定量分析方法概述.ppt
第四章 药典中常见定量分析方法概述,药物的定量分析是指准确测定药品有效成分或指标性成分的含量。它是评价药品质量、判断药物优劣的重要手段。对药物进行定量分析时，应按药品质量标准进行测定。,药物定量分析可选用化学分析法和仪器分析法。,化学测定法,仪器测定法,重量分析法,滴定分析法,分光光度法：紫外-可见分光光度法最常用,色谱分析法：高效液相色谱法（HPLC）气相色谱法（GC）,电化学分析法,第一节 滴定分析法,一、基本原理及特点,滴定分析法是将一种已知准确浓度的溶液（滴定液）滴加到待测物质的溶液中，直到化学反应按计量关系完全作用为止，然后根据所用滴定液的浓度和体积计算出待测物质含量的一种分析方法，又称“容量分析法”。,一、基本原理及特点,沉淀、配位滴定,非水滴定,氧化还原,酸碱滴定,原料药纯度达到98.5%以上时首选容量分析法,二、应用与实例,（一）酸碱滴定法 1.直接滴定法 适用范围：CKa10-8的弱酸、CKb10-8的弱碱 终点：指示剂变色 2.剩余滴定法 适用范围：药物难溶于水或有其他原因不宜采用直接滴定法,二、应用与实例,（一）酸碱滴定法实例一 布洛芬含量测定溶剂：中性乙醇（对酚酞显中性）指示剂：酚酞滴定液：氢氧化钠（0.1mol/L）滴定度（T）：每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于20.63mg的C13H18O2,羧基酸性,二、应用与实例,（一）酸碱滴定法实例二 氯贝丁酯含量测定溶剂：中性乙醇水解溶液：定量过量氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）指示剂：酚酞滴定液：盐酸滴定液（0.5mol/L）滴定度：每1ml氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）相当于121.4mg的C12H15ClO3,先水解再回滴,二、应用与实例,（二）非水溶液滴定法（主要介绍非水碱量法）,二、应用与实例,实例 盐酸可乐定含量测定溶剂：冰醋酸+醋酸汞滴定液：高氯酸滴定液（0.1mol/L）指示剂：结晶紫滴定终点：蓝绿色滴定度：每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于26.66mg的C9H9Cl2N3HCl。,有机碱氢卤酸盐,二、应用与实例,（三）氧化还原滴定法1.碘量法（1）基本原理,滴定液：碘滴定液,直接碘量法,剩余碘量法,置换碘量法,指示剂：淀粉,定量过量碘滴定液,滴定液：硫代硫酸钠,用于强氧化剂测定,KI+硫代硫酸钠,碘量法,二、应用与实例,（三）氧化还原滴定法1.碘量法（2）应用 实例一 安乃近片含量测定 溶剂：乙醇与0.01mol/L盐酸溶液 滴定液：碘滴定液（0.05mol/L）终点：浅黄色（或带紫色）在30秒钟内不褪 滴定度：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于17.57mg的C13H16N3NaO4SH2O,二、应用与实例,（三）氧化还原滴定法 1.碘量法（2）应用 实例二 右旋糖酐20葡萄糖注射液中葡萄糖的含量测定 溶剂：定量过量（0.05mol/L）碘滴定液 滴定液：硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）指示剂：淀粉，近终点加入，滴定至蓝色消失 滴定度：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于 9.909mg的C6H12O6H2O,二、应用与实例,（三）氧化还原滴定法 2.亚硝酸钠滴定法（1）基本原理,二、应用与实例,（三）氧化还原滴定法 2.亚硝酸钠滴定法（2）应用:含有芳香第一胺或水解后能生成芳香第一胺的化合物,滴定条件：1.加入过量的盐酸 2.在室温条件（1030）下滴定 3.滴定时加入溴化钾作为催化剂 4.滴定管尖插入液面下2/3处,一次性将入大部分亚硝酸滴定液在搅拌下迅速加入，近终点时滴定管提出液面，淋洗、缓慢滴定；,滴定终点:仪器装置:,电极反应:阴极:HNO2He NOH2O阳极:NOH2OHNO2He,终点,NaNO2,电流,指示终点的方法：永停滴定法,二、应用与实例,（三）氧化还原滴定法 2.亚硝酸钠滴定法（2）应用 实例 盐酸克仑特罗含量测定 溶剂：盐酸溶液（12）滴定液：亚硝酸钠滴定液（0.05mol/L）滴定度：每lml亚硝酸钠滴定液（0.05mol/L）相当于15.68mg的C12H18Cl2N2OHCI,芳香第一胺,单选1.置换碘量法中所用的滴定液为（）A.碘滴定液 B.硫代硫酸钠滴定液 C.亚硝酸钠滴定液 D.盐酸滴定液 E.硝酸银滴定液2.可用亚硝酸钠滴定法测定的药物是（）A.Ar-NH2 B.Ar-NO2 C.Ar-COOR D.Ar-NHR,B,A,单选3.亚硝酸钠滴定法测定药物含量时，一般需加入溴化钾，其目的是（）A.使终点变色明显 B.抑制生成的重氮盐分解C.避免亚硝酸逸失 D.作为催化剂，加快重氮化反应速度E.防止偶氮化合物形成,D,单选4.关于亚硝酸钠滴定法的叙述，错误的是（）A.对有酚羟基的药物，均可用此方法测定含量 B.水解后呈芳伯氨基的药物，可用此方法测定含量 C.芳伯氨基在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐 D.在强酸性介质中，可加速反应的进行 E.反应终点多用永停法或外指示剂法,A,5.以冰醋酸为溶剂的是（）A.酸碱滴定法 B.亚硝酸钠滴定法 C.非水碱量法 D.非水酸量法 E.配位滴定法法,C,第二节 紫外-可见分光光度法,分光光度法是通过测定物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法,定量依据：朗伯-比尔定律 单色光辐射穿过被测物质溶液时，在一定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度成正比,一、基本原理,朗伯-比尔定律,吸收系数，溶液浓度为1%（g/m1），液层厚度为lcm时的吸光度值；,为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算）（g）；,为液层厚度（cm）,含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区（200400nm）或可见光区（400760nm）产生吸收 药物在可见光区若无吸收，但在一定条件下加入显色试剂或经过处理显色后，能对可见光产生吸收。,二、应用,(一)测定方法,选吸光度最大的波长作为测定波长。调节供试品溶液的浓度，使吸光度读数在之间。,1）对照品比较法：,条件：,A.待测物与对照品在相同条件下测定（同种物质，同台仪器，同一波长测，故 E、L相等）,B.待测物与对照品浓度相近,2）吸收系数法（绝对法）,3）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定。影响显色因素很多，故需注意平行操作。空白对照：溶剂+显色剂，同法处理,4.标准曲线法 用对照品的溶液，以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量,注：复杂，当吸光度和浓度关系不呈良好线性时用。,（二）仪器的校正和检定,b.吸光度的准确性,a.波长的校正,c.杂散光的检查,（二）仪器的校正和检定,（二）仪器的校正和检定 1.波长：常用汞灯中的较强谱线、氘灯的谱线、钬玻璃尖锐吸收峰、高氯酸钬溶液 2.吸光度的准确度：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波长处测定并计算，应符合下表规定,3.杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，规定波长处测定透光率，应符合下表规定,（三）对溶剂的要求 含有杂原子的有机溶剂，使用范围不能小于截止使用波长,三、实例,（一）奥沙西泮片含量测定,20片，精密称定,研细,片粉，W,200ml量瓶,150ml甲醇,奥沙西泮溶解,定容，摇匀,过滤,5ml续滤液,100ml量瓶,乙醇,稀释，定容,UV,检测波长：229nm吸收系数：1252,吸收系数法,三、实例,（二）呋喃唑酮含量测定,约20mg，精密称定,研细,250ml量瓶+40ml二甲基甲酰胺,溶解定容,精密量取10ml,100ml量瓶,水,定容,对照品：呋喃唑酮检测波长：367nm,对照品比较,第三节 色谱分析法,一、高效液相色谱法,（一）基本原理,一、高效液相色谱法,（二）应用1.对仪器的一般要求(1)色谱柱反相：十八烷基硅烷键合硅胶正相：硅胶离子交换：离子交换填充剂分子排阻：凝胶或高分子多孔微球,C18硅胶表面,一、高效液相色谱法,温度要求：40流动相pH：28,2.检测器,常用紫外检测器其次有二极管阵列检测器(DAD)荧光检测器示差折光检测器蒸发光散射检侧器电化学检测器和质谱检测器等,(3)流动相 1.甲醇-水、乙腈-水 2.尽可能少用含有缓冲液的流动相 3.有机溶剂比例不能低于5%,药品标准中规定的色谱条件，固定相种类、流动相组成、检测器类型不得任意改变，其他均可适当改变，以适应系统适用性实验的要求。,1.高效液相色谱图：信号-时间曲线,2.高效液相色谱系统适用性试验（1）色谱柱的理论板数（n）,（2）分离度（R）,除另有规定外，定量分析时分离度应大于1.5,（3）重复性（R）连续进样，峰面积，RSD2.0%,（4）拖尾因子（T）,T：0.951.05,3.测定方法（1）外标法,X：供试品R：对照品,供试品供试品溶液对照品对照品溶液,（2）内标法对照品+内标,（2）内标法供试品+内标,3.测定方法（3）加校正因子的主成分自身对照法（4）不加校正因子的主成分自身对照法（5）面积归一化法,二、气相色谱法,（一）基本原理,有机溶剂的气相分离图谱,（二）应用1.对仪器的一般要求（1）载气源：氦气、氮气、氢气，纯度99.99%以上（2）进样部分：采用溶液直接进样或顶空进样（3）色谱柱：填充柱或毛细管柱,毛细管柱和填充柱,色谱柱为填充柱或毛细管柱 常用的固定液有甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。新填充柱和毛细管柱在使用前需老化以除去残留溶剂及低分子量的聚合物；色谱柱如长期未用，使用前应老化处理，使基线稳定。,（4）柱温箱：控温精度应在1，且温度波动小于每小时0.1（5）检测器：火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、氮磷检测器（NPD）、电子捕获检测器（ECD）、质谱检测器（MS）等（6）数据处理系统：记录仪、积分仪以及计算机工作站等,2.系统适用性试验（和液相相同）3.测定法（1）内标法（2）外标法（3）面积归一化法（4）标准溶液加入法 测定供试品中某个杂质或主成分含量,
