液相色谱法测定汽水中的苯甲酸.ppt

林薇薇 卫生化学实验中山大学公共卫生学院,高效液相色谱法测定汽水中的苯甲酸,食品添加剂苯甲酸,食品添加剂是指为改善食品色、香、味以及为防腐和加工工艺的需要而加入到食品中的化学合成物质或天然物质苯甲酸是我国目前最常用的食品防腐剂，主要作用是防止由微生物活动而引起的食品变质化学方程式C6H5COOH溶解性：微溶于水，乙醇，乙醚酸性：弱酸俗名：安息香酸,食品添加剂苯甲酸,中国（食品添加剂使用卫生标准（GB27601996）碳酸饮料，最大使用量为 0.2g/kg；低盐酱菜、酱类、蜜饯，0.5g/kg；葡萄酒、果酒、软糖，0.8g/kg；苯甲酸和苯甲酸钠同时使用时，以苯甲酸计不得超过最大使用量,HPLC分析模式选择,馏分收集器,流动相,HPLC高压输液系统不包括：A.贮液器B.高压输液泵C.六通阀D.梯度洗脱装置,六个部分1.高压输液系统;2.进样系统3.分离系统;4.检测系统;5.数据记录与处理系统;6.辅助装置,C8属于正相化学键合固定相，C18属于反相化学键合固定相？,HPLC通过改变流动相的组成和极性，可调整出峰时间并改善分离度？,紫外-可见检测器利用物质吸收受紫外-可见光辐射的性质来进行检测？,实验目的,熟悉HPLC操作条件的选择，以达到化合物的良好分离效果掌握HPLC测定汽水中苯甲酸的方法,实验原理,样品超声去CO2和乙醇，调pH至中性，过滤后进HPLC进行分析。使用C18柱作为分析柱，甲醇及乙酸铵溶液作为流动相，分离汽水中的苯甲酸。利用紫外检测器在230nm波长处进行检验，以色谱峰的保留时间定性，峰面积定量。,仪器及试剂,高效液相色谱仪(Waters2695)+紫外检测器(Waters2998)千分之一电子天枰（型号）高速离心机（型号）甲醇（优级纯）（1+1）氨水0.02mol/L乙酸铵溶液1mg/ml苯甲酸标准储备液0.1mg/ml苯甲酸标准使用液,Waters 2695,运行样品,数据处理,实验步骤,1.样品处理称量：打开天平侧门，放入小烧杯，读书稳定后，TARE/POWER键归零用吸管吸取汽水约10g于小烧杯中，读书稳定后，记录读数搅拌除去二氧化碳使用氨水（约12滴，1.5滴为佳）调pH至约7，使用pH试纸判定加超纯水定容至25ml8000转/min离心5min取上清液转移至HPLC进样瓶,TAREPOWER,实验步骤,2.流动相配置甲醇、0.02mol/L乙酸铵溶液；流动相使用前用0.5m滤膜过滤后，超声脱气3.HPLC条件设置C18色谱柱甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液=10：90流速：1ml/min进样量：20 L紫外检测器波长：230nm,实验步骤,4.标准样测定及标准曲线绘制分别吸取苯甲酸标准使用液（0.1mg/ml）2，4，6，8，10ml于10ml比色管中，用超纯水定容至刻度，混匀。过滤后分别吸取20 L进样，测定不同浓度标准溶液的峰面积。以苯甲酸标准溶液浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标绘制标准曲线。5.样品测定各组将HPLC进样瓶放入HPLC样品盘中，记录各自样品盘中对应的号码，在HPLC进样方法指令中输入相应的号码，20 L进样，记录目标峰的保留时间和峰面积,结果记录及讨论,1.数据记录2.标准曲线绘制3.样品中苯甲酸含量（计算结果保留2位有效数字）x=CV/mx：样品中苯甲酸含量，g/kgC：从标准曲线上查到的样品浓度,mg/mlm：样品质量,gV：样品稀释液总体积,ml,结果记录及讨论,1.对 实验结果的讨论（内容形式字数不限）2.思考题（1）为什么HPLC流动相在使用前必须经过脱气处理？（2）改变流动相的配比，苯甲酸的保留时间是否发生变化？若发生变化将如何变？在本实验条件下，若同时分析苯甲酸和苯甲酸乙酯，谁先出峰，为什么？,