 免疫调节作用 抗炎镇痛作用 扩瞳作用 畜禽复壮作用,钩吻的主要中毒症状：头晕、视物障碍、筋肉无力、心跳呼吸加快、烦躁不安、咽喉与腹部有烧灼感、恶心呕吐剧烈腹痛,内脏及大小便出血等严重的消化道毒性反应，运动神经末梢麻痹，可呼吸衰竭而导致死亡,前处理：碱性pH12，乙醚萃取检验：1）重铬酸钾-硫酸反应 红色红紫蓝绿色条纹 2）Mandelin试剂显色 紫色紫蓝色蓝色,3）薄层（TLC）与乌头类似，氯仿-无水乙醇（8:2）展开，碘化铋钾显色或钒硫酸试剂显色4）GC：HP-5柱，FID、NPD检测,GC/MS,Thank You!,