动物细胞培养和核移植技术新.ppt
动物细胞工程,动物细胞工程的技术手段,动物细胞工程技术的基础,动物细胞培养,一、动物细胞培养过程,阅读“动物细胞培养过程”并思考：,1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？特点是什么？2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？6、简述动物细胞培养的操作过程,从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,一、动物细胞培养1、动物细胞培养的概念,2.动物细胞培养的原理：细胞增殖,下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是。,动物胚胎或幼龄动物,剪碎,胰蛋白,防止细胞间接触抑制现象，使细胞与培养液充分接触，便于培养,（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基特有成分有 _。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到这时的培养称为_。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 处理，然后配置成，再分装。,动物血清,10,原代培养,胰蛋白酶,细胞悬液,定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。,胰蛋白酶处理,取出组织,胚胎或幼龄动物器官组织,剪碎,单个细胞,细胞悬液,转入培养瓶内培养（贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。,原代培养,过程,图示,原代培养,细胞悬液,CO2培养箱,细胞贴壁过程,细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。,培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,接触抑制,原代培养：传代培养：,原代培养与传代培养的区别,分装之前，10代以前,分装后继续培养，10代以后,3.动物细胞培养条件：,1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH 36.5+（-）0.5度4、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）,保证细胞顺利的生长增殖,动物细胞培养液的主要成分：,葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。,（1）液体培养基,（2）含有动物血清,动物体细胞大都生活在液体的环境,2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？,1、较植物组培培养基有何独特之处？,独特 1、液体培养基 之处 2、成分中有动物血清等,这些组织或器官上的细胞分裂能力强,3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？,防止细胞间接触抑制现象，使细胞与培养液更充分接触,4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，而不能发育成个体,5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？,能,6、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？,不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近,4.动物细胞培养应用,大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据,二.动物细胞核移植技术和克隆动物,将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。,1.动物细胞核移植概念：,2.体细胞核移植的过程：,（难度高）,去 核,注 核,重组细胞,取供体细胞传代培养10代以内的细胞.,用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（M中期）,激活方法：激活目的：,促融方法：电刺激,胚胎移植至代孕受体内,妊娠、分娩,供体：优质高产奶牛,受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）,1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。,有人说它三个母亲，对吗？,细胞质,细胞核,细胞核移植,多莉羊的培育过程,1、卵母细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞2、原因？,细胞比较大，易操作细胞质中含有使体细胞核全能性表达出来的物质,3、克隆过程运用的技术手段？,动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植,4、结论？,高度分化的体细胞核具有全能性,5、体现细胞核的什么功能？,3.体细胞核移植技术的应用前景：,1.加速家畜遗传改良的进程,2.保护濒危物种,3.生产医用蛋白质及组织器官的移植,4.了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病,3、体细胞核移植技术存在的问题 P50,（1）成功率非常低（2）克隆动物以表现早衰、生理缺陷等健康问题 成功率低，绝大多数克隆动物存在健康问题并表现出遗传和生理缺陷：如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。,小结：,动物细胞工程,1、在动物细胞培养过程中，下列哪种现象是不可能的（）A细胞一直在细胞悬液中分裂生长B有少部分细胞可能在培养条件下无限地传代下去C有部分细胞核型会发生变化 D.个别细胞会发生基因突变,2、下列过程与细胞培养无关的是-（）A.检测有毒物质 B.生产单克隆抗体 C.筛选抗癌药物 D.杂交育种,A,D,练习：,
