大学植物生物学实验-叶绿素含量的测定.ppt

植物生物学实验(二)植物生理学基础与综合实验,实验五、叶绿体含量的测定（分光光度法）,一，实验目的与要求,掌握叶绿素a、b含量测定的方法；了解不同生境下植物的叶绿素含量和叶绿素a、b比值。,二、实验材料与试剂,95%乙醇。不同生境下的植物叶片。,三、实验原理,叶绿素a、b的吸收光谱,叶绿素a、b乙醇提取液的光吸收总和在649nm和665nm处各有一峰值。,Lambert-Bear定律：A=nCL n=摩尔消光系数；C=溶液浓度；L=比色杯内径。吸光度的相加性：混合液在某一波长下的吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。,三、实验步骤,提取：叶片洗净、吸干、称重后于研钵中加入5mL 95%乙醇、少许石英砂和碳酸钙，研磨匀浆后过滤，再用5mL 95%乙醇冲洗滤渣，定容到10mL，混匀；测定：充分过滤后，以95%乙醇调零，测定叶绿素提取液在649nm和664nm处的光吸收值。计算：叶绿素a：C=13.95A664-6.88A649 叶绿素b：C=24.96A649-7.32A665,计算叶绿素含量,叶绿素a（mg/gFW)=?叶绿素b（mg/gFW)=?叶绿素a：叶绿素b=?,四、数据分析,统计植物生境与叶绿素含量、叶绿素a：b值之间的关系，并分析其生理意义；,五、思考题：,1.叶绿素a、b在红光区与蓝光区都有最大光吸收峰，能否用蓝光区的最大光吸收峰波长进行叶绿素含量的定量分析？为什么？你所测得的叶绿素a:b值是否与教材上相近？如不相近，为什么？,