微生物实验设计.ppt

08级微生物学实验考试试题解答PPT,PPT制作人：36号 龚鹏解说人：35号 张青 36号 龚鹏 37号 曾泽文,第八组,问题：,某细菌肥料是由相关的不同 组成的一个菌群并通过混合培养得到的一种产品。的多少是质量好坏的一个重要标志之一，请设计一个实验方案来检测该细菌肥料的质量？在实验过程中为减少实验误差提高数据的可靠性，应该注意那些操作步骤？,微生物,活菌数,我们的思路,一、题目分析二、实验设计三、解题总结,一、题目分析,某细菌肥料是由相关的 组成的一个菌群并通过混合培养得到的一种产品。的多少是质量好坏的一个重要标志之一，请设计一个实验方案来检测该细菌肥料的质量？在实验过程中为减少实验误差提高数据的可靠性，应该注意那些操作步骤？从题目我们可以看出该题目的要求是；因此，必须考虑以下几个问题：,不同微生物,活菌数,检测单位质量细菌肥料中的活菌数,减少实验误差,1、该细菌肥料中的不同微生物,通过查找资料我们了解到细菌肥料，一般有、和 等分成。由此，我们推断该细菌肥料中大概有、和。,瘤菌剂,固氮菌剂,磷细菌剂,抗生菌剂,复合菌剂,细菌,真菌,放线菌,有哪几种？,2、如何 这些微生物？,选择性培养基培养；用平板分离法分离。,分离纯培养,3、怎样,采用平板培养计数法要求操作熟练、准确，否则难以得到正确结果。要求样品成分混匀，保证每个活细胞都能分别形成菌落；尽可能选用选择性培养基，保证计数菌落围有效菌落。,减少实验误差？,解决方法：,思考之后,鉴于，以上几点我们综合考虑，最终决定采 用 分离纯化微生物并测定样品中活菌数。,稀释涂布平板法,二、实验设计,1、实验目的2、实验原理3、实验过程,1、实验目的,检测单位质量样品细菌肥料中的。,活菌数,2、实验原理,，分离培养样品中的不同微生物。不同的培养基，由于营养成分不同，因此具有选择性，适合改培养基的微生物就可以生长；反之，则不能生长，根据不同的选择培养基，我们可以分离出样品中的不同微生物。，是种统计物品含菌数的有效方法。方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。,利用选择培养基,平板菌落计数法,3、实验过程,（一）样品的处理和稀释（二）培养基的配置及倒平板（三）涂布（四）培养（五）计数和报告,（一）样品的处理和稀释,1.以无菌操作取检样10g，放于盛有90ml灭菌蒸馏水的灭菌三角瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分研磨、摇床震荡制成1：10的均匀稀释液。2.用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌蒸馏水稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。3.另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。,操作示意图：,【注意1：样品稀释误差】,1、为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。2、在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。3、为减少稀释误差，最好采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。,（二）培养基的配置及倒平板,1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用)2、高氏I号培养基（培养放线菌用）3、马丁氏琼脂培养基（分离真菌用）,倒36个培养皿,操作图,【注意2：倒平板误差】,1.倒平板时倾注培养基的量规定不一，从1220ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。2.为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。,（三）涂布,操作方法：选择个 4个稀释度，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液放在无菌的已经凝固的培养基平板上，然后用无菌的玻璃涂棒把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，每个稀释度做3个平皿。,（四）培养,待琼脂凝固后，将含高氏I号培养基和马丁氏琼脂培养基的平板倒置与28温室中培养3-5d，牛肉膏蛋白胨平板倒置与37温室中培养1-2d。,【注意3】,1、无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。2、操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。,（五）计数和报告,操作方法：培养到时间后，取出培养皿，计算平板内菌落数目。计数时可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算出每克样品中的菌落数。计算方法：每克样品中的菌落数（个）=同稀释度的各平板平均菌落数（个）稀释倍数,结果统计,将计数结果填入下表,【注意4：计数误差】,1.到达规定培养时间，应立即计数。2计数时应选取菌落数在30300之间的平板3不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。4当平板上有链状菌落生长时，要仔细观察 清楚再计数。,三、解题总结,首先，看到这个题目时，我们觉得最难的就是，不知道该细菌肥料中有些什么微生物。因此，弄清楚样品肥料中微生物的种类成为了解题的关键。,其次，弄清楚了微生物的种类，接下来就是要如何分离纯培养这些微生物近而达到计数的目的。,最后，实验的成功还要求熟练的操作，一定要做好“无菌操作”。,谢谢观看,