食用菌各级菌种的制作.ppt

食用菌原种栽培种制作,第三章 食用菌各级菌种的制作,人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。一般1支试管菌种可繁殖4-6瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖60-100瓶栽培种。,食用菌菌种,原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接用于生产。（母种原种）2）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用于生产。（原种栽培种）,一、常用培养料的配方和配制方法,1、木屑米糠培养基（适用于木腐菌食用菌菌丝生长）木屑78%、麸皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水适量。2、棉籽壳麸皮培养基（适用于大多数食用菌菌丝生长）棉籽壳78%、麸皮20%、蔗糖1%、石膏1%、水适量。3、棉籽壳木屑综合培养基（适用于大多数食用菌菌丝生长）木屑32%、棉籽壳50%、麸皮15%、石膏1%、蔗糖1%、过磷酸钙0.5%、尿素0.5%，水适量。4、麦粒培养基（适用于大多数食用菌菌丝生长）小麦98%、石膏2%、水适量。,一、常用培养料的配方和配制方法,掌握碳氮比例 食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳氮比（C）。菌丝体生长阶段：C=201；子实体形成阶段：C=30-401。,二、培养基（料）配制原则,选好培养材料 选不含杀菌物质的木屑 杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀菌物质，会抑制食用菌生长。要用必须经过处理，如：蒸煮、晒等。,二、培养基（料）配制原则,注意物理性状 培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，以及持水性能等物理性状。调节酸碱度 各种食用菌需要的pH值不同，配制培养料时，应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值，生产上有时为了控制这类杂菌的发生，往往将pH值适当调高0.5-1。,二、培养基（料）配制原则,米糠、麸皮作用作用：补充氮源和维生素。稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料，含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。米糠：含氮量比麸皮少。用量：一般10%-20%，过多易引起污染。,三、培养基原料用途的几点说明,加糖的作用初期补充碳源，用量1%-5%。诱导胞外酶的产生。纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入少量白糖作为食用菌初期补充碳源，促进菌丝快速生长，同时诱导纤维素酶的产生，更好地利用纤维素。,三、培养基原料用途的几点说明,Ca2作用提供食用菌钙离子：原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子；钙不断中和食用菌产生的有机酸；钙还能中和单宁。,三、培养基原料用途的几点说明,按配方称取原料拌料调节含水量65%左右装袋灭菌（1.5kgcm2，1.5-2h）冷却接种（接入黄豆大小一块菌种）培养（25-27）菌丝长满瓶（袋）培养7d-8d扩大成栽培种。,四、原种、栽培种的制作方法,含水量65%左右判断：用手紧握培养料，手指缝中有水珠渗出，但不滴下。,接种后的原种，一般在3d5d左右菌丝恢复生长，应每天全面检查杂菌情况，如有污染及时剔除；如发现接种块无新菌丝萌发，则认为是死菌，应及时补种。正常：菌丝白色 杂菌：黄、红、绿、黑 死菌：补种,五、杂菌检查（菌种检查）,三、原种、栽培种的接种,接栽培种,用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上,栽培种接种,四、菌种培养,（二）技术环节,母种培养,二、菌种质量的鉴定,（一）母种质量的鉴定,、,好母种,2.鉴定,耐干湿性试验,耐高温性试验,仍正常生长,适温培养7天 3035 锻炼24h 再适温培养,出菇试验,（二）原种、栽培种质量的鉴定,黄水,污染,食用菌菌种的保存,无论是母种、原种或栽培种，如果未及时使用，其菌丝就会很快衰老，降低生产力，影响产量和质量。因此，菌种必须进行适当的保存，其目的是防止退化，确保菌种纯一，防止杂菌感染。菌种保存的基本原理，主要是通过采用低温、干燥与缺氧的条件，以中止菌种的繁殖，降低其新陈代谢，使之处于休眠状态。,1.斜面低温保存法 将斜面菌种，置于冰箱内，在4左右低温下保存，以后每隔23个月转管移接一次。这种保存方法适于大多数食用菌菌种。但草菇菌种在5以下很快死亡；所以草菇的菌种，不必放在冰箱中，置于室温保存即可。为了延长保存时间，试管口处要用塑料薄膜包扎，以防培养基干固。在农村没有冰箱设备的，可把母种试管，用石蜡封口，再用塑料薄膜包封，沉放于清凉的井底保存。,2.液体石蜡保存法 食用菌的菌丝体都可用此法保存，方法简单，只在斜面菌种试管内，注入一层已灭过菌的液体石蜡，注入量以高出斜面1厘米为宜，使菌种与空气隔绝，降低其新陈代谢的活动，然后在棉塞外包以塑料薄膜，直立存放于室内干燥处或低温下保存，一般可保存一年以上。使用液体石蜡菌种时，只要用接种针从斜面上挑取少许菌体，放在新鲜的培养基上；经过培养，即可应用，原种则重新蜡封，继续保存。,3.木屑试管菌种保存法 用杂木屑按原种的培养基配制装入大号试管，容量为管高的三分之二，擦净管口塞紧棉塞，用牛皮纸包扎管口后高压灭菌，然后移入母种，在2528下培养，待长满菌丝后，立即移到低温干燥环境保存、或埋于尿素、硝酸铵或地洞中保存，效果更好，并能延长保存时间。,4.冷冻干燥保藏法 这种方法采用真空、干燥、低温等手段，使菌种新陈代谢活动处于相对静止状态，在低温下快速冷冻，又在低温下真空干燥，而使菌细胞的结构与成分保持原来状态而保存菌种。,还有沙土保存法、液氮超低温保藏法、滤纸片保存法、菌丝球生理盐水保藏法、麦粒保藏法、干孢子真空保藏法等。这里不一一介绍。要根据自己的工作需要及具体条件而定，一边保存，一边还要分离，复壮，做好选育工作，延续菌种的优良性能。,原种和栽培种培养好后，应立即用于扩接栽培种或栽培生产，不宜保存过久，时间越长，生活力越差，也越容易感染杂菌。若因特殊情况不能及时使用，原种瓶口用牛皮纸包好，置414条件下可保藏一年左右。栽培种短期保存也可放于阴凉、干燥通风的室内，但种瓶不宜堆叠过高，以免堆内发热，加速菌丝老化。,如何防止食用菌菌种退化,菌种退化：在菌种传代、保藏和长期栽培过程中，某些原来的优良性状可能会消失或变弱，造成遗传的变异，出现长势弱、抗性差、出菇迟、产量低品质低劣等现象。菌种退化会导致菌丝体生长缓慢，对环境、杂菌等的抵抗力变弱，子实体形成期提前或推后，出菇潮次不明显等现象。1、引起菌种退化的原因很多：遗传变异、不良环境条件、杂菌污染、自然退化,2、防止菌种退化的措施有：（1）选优分离（2）更换培养基的营养成分（3）有性繁殖（4）适宜条件培养菌种（5）选优去劣,第一节 食用菌的形态结构,一、食用菌的基本组成 二、菌丝体的形态结构 三、子实体的形态结构,第二章 食用菌学基础知识,一、食用菌的基本组成,在分类学上，食用菌属于真菌界中的担子菌门和子囊菌门。食用菌形态上有菌丝体和子实体两种形式。食用菌的子实体一般都比较大，直径和高度可达2-40 cm，所以又称食用菌为大型真菌。菌丝体是食用菌的营养结构，主要功能是分解基质，吸收、输送及贮藏养分；子实体是繁殖结构，其主要作用是产生孢子，繁殖后代。,食用菌形态（伞菌为例）,子实体,菌丝体,食用菌繁殖器官，主要功能是产生孢子，繁殖后代。,菌盖,菌柄,食用菌营养器官，主要功能是分解基质，吸收营养。,一次菌丝体（初生菌丝体）-单核菌丝,次生菌丝体-双核菌丝,三生菌丝-结实性双核菌丝,菌托,菌环,1.概念,(一)菌丝及菌丝体的正常形态结构,菌丝：在培养基上向各个方向呈辐射状延伸、分支的每一根细线，称为菌丝。细胞管状，壁薄、透明，细胞内含有一个、两个或多个细胞核。,菌丝体：是由基质内无数纤细的菌丝交织而成的丝状体或网状体,二、菌丝及菌丝体的形态结构,菌丝形态1 孢子2 孢子膨大3 孢子萌发4 菌丝分枝5 菌丝体6 放大的菌 丝体a 细胞壁b 细胞核 c 细胞质 d 细胞隔膜,蘑菇圈(fairyring):也叫仙人圈，仙人环，是由于蘑菇菌丝辐射生长的缘故。菌丝由中间一点向四周辐射生长，时间长了，中心点及老化的菌丝相继死去，外面的生活力强，于是形成了自然的菌丝体环，并长成蘑菇圈。,3.菌丝体的划分,初生菌丝,次生菌丝,质配结果,质配始,突起,锁状联合过程,是已组织化的次生菌丝,三生菌丝,(二)菌丝体特殊形态,蜜环菌的菌索,茯苓菌核,冬虫夏草子座,蝙蝠蛾幼虫被虫草菌(Cordyceps sinensis)感染，死后尸体、组织与菌丝结成坚硬的假菌核，在冬季低温干燥土壤内保持虫形不变达数月之久(冬虫)，待夏季温湿适宜时从菌核长出棒状子实体(子囊座)并露出地面(夏草)，可入药。,（一）概况,三、子实体的形态结构,猴头菌（头状）,杏鲍菇（保龄球状）,双孢菇（伞状）,（二）子实体的形态特征,角勺（匙状）,块菌(块状),金耳（脑状）,竹荪（笔状）,牛肝菌,绣球菌,喇叭菌,（三）子实体的宏观结构特征,菌盖,菌柄,着生方式,中生,偏生,侧生,中生,偏生,侧生,菌柄,菌柄与菌褶的着生关系,直生,延生,弯生,离生,菌环和菌托,1-2.单层；3-4.双层、可滑动；5.絮状；6.蛛网状；7-8.破裂后附着菌盖边沿,1苞状,2.鞘状,3.鳞茎状,4.杯状,5.杵状,6.瓣裂,7.菌托退化,8.带状,9.数圈颗粒状,位于菌盖皮层下的松软组织叫菌肉。菌肉是菌盖的实体部分，也是菇、蕈最有食用价值的部分。绝大多数食用菌的菌肉为肉质，易腐烂。少数为蜡质，革质和胶质等。菌肉的颜色绝大部分是白色，受伤后不变色，但也有些食用菌的菌肉受伤后会变色。菌肉是由生殖菌丝和联络菌丝组成的密丝组织。,1、菌肉,（四）子实体的微观结构特征,1、丝状菌肉；2、泡囊状态菌肉,菌肉的构造分为两大类：一类菌肉全部由丝状的菌丝体组成，称丝状菌肉。另一类菌肉大部分由泡囊状细胞及少数丝状菌丝组成称泡囊状菌肉。泡囊状细胞是菌丝分支膨大而来，常失去再生能力，如红菇属的某些种。,菌肉的风味对某些食用菌来说也是分类的依据之一。许多食用菌的命名就是根据其风味而来的。如香菇，鸡油菌（杏菌），鲍鱼菇等。,2、子实层子实层是担子菌或子囊菌的繁殖器官。,子实层 子囊菌的子实层由子囊和侧丝构成。担子菌的子实层比子囊孢菌要复杂，主要有担子、担孢子、囊状体，有的还有侧丝。,大多数的担子菌的子实层位于菌褶两侧，但牛肝菌位于菌管内壁，喇叭菌平铺于菌盖外侧，猴头菌平铺于各个肉刺上，珊瑚菌分布于全部分枝表面。侧丝和囊状体是不育的。子实层实际上是由菌盖内的菌肉菌丝向下生长形成的产孢组织，是菌肉的组成部分。最靠近菌肉两侧的菌丝生长成为狭长、分枝多的紧密区，成为下子实层，由下子实层向外再产生栅状排列的担子或囊状体，由这些担子或囊状体组成子实层。因此，可认为子实层便是菌褶两侧的表生覆盖物。担子、担孢子、囊状体的形态特征是分类的重要依据。,（1）子囊孢子和担孢子,子囊菌的子囊孢子和担子菌的担孢子，都是有性孢子。子囊孢子是在子囊内产生的内生孢子，一般为8个。担孢子则是在担子上产生的外生孢子，1个担子上一般为4个。它们的形成过程比较复杂。,担子和子囊 担子和子囊分别是担子菌和子囊菌子实层的产孢组织。担子的构造和形状有很大差异，是一个很重要的分类标准。担子的主要形式：无隔担子 A、筒状担子（蘑菇等）：担子呈圆筒形或棒状、单细胞、无隔膜、典型的在顶端形成4个小梗，每个小梗产一担孢子。B、叉担子（桂花耳等）：担子不分隔，幼时呈棒状，成熟时上部呈二叉或形成两个长臂，每臂先端产生一小尖并形成一个担孢子。有隔担子 C、纵隔担子（银耳等）：双核菌丝顶端细胞形成棒状或梨形的幼担子。经核配，减数分裂后，幼担子长大且十字形纵分隔成四个细胞，呈“田”字形，每细胞顶部伸出小梗（称上担子），小梗先端小而尖锐称小尖。小尖的功能：担负担孢子的形成和掷射之用（长大的纵裂担子又称下担子）。D、横隔担子（木耳等）：双核菌丝顶端细胞成为柱状幼担子，核配后减数过程中第一次核分裂产生一个横隔，第二次核分裂产生二个横隔，成熟的担子成为四个细胞，每个细胞产生一个小梗，小梗上着生担孢子。,子囊孢子的形成过程,两个单核细胞质配后，伸长和弯曲成一种钩状体，双核并列，形成四个子核位于钩头的双核细胞即为子囊母细胞，母细胞核配发育成子囊，经减数分裂形成四个单倍体细胞核，再经一次有丝分裂形成8个细胞核，最后发育成8个子囊孢子。,担孢子的形成过程 孢子的形状、大小、颜色、表面特征、孢壁的厚薄等是分类的重要依据之一。,担孢子的形成过程,双核菌丝顶端逐渐膨大成担子，2核结合，经减数分裂形成四个单倍体核担子顶端生出四个小梗，小梗顶端膨大成幼担孢子。四个单倍体的核通过小梗进入幼担孢子内，最后形成四个单倍体的孢子。,1、圆球形；2、卵圆形；3、椭圆形；4、星形；5、纺锤形；6、柠檬形；7、长方形；8、肾形；9、多角形；10、棱形；,孢子的形状食用菌的种类不同，其孢子的形状、大小，表面特征及颜色也不相同，分类依据。孢子的形状常见的有球形、卵形、椭圆形、肾形、多角形，柠檬形、纺锤形、星形及棱形等。孢子的表面也因种不同，有的光滑，有的粗糙，表面有小疣、小瘤、刺棱、纵条纹网纹等,平菇担孢子,孢子印,孢子印制备方法取已成熟的新鲜子实体，剪去菌柄，把菌盖复盖在白色或黑色的腊光纸上，静置2小时或2小时以上(因种而异)，轻轻取去菌盖，大量的孢子按菌褶或菌管的排列方式散落在纸上，即成孢子印，白色的孢子印在黑色纸上显示出来，其它颜色的孢子印在白色纸上也显示出来，孢子的颜色得到了鉴别,孢子多数是无色透明的，少数有颜色，而大量孢子成堆时；能呈现出各自的群体色彩。孢子堆的颜色通常是以孢子印来鉴别的。,草菇的孢子印,