植物生理学实验-植物组织中硝态氮含量的定量测定.ppt

植物体内硝态氮含量的测定,教师提前烧水，讲解完内容后打开分光光度计开关2 学生进教室先做硝态氮提取，后讲解实验内容。,一 测定意义：,1、作为施肥指标：植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况。包括：硝态氮、亚硝态氮。,2、鉴定蔬菜及其加工品质：蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康。因此，硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。,人体摄入的硝态氮81.2来自蔬菜，当人摄取得硝酸盐量较大时，体内的NO3还原成NO2进入血液，将血液中的血红素变成高铁蛋白，引起肌体中毒。NO2还可以间接与次级胺结合形成强制癌物质亚硝胺。咸菜的腌制初期咸菜内会大量积累硝酸盐，硝酸盐含量升高数倍或数十倍，当咸菜腌制成熟后硝酸盐含量减少（很低），所以，咸菜没有腌制完成之前，不要食用。青菜放置时间延长一天，体内的硝酸盐含量会不断增加，购买蔬菜后及时食用，不要放置时间过长，减少硝酸盐的积累。,二 测定原理：水杨酸法,在浓酸条件下，NO3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。,硝基水杨酸在碱性条件下（pH12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。,小白菜：绿叶片、叶柄两个小组合作，一个小组测叶片，另一个小组测定叶柄。二者必须是同几株上的材料。,三、实验材料,所用仪器、试剂已备好在实验台上,四、操作步骤：,C(g/ml)=110.99D410+6.30(S22P型分光光度计),2样品中硝酸盐的提取和测定,1标准曲线的制作（学生不做）,冲洗残渣，定容,材料剪碎、混匀，精确称取材料2g,3次重复,加无离子水10 ml,沸水浴中提取30min（最好2次，受实验时间的限制，本次实验提取1次）,塞子封口，橡皮筋捆扎在一起,自来水冷却，过滤到25ml容量瓶,同几株小白菜（叶片或叶柄）,硝酸盐的提取,样品液的测定 比色,4支试管,空白试管,3样品试管,加5%水杨酸-硫酸 0.4ml（室温放置20min）,冷却比色（410nm）,加 9.5ml 8%NaOH,加 0.1ml蒸水,各加0.1ml样品液,硝酸盐的测定,式中：C标准方程计算得NO3-N浓度 V提取样品液总量 W样品鲜重,3 结果计算：,NO3-N含量(g/g)=,CV,W,1、实验中使用强酸、强碱，一定要注意安全，防止倒在实验台、地面、仪器内，防止撒到衣物上，如果发生意外及时用水冲洗和擦洗。2、各个小组使用的试管自己洗刷一遍，防止前一个班使用后洗刷不干净，重复间误差较大。3、吸取0.1ml的样品液一定要准确，溶液加到底部，否则影响到结果的重复性。4、两组合作进行不同部位的测定，比色测定时必须用同一台分光光度计。,注意事项,5、分光光度计：倒液不超过比色杯2/3；推拉杆要轻避免液体溅出；比色杯用擦镜纸擦净；用完后及时洗净。6、加水杨酸浓硫酸时，在瓷盘中加，不要滴到外面。若滴出，尽快用水冲洗擦净。加完浓硫酸的移液管立即冲洗，放回试管架。7、废液（因含浓酸、碱）倒在专门收集容器内，切勿倒入水池内！,8、测定结束后，将试管彻底洗刷干净（因含强碱），倒置在试管架上。9、值日生负责注意清理分光光度计、比色皿、台面的清洗。,光照能促进硝酸盐还原过程光下植物通过光合作用合成的糖流出叶绿体后，经糖酵解产生NADH而用于NO3-还原。光能促进底物对NR的诱导，在一定范围内，NR活力随光强的增加而升高，光下生长的植物体内NR水平要比暗中生长的高得多。光合作用光反应中形成的NADPH和还原型铁氧还蛋白(Fd)可转化成NADH为硝酸还原提供还原力。光反应中形成的还原型铁氧还蛋白可直接用来还原亚硝酸进而促进NO3-还原。,