兔肝脱氧核糖核酸的提取.ppt

兔肝脱氧核糖核酸的提取,实验目的,掌握从动物组织中提取DNA的原理和方法。,基本原理,步骤：,(一)脱氧核糖核蛋白的制备10ml刻度离心管取8ml兔肝匀浆，3000转10分钟；（取试管标号，加试剂）弃上清后，沉淀+0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠8ml，搅匀后3000转10分钟。弃上清所得即脱氧核糖核蛋白。（加DNA标准液和蒸馏水，二苯胺试剂，加二苯胺试剂的试管不能放在试管架上）,（二）DNA粗制品的提取,沉淀+0.15M氯化钠-0.10M乙二胺四乙酸钠（终体积为4ml）；搅匀后，逐滴+0.5ml 15SDS，搅拌3-5min，溶液粘稠略带透明。（DNA与蛋白分离）+1.0ml5M NaCl（终浓度1M），轻搅3-5min；+等体积氯仿-异丙醇，加塞（塞紧防漏）振荡3-5min，3000转10分钟；（实验二的试管放沸水浴）,吸管取上清于一10ml的刻度离心管中，+等体积氯仿-异丙醇，加塞（塞紧防漏）振荡3-5min，3500转15分钟；（取出实验二的试管室温放冷并595nm比色，注意添水到水浴锅中）吸管取上清于一10ml的刻度离心管中，+两倍体积的95的乙醇抽提；DNA析出，弃乙醇后则得到白色DNA粗制品。*进行实验二的第二步,二苯胺显色法测定DNA含量,熟悉751型分光光度计的使用。掌握DNA纯度测定的原理和方法,实验目的,基本原理,DNA在的-脱氧核糖在酸性条件下转变成-羟基-r酮基戊醛，与二苯胺共热后形成蓝色化合物，该化合物在595nm处最大吸收。每ml含2040ug范围内光密度与DNA的浓度成正比。反应液中加入少量乙醛，可提高反应的灵敏度。,步骤,一、DNA标准曲线的制定 0号管调0，以A为纵坐标，DNA含量（ug/ml)为横坐标，绘制标准曲线。二、样品含量测定 沸水浴10min，冷却后595nm比色，并从标准曲线上读数。,DNA纯度的测定,原理：核酸在220-320nm处呈特征性吸收，260nm处有最大吸收，测260/280可得知核酸的大致纯度。260/280 1.6 1.8 表示纯 1.8 含RNA 1.6 蛋白含量高,岛津UV-120,有两个光源：紫外和可见光使用石英杯比色。,