实验二 琼脂糖凝胶电泳.ppt

实验二 琼脂糖凝胶电泳,一、实验原理,琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。,二、实验目的,通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和技术。,植物基因组DNA电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。琼脂糖，1TAE电泳缓冲液，溴化乙锭（EB），6载样缓冲液：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青，40%蔗糖水溶液;0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青，30%甘油水溶液,三、实验材料、器具及药品,(一)制胶,1.准备好凝胶成型器，插入成型梳。2.将0.8g琼脂糖加至100 ml 1TAE缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化，冷却至60以下。3.加入5ul溴化乙锭（终浓度0.5ug/ml）至熔化的琼脂糖液中混匀，注意避免出现气泡。4.将冷却的琼脂糖倒入凝胶成型器，制备凝胶。,四、实验步骤,（二）电泳,1.待胶变硬，直到它呈乳白状且不透明（约20分钟），小心垂直向上拔出梳子，将凝胶置入电泳槽中，加1TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm。2.用移液器吸取2l 的6载样缓冲液于封口膜上，再加入5l样品，混匀后，小心加入点样孔。3.接通电源，调节电压至4-5V/cm，DNA从负极移到正极。电泳时间3060分钟。4.电泳结束，关掉电源。,1.将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统 的平台中间；2.开通紫外光，可见到发出荧光的DNA条带，在 电脑中观察图像；3.关上紫外光电源，在电脑中编辑和保存图像；4.根据图像判断结果。,五、结果分析,图1 玉米基因组DNA1%琼脂凝胶电泳图,图2 PCR产物琼脂凝胶电泳图(1、2、3、4为PCR产物，M为DL2000Marker),Thank you！,