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    《基因工程的基本操作程序》课件(新人教版选修3).ppt

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    《基因工程的基本操作程序》课件(新人教版选修3).ppt

    基因工程的基本操作程序,基因工程基本操作的四个步骤:,目的基因的获取,基因表达载体的构建,将目的基因导入受体细胞,目的基因的检测与鉴定,一、目的基因的获取,1、目的基因的来源,2、获取目的基因的常用方法,从自然界已有的物种分离人工方法合成,从基因文库中直接获取 如果需要大量的目的基因,需要对目的基因进行PCR技术扩增,(一)从基因文库中直接获取,按照外源DNA片段的来源:从特定组织提取的染色体基因组DNA-基因组DNA文库(总)mRNA反转录成的cDNA拷贝-cDNA文库(部分),基因文库的目的,为了在不知目的基因序列的情况下,便于获得所需的目的基因。,基因文库的分类,限制酶,基因组DNA,基因重组,转化细菌,体外包装,(一)从基因文库中直接获取,基因组文库,(一)从基因文库中直接获取,1.基因文库,基因重组,反转录酶,mRNA,cDNA,2.部分基因文库,(二)利用PCR扩增目的基因,1、过程,高温变性(解旋为单链),低温退火(引物与单链互补结合),适温延伸(在Taq酶的作用下合成 与模板互补的DNA双链),重复循环,1、过程,(二)利用PCR扩增目的基因,(二)利用PCR扩增目的基因,2、条件,已知基因的核苷酸序列、,四种脱氧核苷酸、,引物,TaqDNA聚合酶,使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增,4、结果,耐高温,3、方式:以指数方式扩增,即_(n为扩增循环的次数),2n,适宜的温度和PH值,思考:作为基因工程表达载体,只需含有目的基因就可以完成任务吗?为什么?,2、构建过程,目的基因启动子终止子标记基因复制原点,1、基因表达载体的组成,想一想:其中有两个DNA片段连接形成的的产物有几种?,载体与表达载体的区别:二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构用到的工具酶:既用到限制酶切割载体,又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接,两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键启动子、终止子对于目的基因表达必不可少目的基因不能单独进入受体细胞,必需以表达载体的方式携带进去。,注意,1、导入植物细胞,农杆菌转化法:,表达载体导入农杆菌,再让农杆菌感染植物细胞,基因枪法花粉管通道法,显微注射法:将基因表达载体提纯,用显微仪 注射到受精卵中,2、导入动物细胞,3、导入微生物细胞,原核生物特点:繁殖快、单细胞、遗传物质少,用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子,方法:,1、分子水平的检测:分子杂交技术,检测是否插入目的基因,检测是否转录出mRNA,检测目的基因是否翻译 成蛋白质,2、个体水平的鉴定,DNA分子杂交技术,抗体与相应的蛋白质进行抗原抗体杂交,看是否有杂交带,分子杂交技术,四、目的基因的检测与鉴定,归纳:基因工程的基本操作程序,获取目的基因从基因文库利用PCR技术构建基因表达载体目的基因、启动子、终止子、标记基因将目的基因导入受体细胞农杆菌转化法、显微注射法、基因枪法目的基因的检测与鉴定检测:是否插入、转录、翻译、个体水平的检测,1有关基因工程的叙述正确的是()A限制酶只在获取目的基因时才用 B重组质粒的形成是在细胞内完成的 C质粒都可以作为运载体 D蛋白质的氨基酸排列顺序可以为合成目的基 因提供线索,练习:,2科学家已经能够通过基因工程的方法,能使番茄果肉细胞中含 有人奶蛋白。以下有关该基因工程的叙述错误的是()A.采用反转录的方法得到的目的基因有启动子、终止子 B.用同种限制酶处理质粒和含目的基因的DNA,可产生相同的 黏性末端而形成重组DNA分子 C.番茄的叶肉细胞可作为受体细胞 D.启动子对于目的基因在番茄的叶肉细胞中的表达是不可缺少 的,B复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原 则完成C延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸DPCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高,3多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环:95下使模板DNA变性、解链55下复性(引物与DNA模板链结合)72下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是,A变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键,也可利 用解旋酶实现,3、假设以大肠杆菌质粒作为运载体,并以同一种限制性内切酶切割运载体与目的基因,将切割后的运载体与目的基因片段混合,并加入DNA连接酶。连接产物至少有_种DNA分子,它们分别是_。,基因工程又叫基因拼接技术。,1、在该技术中,用人工合成方法获得目的基因的途径之一是:以目的基因转录的_为模板,_成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合,成。,求是_。,2、基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、,_。,若将真核基因在原核细胞中表达,对该目的基因的基本要,

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