S6HiPer过氧化氢酶CAT测试盒使用说明书.docx

S6HiPer过氧化氢酶（CAT）测试盒使用说明书产品名称单位货号一S6HiPer过氧化氨酸（CAT）测试盒48TS6495-01【储存条件】4C保存【产品简介】CAT（EC1.11.1.6）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的HQ2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。HzO?在24Onm下有特征吸收峰，CAT能够分解H?。?，使反应溶液24Onm下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。【产品组份】提取液：60mL试剂A：60mL试剂B：320L溶液的配置：1 .试剂B：液体置于棕色试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。2 .检测工作液的配置：取50Ul试剂B加入13ml试剂A,充分混匀（约13T）,作为工作液，现用现配：或者根据比例配制。注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内，建议稀释或者增加样本量进行检测。【实验前准备】紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、ImL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸储水【操作步骤】一、样本处理：1 .细菌、细胞或组织样品的制备细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（IO4个）：提取液体积（ml）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入Iml提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率20%或200w,超声3秒，间隔10秒。重复30次）；8000g4C离心10分钟，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积（ml）为1：5-1（）的比例（建议称取约（）.1g组织，加入ImL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4C离心10分钟，取上清，置冰上待测。2 .血清（浆）样品：直接检测。二、CAT测定操作，1 .分光光度计预热30min以上，调节波长至24Onm处，蒸镭水调零。2 .测定前将CAT检测工作液37（哺乳动物）或25C（其他物种）水浴l（）min.3 .取ImLCAT检测工作液于ImL石英比色皿中，再加入35L样本，混匀5s；室温下立即测定24Onm下的初始吸光值AI和Imin后的吸光值A2。计算AA=Al-A2三、CAT活性计算：1 .血清（浆）CAT活力的计算：单位的定义：每亳升血清（浆）在反应体系中每分钟催化InmOlH202降解定义为一个酶活力单位。CAT（UmL）=（A×V反总-（×d）×106）÷V样+T=678'AA2 .组织、细菌或细胞中CAT活力计算：1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化InmolH202降解定义为一个酶活力单位。CAT（U/mgprot）=（A×V反总（×d）×106）÷（V样XCPr）÷T=678×A÷Cpr2）按样本鲜重计算：单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化InmolH202降解定义为一个酶活力单位。CAT（U/g鲜重）=（A×V反总÷（×d）×106）÷（W×V样-V样总）÷T=678×A÷W3 .按细菌或细胞中CAT活力计算：单位的定义：每1万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化InmOlH202降解定义为一个酶活力单位。CAT（UZlO4Cell）=（A×V反总÷（×d）×106）÷（500×V样+V样总）÷T=1356×AV反总：反应体系总体积，1.035x103L;£：H2O2摩尔吸光系数，43.6Lmolcm;d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.035ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Ts反应时间，ImiiuW,样本质量，g;Cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总数，500万。IO6:单位换算系数，lmol=106moL【备注】本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。