动物细胞融合与单克隆抗体上课课件.ppt
,从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再将胚胎移到另一只母羊丙的子宫内，出生的小羊大多数性状 A.难以预测 B.像甲 C.像乙 D.像丙,练一练,2.下列有关克隆的叙述，不正确的是A.生物体通过体细胞进行的无性繁殖 B.将某种瘤细胞体外培养繁殖成大量细胞C.扦插和嫁接实质上也是克隆 D.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA中,练一练,2002年月日，两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批”太空娃娃”终于顺利诞生。对照实验结果表明，细胞融合率大大提高。,STS,“太空婚礼”,神舟放飞强国梦,“太空婚礼”科研项目一：,“太空婚礼”科研项目二：,挑战自我,植物体细胞杂交技术,动物细胞融合技术,植物体细胞杂交过程示意图,“太空婚礼”植物科研项目计划书,细胞膜的流动性、细胞的全能性,酶解法去壁,物理法化学法,原生质体的制备,原生质体的融合与筛选,杂种细胞的形成与培养,杂种植株的鉴定与筛选,克服远缘杂交不亲和获得具优良性状的杂种植株,同核体,同核体,异核体（杂交细胞）,人工诱导,还有3个3个以上细胞的融合-,A,A,B,B,B,A,物理法 的融合效率较高,且对细胞（原生质体）的伤害小,易操作、控制和观察。,太空中处于失重状态，不同种细胞（原生质体）更容易亲近；,为什么在太空中细胞（原生质体）融合率会大大上升？为什么选用物理法诱导？,请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容问题：什么是动物细胞融合？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的过程、基本原理、诱导融合方法和意义是否相同？,1.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法,为什么灭活的病毒能作诱导剂？,灭活丧失感染性,保留融合活性,鼠B淋巴细胞,鼠骨髓瘤细胞,人工诱导,1.2动物细胞融合的概念,杂交瘤细胞,动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。,1.3动物细胞融合技术的意义和应用,问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？,2.1单克隆抗体的概念,一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激B淋巴细胞，使其分裂分化出特异性的效应B细胞，分泌特异性抗体。,抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念,人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,2.1单克隆抗体的概念,单:单个细胞 克隆:无性繁殖单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体,提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？,提示3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？,问题：如何大量生产单克隆抗体？,2.2单克隆抗体的制备,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交瘤细胞,动物细胞培养技术,设计方案：,动物细胞融合技术,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞,实验目的:制备单克隆抗体.实验原理：实验过程：,1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验,2.2单克隆抗体的制备,看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？,描述单克隆抗体制备过程步骤,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,专一抗体检测,克隆化,单克隆抗体,有限稀释法培养 筛选2,1.注射抗原的目的是什么？,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,专一抗体检测,克隆化,单克隆抗体,有限稀释法培养 筛选2,2.诱导细胞融合的手段有哪些？,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,专一抗体检测,克隆化,单克隆抗体,有限稀释法培养 筛选2,3.若细胞两两融合后，有几种融合情况？,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,专一抗体检测,克隆化,单克隆抗体,有限稀释法培养 筛选2,4.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？,5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？,有限稀释法稀释多次,稀释,将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。,问题：单克隆抗体的突出优点是什么？,特异性强、灵敏度高,克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。,2.3单克隆抗体的应用,诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速,运载药物(“生物导弹”单抗导向，药物为弹头),治疗疾病,现在你能主持“太空婚礼”动物科研项目了吗？,细胞膜的流动性、细胞的全能性,膜的流动性、细胞增殖,酶解法去壁,小鼠免疫处理、细胞分散,物理法化学法,物理、化学、生物法,原生质体的制备,融合亲本细胞的准备,原生质体的融合与筛选,动物细胞融合与两次筛选,杂种细胞的形成与培养,产特定抗体的杂交瘤细胞培养,杂种植株的鉴定,单克隆抗体的分离提纯,单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防,获得具优良性状的杂种植株,课后作业,通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集资料，了解细胞融合技术与单克隆抗体的新进展，就自己感兴趣的领域，自定选题，写一篇综述报告。参考选题：1、1984年诺贝尔生理学或医学奖2、单克隆抗体的种类；3、单克隆抗体与疾病诊断；4、生物导弹；,
