蛋白质的透析实验.ppt

蛋白质的透析,透析实验,实验原理,透析是膜技术的一种，利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子，从而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。透析膜是半透膜，蛋白质是大分子物质，它不能透过透析膜，而小分子物质可以自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换，进入到透析液中。常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。,透析装置（原理图）,透析装置和透析过程示意图,实验仪器,磁力搅拌器,器材与试剂,器材：透析袋，烧杯，玻璃棒，磁力搅拌器，试管及试管架。试剂：饱和氯化钠溶液，10%硝酸溶液，1%硝酸银溶液，10%氢氧化钠溶液，1%硫酸铜溶液。,操作步骤,透析袋的处理：一般是将透析袋剪成1020cm的小段，在2（W/V）NaHCO3和1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，然后放在1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，冷却后，存放于4，从此时起取用透析袋，必须戴手套检查透析效果的方法：用1 BaCl2检查(NH4)2SO4，用1AgNO3检查NaCl、KCl等,操作步骤,装样 取一段透析袋1015cm，将其一端用棉绳扎死，由开口端加入约5ml待透析的样品溶液（蛋白质氯化钠溶液），开口端用棉绳扎死，放入盛有蒸馏水的烧杯中，系于一横放在烧杯的玻璃棒上。,操作步骤,透析 用磁力搅拌器搅拌促进溶液交换。透析过程中需要更换洗脱溶液数次（约15min一次），至达到透析平衡为止（洗出液中无Cl-），约需1h.,检查透析效果,检查氯离子：自烧杯中取水12ml，加10%硝酸溶液数滴使之成酸性，再加入1%硝酸银12滴，检查氯离子的存在。检查蛋白质：从烧杯中取12ml，做双缩脲反应，检查是否有蛋白质存在。双缩脲反应：加10%氢氧化钠1ml，振荡摇匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，振荡，观察是否出现粉红色。,注意事项,把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤去空气的空余部分，以防由于溶剂渗入造成样品体积增加而引起透析袋胀破为了获得较快的透析速度，常常采取一些措施保持膜两侧浓度差具有最大差，如经常更换透析外液，连续搅动外液。,