香菇多糖的复合酶法提取.ppt

香菇多糖的复合酶法 提取,香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质。,香菇多糖的作用：香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤，调节免疫力、降血糖、抗氧化等功能。有关香菇多糖的研究，特别是结构方面的研究已引起国内外学者的高度关注，并有望成为多糖领域的研究热点。,与其他抗肿瘤药物相比，香菇多糖几乎无任何副作用，对胃癌、鼻咽癌、直肠癌、乳腺癌和慢性粒细胞白血病等有抑制和防止术后微转移的作用，是目前已知最强的免疫增强剂之一。,香菇多糖的提取方法：,热水浸提法,超声波提取法,稀酸(碱)浸提法,微波法提取香菇多糖,深层发酵培养提取法,酶解法,酶解法：酶解法就是指在浸提的过程中加入相应的酶来水解纤维素、果胶、蛋白质分子等，以使多糖从细胞中分离出来。,酶法提取较其他方法的优点,1.其作用条件温和。2.通过酶法破壁去除杂质可以明显提高 提取率，缩短提取时间。3.可减少能源消耗。4.有效的保存多糖的生物活性。,复合酶提取香菇多糖：,香菇多糖的制备工艺,一.原料准备 二.提取 三.分离纯化,香菇的复合酶法提取,原料的准备和处理香菇烘干(50)粉碎过筛多糖提取原材料。,香菇的复合酶法提取,主要实验试剂及仪器 真空干燥箱，离心机，恒温振荡器，紫外可见分光光度计，傅里叶变换红外光谱仪，纤维素酶，木瓜蛋白酶,实验方法与步骤,反应结束，将三角瓶放到沸水锅中，10min沸水浴灭酶。,称取木瓜蛋白酶和纤维素酶按一定比例混合，加入5mL蒸馏水溶解。,香菇溶液放在水浴中预热至酶解温度，将酶液加入到香菇溶液中，在恒温振荡器上提取。,称取80目的香菇粉2g，放入到250mL的三角瓶中，加蒸馏水35mL混合均匀后置于40水浴锅中，水浴30min，调节pH值。,灭酶结束，冷却至室温，将酶提取液放入到离心管中，调至4000 r/min离心，取上清液，即得到酶提取多糖清液。,香菇的复合酶法提取,香菇的复合酶法提取,分离纯化1.分离提取 用0.5%NaOH初步提取，之后取清液，用透析袋透去除杂离子，透析后去除杂蛋白，用活性炭脱色1 h，加入95%乙醇，使溶液中乙醇的浓度达到75%进行醇沉醇沉过程中要将其保存在4冰箱中，保持24 h，离心15 min，取沉淀，置于真空干燥箱中干燥，即可得到香菇粗多糖。,2.纯化 将香菇粗多糖水溶解后用色谱仪分离，干燥获得纯香菇多糖。,影响香菇多糖得率的因素：,随着复合酶浓度的增加，多糖提取率也逐渐增加，酶浓度大于0.4%后提取增加率趋于平缓，因此，最佳复合酶的浓度为0.4%。,1.复合酶的浓度对多糖得率的影响,2.料液比对多糖得率的影响,当料液比在115l25之间多糖提取率增长较快，继续提高料液比多糖提取率仍有升高，但提高速率减小因此最佳料液比为120,3.酶解时间对多糖得率的影响,由图可知,香菇多糖的提取率随酶促反应时间的延长增加。,酶法提取的应用前景：,酶法提取由于反应特异性强、条件温和易获得、提取时间短、提取率高、绿色节能等已引起广泛的关注，具有较大的应用潜力，且随着对酶法技术的不断研究，酶法与其他技术如超声波、超高压、微波等技术的联用也将成为另一个热点研究方向。,Thanks,