血液分析仪检验.ppt
,8/24/2023,临床检验基础,第二章 血细胞分析仪检验,本章目录,1,第一节 血细胞分析仪检测原理,2,第二节 仪器分析临床应用,3,第三节 仪器安装、使用、保养,4,第四节 校准、性能评价及比对,第五节 检验结果的质量保证,5,血液分析仪（hematology analyzer,HA）：临床血液一般检查最常用仪器。1953年美国Coulter申请了“粒子计数法”的技术专利，并成功研发了世界上第一台电阻抗式血细胞计数仪。,第一节 血细胞分析仪检测原理,血细胞具有相对非导电性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞通过计数小孔时，可引起小孔内、外电流或电压的变化，形成与血细胞数量相当、体积大小相应的脉冲信号，从而对血细胞进行计数，并根据体积大小间接区分出细胞群。此原理又称为库尔特原理（Coulter principle）。,一、电阻抗检测原理,细胞计数池中，小孔内外两个电极和稀释液构成一个电流回路，在负压作用下，细胞通过小孔，电极能感应到一个瞬间的电阻变化，并将其转换成脉冲，脉冲的数量代表细胞数量，脉冲大小反映细胞体积大小。,一、电阻抗检测原理,(一)血细胞计数原理,一、电阻抗检测原理,（二）血红蛋白测定原理,一、电阻抗检测原理,在被稀释的血液中加入溶血剂后，使红细胞释放出血红蛋白，后者与溶血剂结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长（一般在530nm550nm）下比色，根据吸光度的变化仪器便可显示血红蛋白浓度。,一、电阻抗检测原理,稀释后的血液经溶血素处理后，红细胞迅速溶解，白细胞膜通透性改变使胞质经细胞膜渗出、脱水，胞膜紧裹在细胞核或颗粒周围。脱水后的白细胞体积与其自然体积无关，取决于脱水后白细胞内有形物质的多少。,（三）白细胞分群原理,一、电阻抗检测原理,根据电阻抗原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异。依据脉冲的大小，电阻抗法血细胞分析仪可对白细胞进行分群。,（三）白细胞分群原理,一、电阻抗检测原理,三分群法的第一群为小细胞区，体积为35fl90fl，主要为淋巴细胞；第二群为中间细胞区也称单个核细胞区，体积90fl160fl，包括幼稚细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞；第三群为大细胞区，体积160fl以上，主要为中性粒细胞。,（三）白细胞分群原理,一、电阻抗检测原理,（三）白细胞分群原理,电阻抗法白细胞三分群示意图,（一）激光散射法,将细胞悬液注入鞘液流中央，单个细胞沿着悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以恒定流速定向通过石英毛细管。当细胞通过激光束被照射时，可阻挡或改变激光束的方向，产生与其特征相应的各种角度的散射光。放置在石英毛细管周围不同角度的信号检测器可接收特征各异的散射光。,二、光（化）学检测原理,（一）激光散射法,二、光（化）学检测原理,（二）分光光度法,主要用于血红蛋白测定。红细胞经溶血剂溶解释放出血红蛋白,并与溶血剂有关成分形成血红蛋白衍生物，在540nm特定波长下比色，吸光度与血红蛋白含量成正比，可直接反映血红蛋白浓度。,二、光（化）学检测原理,现代血液分析仪主要综合应用了电学和光学两大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和无形成分（血红蛋白）。,三、联合检测原理,应用电阻抗原理测量细胞体积,采用高频电磁探针测量细胞内部结构，如细胞核、细胞内颗粒,采用激光源单色光直接扫描细胞，产生不同角度散射光，提供细胞形态及胞核结构等光散射信息，以此鉴别粒细胞。,（一）体积、电导和光散射（VCS）法,三、联合检测原理,（一）体积、电导和光散射（VCS）法,三、联合检测原理,（二）光散射与细胞化学法,当细胞被激光束照射时，细胞因体积大小、细胞成分、细胞核形状、染色情况等各种特性的不同，可阻挡或改变激光束的方向，产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。检测不同角度的散射光信号，可分辨出各类细胞。,三、联合检测原理,（二）光散射与细胞化学法,1过氧化物酶染色通道,2嗜碱性粒细胞/核分叶通道,三、联合检测原理,（三）多角度偏振光散射法,应用固体激光流式细胞荧光技术，多角度检测白细胞和分类。,三、联合检测原理,（四）电阻抗、射频、流式细胞术与核酸荧光染色法,1白细胞分类通道（DIFF通道）,2白细胞/嗜碱性粒细胞（WBC/BASO）通道,3未成熟髓细胞信息（IMI）通道,采用半导体激光流式细胞技术结合核酸荧光染色技术进行白细胞计数和分类。,三、联合检测原理,（四）电阻抗、射频、流式细胞术与核酸荧光染色法,三、联合检测原理,（五）双鞘流技术和细胞化学染色法,在流式通道中有2个鞘流装置，细胞经第1束鞘流后通过阻抗微孔测定细胞的真实体积，然后经第2束鞘流后到达光窗，测定细胞的光吸收，分析细胞内部结构。,三、联合检测原理,血细胞分析仪各项检测参数及临床应用,一,血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,二,血细胞分析仪常见报警和干扰因素,三,血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则,四,第二节 血细胞分析仪分析临床应用,（一）红细胞参数及临床应用,一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用,血细胞分析仪红细胞系列检测参数,（一）红细胞参数及临床应用,一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用,RDW是反映红细胞体积大小异质性的参数，以标准差或变异系数来表示（CV%），有助于贫血的诊断与鉴别诊断。,红细胞体积分布宽度（RDW）,贫血的RDW和MCV分类,（一）红细胞参数及临床应用,一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用,HDW是反映红细胞内Hb含量异质性的参数，用单个红细胞Hb含量的标准差表示。,（2）红细胞血红蛋白分布宽度（HDW）,（二）白细胞参数,一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用,血细胞分析仪白细胞系列检测参数,（三）血小板参数,一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用,血细胞分析仪血小板系列检测参数,血细胞直方图,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,以测定的细胞体积（大小）为横坐标，细胞出现的相对频率（数量）为纵坐标，可绘制的血细胞直方图，主要包括白细胞、红细胞和血小板三种直方图。,（一）红细胞直方图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,正常红细胞直方图几乎为两侧对称、较狭窄的正态分布曲线，主要分布在50fl200fl区域。,（一）红细胞直方图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,（一）红细胞直方图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,不同类型贫血红细胞直方图的变化和常见原因,（二）白细胞直方图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,电阻抗型血细胞分析仪白细胞直方图为具有3个峰的光滑曲线，从左至右分别为：为淋巴细胞（小细胞群）、单个核细胞（中间细胞群）和中性粒细胞（大细胞群）或相当大小的细胞。,（二）白细胞直方图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,（二）白细胞直方图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,（三）血小板直方图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,正常血小板直方图呈左偏态分布，主要集中在2fl30fl范围内，主峰在7.6fl13.1fl之间。,（三）血小板直方图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,（四）散点图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,不同的检测原理，坐标上的散点所在象限平面图上的位置，如上下（高低）、左右、前后（可重叠）或散点群的疏密，均与相应类别的细胞形态、体积、内部结构、胞核、胞质及胞质颗粒数量等特性密切相关。,（四）散点图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,1.白细胞散点图,（四）散点图的临床应用,二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用,2.红细胞散点图,三种形式图形符号文字,标本自身检测环境,报警,Text,常见的干扰因素,Text,三、血细胞分析仪常见报警和干扰因素,四、血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则,2005年，国际实验室血液学学会提出了显微镜复查的41条建议性标准。但由于各临床检验室使用的仪器不同，服务的患者人群也有差异，“41条建议性标准”尚处于实践检验中，目前还没有被公认的复查标准。各实验室可根据ISLH建议的41条复检规则，并结合具体情况来制订切合实际、可操作的复查标准。,四、血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则,血细胞分析仪检测结果手工涂片复查真阳性标准,工作环境工作电压仪器安装仪器摆放,检测原理操作程序,日保养周保养月保养,检测器维护液路维护机械传动 部分维护,第三节 血细胞分析仪安装、使用、保养和维护,安装 使用 保养 维护,总体评价 性能评价,1校准条件2校准品定值 3建立仪器校准和校准验证程序4保证试剂质量,应对同一实验室不同血液分析仪测定结果进行比对，相关性良好后，定期校准一台性能较好的血细胞分析仪，将它作为参比仪器,校准,性能评价,比对,第四节 血细胞分析仪校准、性能评价及比对,分析前,分析中,分析后,第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证,检验人员的要求合适的检测环境合格的血液分析仪配套试剂合格的检测标本,仪器启动室内质控标本检测仪器清洁,检验结果审核检验结果解释建立危急值通知标本的保存仪器维护和保养定期征求意见,合适的检测环境,合格的血液分析仪,检验人员的要求,合格的检测标本,配套试剂,分析前质量控制,第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证,仪器启动,分析中质量控制,标本检测,仪器清洁,室内质控,第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证,检验结果解释,检验结果审核,建立危急值通知程序,仪器维护和保养,标本的保存,定期征求意见,第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证,谢 谢！,
