琼脂糖凝胶电泳原理.ppt

琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用,口腔1402,琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用,琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同，电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。,琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用,胶床准备,静置,铺胶,凝胶准备,琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用,结果初步分析数量分析：条带的宽度，荧光的亮度。质量分析：纯度 分子量,琼脂糖凝胶电泳结果分析,影响因素：DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其分子量的对数成反比；琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼脂凝胶中，电泳迁移率不相同；DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的电泳速度差别较大,琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用,1、DNA的制备.适合分离大片段DNA.琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达107bp的DNA片段.,可提取大分子DNA利用琼脂糖凝胶制成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大的DNA片段，可以完全符合构建粘粒基因组文库的要求。,2、PCR产物在琼脂糖凝胶上进行的电泳检测。,3、琼脂糖在其他方面的应用、琼脂糖在免疫扩散法中的应用。琼脂糖在双链DNA探针的合成方法中的作用。,