细胞生物学实验报告-鸡红细胞的融合.ppt

鸡红细胞的融合,实验报告,实验原理,主要内容,实验目的,实验用品,需要注意的问题,1,2,3,4,实验步骤,5,6,7,数据记录及处理,结果分析及讨论,绘图,一、实验目的（1）了解PEG诱导细胞融合的基本原理（2）通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技术,二、实验用品（1）器材：生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、滴管、离心管、试管架、盖玻片、载玻片、烧杯、吸水纸（2）试剂：0.85%生理盐水、50%PEG、GKN溶液、Alsever溶液（3）实验材料：鸡红细胞,三、实验原理 同种或异种细胞在一定介质（如病毒、化学因子或电场）的诱导下，可发生细胞间的的融合，形成较大的双核或多核细胞。聚乙二醇（PEG)可与水分子借氢键结合，在高浓度（50%）的PEG的溶液中，自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合，PEG融合技术的关键是要选择合适的相对分子质量（10006000）、浓度（30%50%）以及作用时间。,click,四、实验步骤（1）鸡血与Alsever溶液按1:4混匀，4冰箱中保存（2）取1ml细胞悬液，加Alsever溶液稀释2025倍（3）取上稀释悬液1ml，加5ml0.85%生理盐水混匀,（4）1000rpm离心上述溶液5min，去上清液，重复操作3次,（5）第三次离心去上清液后，加GKN 0.5ml制成10%悬液，放在37水浴箱预热23min,（6）逐滴0.25ml的50%的PEG溶液，边加边摇匀，37恒温静置15min,（7）取上述液一滴，盖上盖玻片，镜检,五、数据记录及处理观察四个视野中的细胞，记录鸡血细胞融合情况如下表所示,2、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合的细胞核数为12个，视野内所有细胞核总数为105个，由公式：融合率=视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细胞核数 100%=12/105 100%=11.4%3、实验结果：鸡红细胞的融合率为11.4%,七、结果分析及讨论,八、绘图,