动物生理学实验教学课件.ppt
2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,青岛农业大学动物生理学实验教学课件,EXPERIMENT OF ANIMAL PHYSIOLOGY,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目录 INDEX,EXP1.肠系膜血流显微观察EXP2.坐骨神经-腓肠肌标本制备EXP3.蛙心收缩记录和心肌特性EXP4.骨骼肌收缩特性EXP5.离体肠段运动描记EXP6.离体蛙心灌流EXP7.神经动作电位、肌电和肌张力同步记录EXP8.动脉血压的间接测定EXP9.红细胞显微计数EXP10.血红蛋白测定EXP11.红细胞的凝集与ABO血型鉴定EXP12.人体心电图描记EXP13.动脉血压的直接测定及影响因素动物生理学试验实验设计,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,肠系膜血流显微观察,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,观察蛙肠系膜血管内血液的流动，了解外周血管的血流特点及其影响因素,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,肠系膜薄而透明，可观察血流情况及神经递质对内脏血管舒缩的作用。动脉血管内血液由主干流向分支；静脉血管内血液由分支流向主干；毛细血管内血细胞往往单排流动。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,蟾蜍蛙类手术器械、显微镜、任氏液、0.01%去甲肾上腺素溶液。具体请以每组清单为准,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、实验准备：损毁蟾蜍的脑、脊髓,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,先背位固定，剪开腹腔，找到肠系膜。,然后腹位固定四肢；拉出肠系膜，用大头针将肠系膜固定在蛙板孔上。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,2、实验观察项目,（1）动脉、静脉、毛细血管内血液流动特点。（2）机械刺激的影响。（3）肾上腺素、组织胺的影响。实验报告描绘观察到的现象。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1、固定肠系膜避免撕裂；2、大头针斜插固定，以免遮挡物镜；3、注意不要污染显微镜。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、根据观察结果，归纳交感神经及其递质对内脏血管活动的作用。2、如何判断动脉血管和静脉血管？3、微循环是如何调节的？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,坐骨神经-腓肠肌标本制备,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,学习并掌握两栖类神经-肌肉标本的制备方法；观察肌肉的收缩现象。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,两栖类神经肌肉标本体外保持活性的条件相对简单，操作容易，其兴奋、收缩特性与哺乳动物的类似。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,蟾蜍。蛙毁脊针、蛙类手术器械、玻璃分针、锌铜弓、任氏液等。具体请以每组清单为准,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、损毁脑脊髓。2、在两前肢附近剪断脊柱，去掉内脏，剥离皮肤，制备双后肢标本。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,3、从正中间剪开后肢。4、分离坐骨神经。5、分离腓肠肌。6、活性检验。,用线结扎8cm左右,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1、剪刀的用法：粗剪刀用于剪骨骼、皮肤等，大剪刀用于剪肌肉、眼科剪用于剪神经、血管等纤薄组织。2、神经组织避免牵拉及金属器械夹持。3、制备过程中用任氏液保持神经肌肉的湿润。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、兴奋是如何从神经传递到肌肉的？2、肌肉收缩是钙离子有什么作用？3、神经兴奋与肌肉收缩如何保证是一对一的关系？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,蛙心收缩记录和心肌特性,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,了解心肌的某些特性并掌握蛙心收缩的记录方法。观察心肌的期前收缩与代偿间歇现象。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,心肌的绝对不应期长，在心肌的相对不应期之后、节律性兴奋传来之前给予单个阈上刺激，可引起一次额外收缩，其后便产生一个较长的代偿间歇。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,蟾蜍。RM6240B信号采集处理系统、张力换能器、蛙心刺激电极、铁支架、双凹夹、蛙心夹、蛙板、蛙针、手术器械、丝线、小烧杯、滴管、大头针、纱布，任氏液。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、实验准备：用蛙针破坏蟾蜍的脑与脊髓，暴露心脏，用眼科剪剪开心包膜。将连有丝线的蛙心夹在心室舒张时夹住心尖，丝线另一端连张力换能器。换能器接RM6240B信号采集处理系统。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,2、实验操作,（1）打开仪器开关（背面）（2）双击电脑桌面“RM6240B”图标（3）打开“实验”下拉菜单，找到相应实验项目：“循环”-“期前收缩-代偿间歇”（4）点击“开始记录”图标单击此处观看示范,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,3、观察项目,（1）描记正常心搏活动曲线。（2）在心室收缩期给予中等强度的单个刺激，观察能否引起心脏活动的改变?（3）期前收缩和代偿间歇。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1、实验中经常给蛙心滴加任氏液，以防心肌组织干燥。2、引起期前收缩后，须间隔一段时间再给予心脏第二次刺激。3、固定电极时确保电极接触心室璧，并且不得影响心室的收缩4、实验成功的关键在于把握施加刺激的时间。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、心肌的绝对不应期长有何生理意义?2、心肌收缩与钙离子的关系？3、心肌受到连续刺激后会发生强直收缩吗？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,骨骼肌收缩特性,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,熟悉神经肌肉标本的制备方法理解刺激的强度、频率对骨骼肌收缩的影响。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,骨骼肌兴奋性较高，不应期短，可以发生收缩的叠加；刺激的频率增大到一定数值时，发生强直收缩。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,蟾蜍。蛙类手术器械，任氏液，生理数据采集系统、张力换能器、肌槽。具体以清单为准。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、神经肌肉标本的制备。注意问题：（1）保留股骨（2）结扎牢固，防止滑脱（3）肌肉、神经保持湿润,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,2、联结仪器（教师示范）,（1）股骨用肌槽的螺丝固定；（2）结扎线联结于张力换能器；（小心！切勿用力牵拉换能器的弹簧片）（3）神经搭在电极上。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,3、观察项目,（1）单收缩（2）不完全强直收缩（3）完全强直收缩操作系统：神经肌肉刺激频率典型实验点击观看示范,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1、制备标本过程中，应随时用任氏液润湿神经和肌肉，防止干燥。2、游离神经时，切勿用玻璃分针逆向剥离，以防损伤神经干，又要避免金属器械对神经的不必要触碰。3、请注意保存实验结果。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、骨骼肌完全强制收缩时，其细胞膜上的动作电位是怎样的？2、骨骼肌收缩一段时间后为什么会收缩能力下降？3、影响骨骼肌收缩的因素有哪些？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,离体肠段运动描记,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,观察平滑肌运动的一般特性，了解某些理化因素对平滑肌运动的影响。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,肠道平滑肌具有自律性，离体肠段在适宜条件下可保持自律性收缩的特性，其收缩频率和幅度受到某些理化因素的影响。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,兔。哺乳动物手术器械、注射器、离体器官恒温装置、充气装置、张力换能器、RM6240B生理信号采集系统肾上腺素、乙酰胆碱等。具体以试验台贴出的清单为准,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、实验准备（1）恒温装置预热 38 a.台氏液 b.麦氏浴皿,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意：必须在完成预热工作后方可进行本部分操作！,（2）离体肠段制备 快速处死兔子（击打延髓或耳缘静脉注射空气，一定要迅速！）迅速剖开腹腔 找出十二指肠，挤出食糜，剪成2cm的肠段，立即放入38台氏液中。关键：操作迅速，否则影响实验结果！,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,（3）联结仪器（等老师来示范）,注意：肠段浸入台氏液；通气，控制通气速度。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,2、实验操作,（1）打开仪器开关（背面）（2）双击电脑桌面“RM6240B”图标（3）打开“实验”下拉菜单，找到相应实验项目（4）点击“开始记录”图标单击此处观看示范,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,3、观察项目,（1）正常运动曲线。（2）温度的影响。（3）乙酰胆碱的影响。（4）肾上腺素的影响。（5）钙离子（6）酸（7）碱,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1.标本安装好后，应在新鲜38台氏液中稳定510min，有收缩活动时即可开始实验。2.注意控制温度。加药前，要先准备好更换用的新鲜38台氏液，观察到实验结果后，应立即用38台氏液冲洗，待肠段活动恢复正常后，再进行下一个实验项目。3.平滑肌反应较慢，若效果不明显，可以增补剂量，但要防止一次性加药过量。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、各种药物对平滑肌运动的影响机理。2、实验过程中为什么要不断通气？3、滴加药物的顺序有什么要求？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,离体蛙心灌流,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,掌握离体蛙心制备和灌流方法；了解体液因素对蛙心收缩的影响。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,心肌的收缩强度、频率等受肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质以及各种离子浓度等因素影响。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,蟾蜍。蛙心套管、蛙心夹、蛙板、蛙类手术器械、RM6240生理信号采集系统、张力换能器、任氏液、长滴管、铁架台等。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、实验准备双毁髓背位固定，剖开胸腔动脉与心室之间穿双线结扎静脉剪口、插管蛙心离体，联结记录仪器。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,2、实验项目,（1）描记正常心跳曲线（2）钙离子的影响。（3）钾离子的影响。（4）肾上腺素。（5）乙酰胆碱。仿实验结果描记曲线,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1、结扎静脉及固定插管时一定避开静脉窦，否则心脏停止跳动。2、滴加药物时宜缓慢。3、保证记录连续，及时在曲线上加以标记，分析各现象产生分原因。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、分析有的蛙心标本套管内液面升降不明显的原因并提出相应的对策。2、实验过程中套管内液面为什么每次都应保持一定的高度？3、高Ca2+任氏液与肾上腺素引起的心脏活动变化有何不同？为什么？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,神经动作电位、肌电和肌张力同步记录,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,掌握神经干动作电位、肌肉动作电位、肌张力同步记录方法；理解动作电位的产生、传导、传递及兴奋收缩偶联的过程；理解强直收缩时动作电位的形态。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,神经、肌肉兴奋的不应期较短，可以发生较高频率的兴奋，使骨骼肌的收缩发生叠加。阈强度与顶强度的概念。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,蟾蜍。蛙板、蛙类手术器械、RM6240生理信号采集系统、张力换能器、任氏液、长滴管、铁架台等。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、实验准备（1）制备坐骨神经-腓肠肌标本（2）连接仪器,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,2、实验操作,（1）打开操作系统（2）一通道改为“张力”，（3）二通道调灵敏度2.5mV（4）三通道调灵敏度（5）关闭四通道。（6）调出刺激器对话框（7）选择刺激模式：强度递增刺激，强度改为0.01,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,（8）点击开始记录，并施加刺激，观察阈强度与顶强度；（9）重新选择刺激模式：频率递增刺激，观察并记录融合频率。（10）保存文件，分析结果：神经干AP与肌电AP有无间隔？肌电AP与肌张力的出现有无间隔？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,制备标本时务必保证神经的生理完整性。保留的脊椎骨尽量小。记录下蟾蜍的体重，阈强度与顶强度、融合频率的数值。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,分析由刺激引起骨骼肌收缩的生理过程，那个阶段耗时最长？骨骼肌强直收缩时，AP融合了吗？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,红细胞的凝集与ABO血型鉴定,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,观察红细胞的凝集现象。学习血型鉴定的基本原理，掌握利用标准血清进行人类ABO血型鉴定的方法。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,血型是根据红细胞细胞膜上抗原（凝集原）的种类而将血液分成的类型。红细胞膜上只含有A型凝集原、血清中含有抗B凝集素的为A型血，红细胞膜上只有B型凝集原、血清中只有抗A凝集素的为B型血，红细胞膜上具有AB两种凝集原、血清中没有凝集素的为AB型血，红细胞膜上没有AB凝集原、血清中具有抗A和抗B两种凝集素的为O型血。当相应的凝集原、凝集素相互作用时，就产生红细胞的凝集。可依此用标准血清判定被测定人红细胞上凝集原的类型，即血型。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,人。双凹载玻片、一次性采血针、牙签、酒精棉球、干棉球、标准血清、显微镜。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、取一干燥清洁双凹载玻片，在左、右上角标好“”、“”字样，分别滴入抗(即型)、抗(即型)标准血清1滴。2、人指尖或耳垂、采血针消毒，待酒精挥发后采血。挤出第一滴血用干棉球擦去，再挤出一滴血液，用牙签刮下，与标准血清混合均匀；再挤出一滴血，用牙签另一端刮下，与另一侧的标准抗血清混合均匀，室温下静置几分钟，观察。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,3、观察判定：如果红细胞聚集成团，虽经振荡或轻轻搅动亦不散开，为“凝集”现象；红细胞散在均匀分布或虽似成团，一经振荡即散开，则为未凝集或“假凝集”。必要时可在显微镜下观察。按下图判定血型。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,左侧：A型标准血清（含抗B凝集素）右侧：B型标准血清（含抗A凝集素）,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,一次性采血针一定要专人专用。牙签两端不可混用。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,如果没有标准血清，仅知道1人的血型为A型或B型，请你设计无标准血清情况下测知全班同学血型的实验方案。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,动脉血压的间接测定,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,1、学习并掌握人体间接测压法的原理和方法。2、观察在正常情况下，某些因素对动脉血压的影响。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,血压计、听诊器,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、正常血压的测定（1）受试者脱左臂衣袖，静坐 5min。（2）松开打气球上的螺丝，将压脉带内的空气放出，再将螺丝扭紧。（3)将压脉带裹于左上臂，其下缘应在肘关节上约 3cm 处，松紧应适宜,位置应与心脏同一水平。(4)在肘窝部找到动脉搏动处，左手持听诊器的胸具置于其上。注意：不可用力下压。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,（5）将听诊器两耳器塞入外耳道，使耳器的弯曲方向与耳道一致（向前）。（6）听取血管音变化，右手持打气球，向压脉带打气加压，此时注意倾听声音变化，在声音消失后再加压 30mmHg，然后扭开打气球之螺丝，缓慢放气（切勿过快），此时可听到血管音的一系列变化，声音从无到有，由低而高，而后突然变低，最后完全消失。然后扭紧打气球螺丝继续打气加压，反复听取声音变化 23 次。记录血压数值。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,2、运动对血压的影响 受试者作原地蹲起运动，1min 内完成 30 次，共做 2min。运动后立即坐下，30s 测量血压一次，直至血压恢复正常。精确记录每次测量血压的时间，画出血压恢复过程与时间的函数关系曲线。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1、保持室内安静，以利听诊。在听诊过程中，压脉带充气或放气不宜过快或过慢。2、戴听诊器时，务使耳具的弯曲方向与外耳道一致，即接耳的弯曲端向前。3、重复测压时，须将压脉带内空气放尽，使压力降至零位，而后再加压测量。测压前嘱受试者休息10分钟。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、心动周期中血管的平均压与舒张压和收缩压的关系。2、测定血压时为什么要与心脏基本保持水平？3、高血压与低血压分别反映了心血管什么方面的问题？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,人体心电图描记,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,学习人体心电图描记方法和心电图波形的测量方法，辨认正常心电图的波形并了解其生理意义。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,正常人心脏由窦房结发出兴奋，按一定途径和时程，依次传向心房和心室，引起整个心脏的兴奋。这种生物电变化通过心脏周围的导电组织和体液，反应到身体表面使身体表面也随心动周期发生有规律的电变化。将测量电极置于人体表面的一定部位，通过仪器记录出来的心脏电变化曲线即为目前临床上常规记录的心电图（ECG）,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,实验对象：人体器材：RM6240B生理信号采集处理系统、心电引导电极、酒精棉。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、接好仪器的电源线、地线和导联线。2、受试者安静，舒适地平卧在实验台上，肌肉放松。3、按电极颜色接好导联线：红色右手（RA），黄色左手（LA），黑色右足(RL）。安放电极前，先用酒精棉球将要放置电极部位的皮肤擦净。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,4、打开操作界面，描记心电图。5、辨认P波、QRS波群、T波、R-R间期、P-R间期、S-T段及Q-T间期。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1、仪器要有良好的接地，否则出现干扰。2、测试者确保肌肉松弛，防止肌电干扰。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、试述心电图各波和各段的生理意义。2、从心电图如何计算心率？如何判断心率不齐？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,动脉血压的直接测定及影响因素,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,目的要求,观察减压神经放电现象；了解直接测定动脉血压的方法及某些因素对血压的影响。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,基本原理,在正常生理情况下，动物的血压相对稳定的维持在一定水平。这是由于神经和体液不断调节心脏的活动和血管平滑肌紧张度的结果，其中以颈动脉窦主动脉弓减压反射尤为重要，对血压的改变有缓冲作用。但是当内外环境的某些因素发生改变时，动脉血压会发生相应的变化。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,仪器材料,兔。手术器械，生理盐水，线，3%戊巴比妥钠，0.01%肾上腺素，0.01%乙酰胆碱，RM6240生理系统，压力感受器，三通。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,方法步骤,1、实验动物准备（1）麻醉 1ml/kg（2）仰卧保定，切开颈部皮肤，气管插管，分离颈动脉及神经，穿线备用。由粗到细：迷走、交感、减压,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,（3）结扎左侧颈动脉，并用动脉夹夹闭颈动脉向心端，在动脉夹及结扎部位之间剪口、插管。（4）动脉插管与压力换能器通过三通连接，压力换能器与生理信号采集系统连接。（5）将减压神经搭在黄金引导电极上。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,2、实验项目（1）减压神经放电观察（2）夹闭右颈动脉1015s（3）静脉注射肾上腺素0.20.3ml，观察血压及减压神经放电的变化。（4）静脉注射乙酰胆碱0.20.3ml，观察血压及减压神经放电的变化。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意事项,1、麻醉药物注射速度要慢，注意不要麻醉过深；2、每进行一个项目，必须待血压恢复正常后再进行下一个项目。,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,思考题,1、动脉血压形成的机制及调节机理。2、如何证明减压神经是传入神经？,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,单击此处返回！,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,注意调整连线的松紧及灵敏度，强直收缩时不超出记录范围，同时又可观察到单收缩单击此处返回！,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,单击此处返回！,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,单击此处返回！,2023/9/27,生命科学学院动物生理学教学课件,
