水稻茎线虫检疫鉴定.ppt
水稻茎线虫检疫鉴定方法,Methods for quarantine and identification of Ditylenchus angustus(Butler)Filipjev,一、背景由来,水稻茎线虫1912年首次在孟加拉发现，人们称之为Ufra、DakPora。,二、地理分布,水稻茎线虫目前主要分布于亚洲和非洲的水稻生长区，包括孟加拉、缅甸、泰国、乌兹别克、印度、菲律宾、印度尼西亚、巴基斯坦、越南、柬埔寨、埃及、苏丹、南非、阿联酋、马达加斯加、古巴等国家。,我国目前未见分布报道,三、寄主,水稻（Oryzae sativa）是该线虫的最主要寄主，另外，该线虫还寄生稻属植物的其他一些种。外寄生于水稻，生殖只能在稻株内进行，主要寄居于花梗的基部、茎杆末节以上以及颖片之内，这些地方大多有包括卵到成虫各个阶段的大量线虫。,四、危害症状,世界发病区平均减产水稻30，部分地区更严重。如印度尼西亚水稻受害减收50，泰国水稻少收2090，还有少数地区水稻受害后绝收，中国未见报道。田间早期症状表现为病株幼叶基部捻卷，出现白色或浅绿色斑点，叶片和叶鞘产生褐色斑，叶缘卷缩，叶尖弯曲，叫鞘扭曲。病株抽穗后基部通常卷曲，不能结实，或只有顶部小穗能产生正常稻粒，花轴和枝梗为暗褐色，穗和剑叶扭曲。有些病株在下部节位可能肿大，并产生不规则的分支，穗包在叶鞘内不能抽出或仅部分抽出。,四、危害症状,在发病的水稻植株发育的各个阶段，都可发现水稻茎线虫的卵、幼虫和成虫。在水稻秧苗移栽后几天，在花芽顶端就可发现该线虫，并且随植物的生长到新形成的组织器官上营外寄生生活。在水稻的花期和抽穗期，线虫主要在茎的柔嫩部位，叶鞘、茎秆、未授粉的扭曲的谷粒和畸形花梗中活动。被为害的植株矮化，叶片常萎缩。最后一个节间上方的叶鞘和枝芽扭曲，蜷曲。总花梗蜷曲，花梗产生未授粉的小穗。在线虫所处部位以上的一至几个茎节上产生特征性病变。,四、危害症状,Padwick(1 950)和Webster(1972)观察描述，根据是否出现圆锥花序，水稻受害后可分两类典型症状，一类是肿大Ufra，其花序包在叶鞘里，不能抽穗，受侵染茎部分枝强烈增多；另一类是成热Ufra，花序能抽出，但只有顶部小穗能产生正常稻粒花轴和枝梗为暗褐色，下部的花不结实，这主要是由于后期花序受害。重病植株生长仃滞，严重矮化，叶片萎蔫。Cox和Rahman(1980)又提出了另一类Ufra,这一类花序完全能抽出，但是有很多瘪粒。,四、危害症状,本病症状最明显是在穗期，但在水稻生育早期也可见到。病株类似条纹花叶病毒，褪色条纹纵贯全叶，随着时间增长而愈益清晰。全叶捻转或呈严重畸形，有时幼叶基部出现皱缩，然后褪变为白绿色。大田病状常在移栽后两个月出现，苗期叶片褪绿和变形，但病状常隐蔽不明显，易与健株混淆，需俟一段时间过后，才有少数褐色污斑在叶和叶鞘上出现。不久，污斑变黑而上部节间的秆也转为暗褐色。至抽穗期，由于被害时间和受侵程度不同，病株各异。上部叶片是主要被害部分，抽穗后，症状非常明显，极易识别。分型如下：,四、危害症状,膨肿型 线虫破坏始于穗形成的早期，这种病穗紧裹叶鞘里面，不能抽出，呈纺锤形肿大，剥去叶鞘，可见病穗已变为褐色，并捩曲歪扭，不结实。花的各部也退化难辨。成熟型 穗形成的早期已过，线虫开始破坏。这种病穗，可以从叶鞘中抽出，并能结成一些正常谷粒，特别是靠近穗的顶部，但穗的下部小花全不受精，或仅有部分小花结实。花梗呈暗褐色到黑色。中间型 穗仅部分抽出，显示细弱而不结实。病株常在被害处，形成分枝，即在同一叶鞘内伸出24根扭曲的穗。其中有只有主穗形成的穗，大小正常。,五、病原菌,水稻茎线虫学名：Ditylenchus angustus（Butler，1913）Filipjev。,英文名:Rice stem nematode。分类地位:线虫门，侧尾腺纲，垫刃目Tylenchida，粒线虫科Anguinidae，茎线虫属 Ditylenchus Filipjev，1936,1、分类地位,五、病原菌,稻茎线虫一生中同样经过卵、一龄幼虫(卵中渡过)、二龄幼虫、三龄和四龄幼虫及成虫几个阶段，是典型线虫生活史型。线虫在病稻草、稻茬、种子及混在种子里的病残碎片中越冬，并成为初侵染源。水稻播种出苗后，潮湿条件下，稻的茎叶表面有水时，带到田里的病原线虫就从土壤往上爬，入侵茎杆的有关部位，为害生长点附近的叶和穗，据报道，在水稻移栽后几天内，生长点的顶芽上就发现了该病原线虫，并逐步蔓延到叶鞘、茎种子周围幼嫩的茎里，产生各种病害症状虽然稻株各部都能发现线虫，但它们只外寄生在各部幼嫩组织内寄生。,2、生物学,五、病原菌,在干旱和稻接近成熟时，病原线虫卷曲停止取食并变得不活跃，形成间生态，聚集成棉花团状，进行休眠，以渡过不良坏境。休眠的该种线虫在干燥条件下能活15个月以上，待潮湿条件出现或水稻生长季中，它们立即恢复活动，在水中能存活4个月。病原线虫入侵寄主的最适温度是20一30。,五、病原菌,一般在耕种后5-7月份、11月份，线虫就在寄主植物内繁殖。Buttler(1936b)报道线虫一季可繁殖3代，每条雌虫能产卵50-100个。Miah和Bahr(1977)观察到在温度为28-30、相对湿度超过80%的条件下有利于线虫感染、病害发生及其繁殖。一龄幼虫在卵内完成，整个发育阶段从二龄幼虫开始只须15天；在人为条件下，整个生活史则需24天完成。在一般的条件下，如果卵直接产生在湿茎中，二龄幼虫就不用再花时间去寻找宿主，这样整个发育阶段就有可能缩短。四种幼虫可根据其体长不一来进行区分。8月份，植株处在未成熟阶段而在水分充足的条件下，成虫数量达到顶峰，经过繁殖，成虫可由1增加到3000。Catling等（1979）报道在一水稻茎杆中有30000条线虫，而且在寄主植物上可看到其生活史的各个阶段。,五、病原菌,水稻茎线虫运动和发育都需要高湿度，从水稻播种开始，如果一生中雨水都多，湿度大，有利于病原线虫繁殖、运动和入侵寄主，病害发生就会加重，干旱季节，发病就轻。国外资料表明，在孟加拉国，一年种几季水稻，在雨季中长的水稻受害重，秋稻受害轻，固为线虫群体密度还没有达到高峰时，水稻就成热收获了。而1月到4月生长的第三季稻，因生长期是当地的干旱季节，几乎不受感染。另外，线虫在冬天和春天能活下来的群体数量越多，下一个生长季节就很活跃，加重病害发生。,六、传播途径,本病原可从秧苗移植传到大田，再靠田间排水、灌水及雨水，由一块田传到另一块田。在潮湿的条件下，病健株间彼此接触摩擦也可传播，收获后病田内的根茎、病株残体为下一年的初侵染源。病种子也能传播该线虫。,1、适用范围,稻种中的水稻茎线虫稻草中的水稻茎线虫稻草编织物（袋、绳、席等）中的水稻茎线虫,七、检疫鉴定方法,2、原理,水稻茎线虫 Rice stem nematode，学名：Ditylenchus angustus（Butler，1913）Filipjev，线虫门，侧尾腺纲，垫刃目，粒线虫科，茎线虫属。外寄生于水稻，生殖只能在稻株内进行，主要寄居于花梗的基部、茎杆末节以上以及颖片之内，这些地方大多有包括卵到成虫各个阶段的大量线虫。水稻受害后叶面出现浅绿色斑点，叶缘卷缩，叶尖弯曲，整张叶片扭曲或呈畸形，严重时花穗捻转或包在叶鞘内不能抽出，小穗不孕，形成空粒。,七、检疫鉴定方法,2、原理,本病主要由稻种内潜伏的线虫作远距离传播，通过引种传带到新稻区，还可通过患病的稻草作远距离传播。土壤中残留的线虫以及带线虫的病稻草、稻茬、种子或混在种子里的病残碎片为当地次年发病的主要来源。它的侵染循环、传播途径、寄主范围、生物学和形态学特征是该检疫鉴定方法的依据。,3、仪器、用具,生物显微镜体视显微镜凹玻片试管载玻片盖玻片加热板（80oC以下）烧杯（500ml、1000ml）,漏斗漏斗架研钵培养皿剪刀跳针干燥器冰箱,3、仪器、用具,打孔器酒精灯乳胶管纱布止水夹指形管玻璃纤维（3mm5mm）,、药品,指甲油TAF固定液（40%甲醛7ml、三乙醇胺2ml和蒸馏水91ml混合而成）乳酚油（苯酚20ml、乳酸20ml、甘油40ml和蒸馏水混合而成）石蜡,5、现场检疫,5.1.1 抽样方法：,5.1 抽样,棋盘式、五点式、随机抽样,5.1.2 抽样数量,5.1.2.1 稻种,按总件数的 5%20%抽样，最低抽检10件。取样的数量为：10 kg 以下取2 kg；11 kg 100 kg 取 4kg；101 kg 500 kg 取 6 kg；501 kg 000 kg 取8 kg；1001 kg 2000 kg 取10 kg；2001kg5000kg取12kg；5001kg10000kg取14kg；10001100000kg每增加5000kg增取2kg；不足5000kg余量记取2kg。,按总件数的5%20%抽样，每次检查不得少于10件且不少于500根。取样的数量为：50根以下取5根，51根200根取10根；201根1000根取15根；1001根5000根取20根；5001根以上，每增加5000根增取5根样品，不足5000根的余量计取5根样品。,5、现场检疫,5.1.2.2 稻草及其编织品,5.2 外观症状的检查,5.2.1 水稻种子的检查,首先要注意检查褐色畸形种子，其次要看稻种内是否混有稻草或其他水稻残体，同时注意是否夹带泥土等，收集后与采样的样品一并送实验室进行检查。,5、现场检疫,5.2.2 稻草及其编织品的检查,注意检查叶鞘颜色异常、叶缘卷缩、叶尖弯曲、整张叶片扭曲或呈畸形、草秆短小的稻草及其编织品。收集上述可疑植物材料及所夹带的土壤等与采集的样品一并带回实验室检验。,6、实验室检验,抽样所得种子，可将稻种去壳，利用漏斗法分离颖壳中可能带有的线虫。分离所得的线虫制成临时玻片，在显微镜下观察，并根据形态鉴定特征进一步鉴定。,6.1 稻种检验方法,对于畸形、不饱满的种子，可直接在体视显微镜下解剖，检查有无线虫。如有线虫，制成临时玻片，在显微镜下观察，并根据形态鉴定特征进一步鉴定。,贝曼漏斗法,*浅盘贝曼漏斗法分离线虫过程简介,*浅盘贝曼漏斗法分离线虫过程简介,网盘,漏斗,乳胶管,止水夹,试管,面巾纸,*浅盘贝曼漏斗法分离线虫过程简介,*浅盘贝曼漏斗法分离线虫过程简介,*浅盘贝曼漏斗法分离线虫过程简介,*浅盘贝曼漏斗法分离线虫过程简介,6、实验室检验,6.2 稻草及其编织品的检验方法,将采得的样品适当处理成小段，用漏斗法分离。收集所分离的线虫，在体视显微镜下观察，并挑取若干条线虫至载玻片上，制成临时玻片，在显微镜下观察，并根据形态鉴定特征进一步鉴定。,7、形态鉴定特征,雌虫：一般不肥大，不弯成螺旋形，长0.6mm1.5mm，有的可达2mm；表皮有很细的环纹，侧区有四至六条刻线；口针细小，多数长度为7m11m；中食道球有或无瓣，偶尔无明显的中食道球，峡部与后食道腺之间无缢缩，后食道腺短或长，不覆盖、短覆盖或长覆盖肠；单生殖腺、前伸，卵巢短或长，有时伸达食道区或转折，卵母细胞一行至二行排列，子宫柱状部有四排细胞（每排四个细胞），后阴子宫囊有或无。,7.1 茎线虫属鉴别特征,7、形态鉴定特征,雄虫：精巢不转折，精细胞大（通常直径3m5m），交合伞不伸到尾端，延伸至尾长的四分之一至四分之三处。交合刺窄细，基部宽大，其上具特殊的突起。两性尾形相似，呈长圆锥形到近柱形，偶尔丝状，多数（尾长肛门或泄殖腔处体宽）为。寄主不形成虫瘿。幼虫：在总的形态方面与成虫相似。食道按比例长于成虫的食道。,7.2 水稻茎线虫形态鉴定特征,7.2.1 测记值雌虫：I800l200微米；a5062；b=69；c1824；c5254；V7880；st=l0-1l微米。雄虫：L700-l180微米；a40-55；b=68；c1926；st=10微米；sp1621微米。,7、形态鉴定特征,7、形态鉴定特征,7.2.2 形态描述 雌虫：体细长，较直，侧带区有刻线4条，外侧较明显。唇区低，前端平圆，不缢缩。口针强壮，9-11m长，针锥较细，稍短于针干，基部球小而清晰，前缘向后顷斜，其宽度约2微米，中食道卵圆形，肌肉发达，食道狭部向后渐渐膨大，连接食道后部。食道腺近末端分小叉，略盖肠前端。生殖系统为前生卵巢。单生殖腺，向前直伸，卵母细胞单列，受精囊长袋状；后子宫囊长度为肛阴距的5067；阴门斜裂，其长度为阴门处体宽的12。尾呈均匀收细的圆锥形，约为肛径的5倍长。尾近末端急收成尖锐的指状，似一个尾尖突。,7、形态鉴定特征,雄虫体形除生殖系统和尾部形态外与雌虫相似，交合伞端生，交合刺垫刃型，1621m长，伸至尾末端，引带6-9m长。幼虫与成虫相似,只是食道要比成虫长。,8、结果判定,符合第7条形态特征鉴定的可鉴定为水稻茎线虫,八、防治,1、农业防治 毁掉病株是疫区最有效的治理措施，病区也可以在干旱季节犁田，将稻根翻到表面曝晒，大量的稻根用人工清理出田外烧掉，这样作可以减少下一季的侵染基数。轮作或休闲也是有效的防除措施。利用稻茎线虫只寄生稻属作物的特点，轮种其他非寄主植物1年或让病田休闲1年，就可以饿死田间土壤中的病原线虫。如水稻与芥菜轮作可明显减少茎线虫量；黄麻栽种在受过线虫感染的田块中也能减轻Ufra症状。播种或移栽深水稻要比平常延迟2-3个星期或等洪水退后进行，这样其侵染性就会减轻25-28%或者更多，当然采用这种防治措施受一定条件限制。,八、防治,在疫区建立无病留种田也是比较经济而必要的措施，这种方法最少可以减轻为害。当然能有适宜的抗病品种就更好，事实上，病害的防治中选育和选用抗病品种应该被列入综合防治的措施中。,2、化学药剂防治 尽管化学防治也是有效的，但其较贵，危险性大，此外，由于化学药剂使用较困难，如若在洪水期间使用又较危险，因此深水稻中化学农药的使用极有限，但无论怎样，许多化学药剂对Ufra引起的病害都比较有效。如果在播种前或移苗前使用呋喃丹3G1.0kg/ha比不施用的可减轻病害42-63%，可增产38-59%。根据Rahman(1985)的方法是，用药前把田水落到35厘米深，水稻移栽后的第7天和稻分蘖期间各用1次药，直接把配好的拌细土药撒入田间。具体药剂是：,八、防治,1.每公顷用3%呋喃丹1.5千克；2.每公顷用50%线畏磷10千克；3.每公顷用10%涕灭威3千克；4.每公顷用10%乙拌磷10千克。另一种方法是，将秧苗在杀线虫剂中进行蘸根处理，这种方法相对实惠而安全。秧苗可通过3%Miral和7.5-10%、2.5-10%的Tecto 40FL混合溶液蘸根而有效控制Ufra病害。,Thank you！,
