药物杂质检查技术.ppt
第三章 药物杂质检查技术,（三）杂质限量计算,L：杂质限量V：标准溶液体积S：供试品的量C：标准溶液浓度,取本品2.0g，加水100ml，加热溶解后，冷却、滤过，取滤液25ml，依法检查，与标准硫酸钾溶液1.0ml（100g/ml SO4）制成的对照液比较，不得更浓。计算硫酸盐的限量。,对乙酰氨基酚中硫酸盐的检查,取本品0.20g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液(92000)溶解，并稀释至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度，不得超过0.05，E为453，求酮体的限量。,肾上腺素中肾上腺酮的检查,1.药物中的杂质主要由 和 引入2.杂质限量是指药物中所含杂质的。通常用 或 来表示3.杂质限量的检查方法主要有、和 三种,点滴积累,第二节 一般杂质的检查,温故知新,简述下列概念药物的杂质一般杂质特殊杂质,一般杂质：在自然界中分布较广，多数药物的生产和贮存过程中容易引入的杂质方法：2015版药典将一般杂质的检查方法收载于四部通则中。注意：遵循平行原则,（一）原理：对照法（比浊法）,一、氯化物检查法,1.标准氯化钠溶液的制备 2.供试品溶液的制备 3.对照溶液的制备4.比浊 5.记录和结果判断,（二）检查方法,（二）检查方法,供试品,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,标准溶液,稀HNO310ml,H2O,AgNO31ml,暗处放置5min(避免AgCl分解),1.供试品管和对照液管的操作需要注意什么问题？2.加入硝酸的目的是什么？3.如何观察？4.供试品溶液如带颜色怎么处理？5.供试液如不澄清怎么处理？,（三）注意事项,（三）注意事项,一、氯化物检查,（三）注意事项,一、氯化物检查,供试品2倍量,量,量,样品,过滤至澄清,对照,二者平行试验，比较对照与样品的浑浊程度,内消色法（倍量法）：,20ml稀硝酸,1ml硝酸银,标准Cl-和1ml硝酸银,1ml硝酸银,一、氯化物检查,（三）注意事项：,1mlAgNO3,过滤,对照管,样品管,2倍HNO3,1mlAgNO3,1mlAgNO3,2倍量样品,1/2,1/2,一、氯化物检查,（三）注意事项：内消色法示意图,（三）注意事项,一、氯化物检查,A.所用比色管需配套B.稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C.避光放置5分钟D.用硝酸银标准溶液做对照E.在白色背景下观察,互动：下列哪些为药物中氯化物检查的必要条件,（一）原理：对照法（比浊法）,二、硫酸盐检查法,硫酸盐检查法的操作流程与氯化物检查法相同，包括：标准硫酸钾溶液的制备供试品溶液和对照溶液的制备加入沉淀试剂25%氯化钡溶液比浊记录和结果判断等,（二）检查方法,（二）检查方法P150,二、硫酸盐检查,供试品,标准溶液,稀HCl 2ml,稀HCl 2ml,H2O,H2O,25%BaCl21ml,25%BaCl21ml,H2O,H2O,摇匀，放置10min,试品管和对照液管的操作应注意什么问题？2.加入盐酸的目的是什么？3.如何观察？4.供试品溶液如带颜色怎么处理？5.供试液如不澄清怎么处理？,（三）注意事项,（三）注意事项,A.标准氯化钡B.标准醋酸铅溶液C.标准硝酸银溶液D.标准硫酸钾溶液 E.以上都不对,互动：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液,（一）原理：对照法（比色法）,三、铁盐检查法,标准铁溶液的制备供试品溶液和对照溶液的制备加入显色剂30%硫氰酸铵溶液比色记录和结果判断等,（二）检查方法,（二）检查方法,三、铁盐检查,供试品,显色，立即与同法制成的对照溶液比较,1.加入硫酸的目的是什么？2.加入盐酸的目的是什么？3.加入过硫酸铵的目的是什么？过量的目的又是什么？,（三）注意事项,三、铁盐检查法,过量,（三）注意事项,A.使药物中铁盐都转变为Fe3+B.防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C.使产生的红色产物颜色更深 D防止干扰 E便于观察、比较,互动：中国药典规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸铵的目的,重金属系指在试验条件下，能够与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。如银、锑、汞、铅、铜、铋、铬、锡、锌等重金属影响用药安全或药物的稳定性，必须严格控制其限量,四、重金属检查法,四、重金属检查,重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠试液作用而显色的金属杂质。以铅为代表,四、重金属检查,黄色至棕黑色混悬液,（一）检查原理,第一法和第二法：,第三法：,中国药典2015年版采用比色法检查，共收载了3种检查方法。主要讲解第一法 第一法：硫代乙酰胺法（一）原理：对照法（比色法）,第一法原理,1.标准铅溶液的制备 2.检查溶液的制备 对照溶液的制备（甲管）供试品溶液的制备（乙管）监控管溶液的制备（丙管）3.比色 4.结果判断,（二）检查方法,第一法,供试品,标准溶液,醋酸盐缓冲溶液2ml,H2O,硫代乙酰胺试液2ml,供+标,醋酸盐缓冲溶液2ml,H2O,醋酸盐缓冲溶液2ml,H2O,甲,乙,丙,当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检查,1.重金属硫化物生成的最佳pH是3.03.5 2.标准铅溶液应在临用前精密量取铅贮备液新鲜稀释配制，以防止硝酸铅水解而造成误差,配制与贮藏用的玻璃容器均不得含铅3.第一法中的丙管，也称为监控管，是为了防止出现假象,（三）注意事项,第二法,第三法,供试品,标准溶液,NaOH5ml,20mlH2O,5滴Na2S试液,摇匀,NaOH5ml,20mlH2O,5滴Na2S试液,（三）注意事项,四、重金属检查,A.硫化氢试液 B.硫代乙酰胺试液 C.硫化钠试液 D.氰化钾试液 E.硫氰酸铵试液,互动：重金属检查法中，所使用的显色剂,A.用硫代乙酰胺为标准对照液B.用10ml稀硝酸/50ml酸化C.在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D.用硫化钠为试液E.结果需在黑色背景下比较,互动：葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件,现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法？,互动：重金属检查方法选择,1、口服碳酸氢钠原料药中氯化物的检查,方法：取本品0.15g，加水溶解使成25ml滴加HNO3使成微酸性后，置水浴中加热除尽CO2，放冷依法检查，与对照标准氯化钠溶液3.0ml（10ug/ml）制成的对照液比较，不得更浓，计算氯化物的限量。,2、对乙酰氨基酚中硫酸盐的检查,方法：取本品2.0g加水100ml，加热溶解后冷却，滤过，取滤液25ml依法检查，与标准硫酸钾溶液1.0ml（100ug/ml）对照液比较，不得更浓，计算杂质限量。,取乙酰唑胺2g，加水100ml，加热溶解后，迅速放冷，滤过，取续滤液25ml，依法检查氯化物，规定含氯化物不得超过0.014%，应取标准氯化钠溶液（每1ml相当于0.01mg CL）多少毫升？,砷的危害,五、砷盐检查法,第一法（古蔡氏法）检砷装置：,五、砷盐检查法,醋酸铅棉花,避免硫化物的干扰,HgBr2试纸,HCl+SnCl2+KI,10min,砷斑,As3+3Zn 3H+3Zn2+AsH3AsO33-3Zn 9H+3Zn2+3H2O AsH3AsO43-4Zn 11H+4Zn2+4H2O AsH3砷化氢与溴化汞试纸作用生成色斑：AsH3+2HgBr2 2HBr+AsH(HgBr)2（黄色）AsH3+3HgBr2 3HBr+As(HgBr)3（棕色）,（一）原理：对照法（比较色斑颜色）,1、原理：,三价As五价As,砷斑,五价砷的反应较慢，需先还原为三价砷,黄棕色,1.标准砷溶液的制备 2.标准砷斑的制备 3.供试品砷斑的制备 4.比色 5.结果判断,（二）检查方法,1.在反应液中加入碘化钾和酸性氯化亚锡的目的2.在检砷装置的导气管中装入醋酸铅棉花的目的3.醋酸铅棉花的装填要求4.所用仪器和试液等照本法检查，均不应生成砷斑，或至多生成仅可辨认的斑痕,（三）注意事项,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）,1、原理：,加入有机碱三乙胺有利于反应向右进行,红色胶态银,三价As五价As,目视比色法,510nm 测定A值,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）2.检查方法,红色胶态银,五、砷盐检查,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）3.优点：（1）灵敏度高（2）Sb干扰小：实验条件下，500g锑不干扰（3）可限量（对照法）、可定量（比较法）,五、砷盐检查,A.除去I2 B.除去AsH3C.除去H2S D.除去HBrE.除去SbH3,互动：在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的,A将As5+还原为As3+B有利于AsH3生成反应 C抑制SbH3的生成 D形成Zn-Sn齐以均匀而连续地发生氢气 E催化加速生成AsH3,互动：古蔡氏法检查砷盐时，加入碘化钾和酸性氯化亚锡的作用,主要检查检查药物中的酸性、碱性杂质（一）指示剂法 在供试品溶液中加入规定的指示液，根据指示液的颜色变化来控制酸性、碱性杂质的限量（二）酸碱滴定法 在一定指示液条件下，以消耗一定量的酸或碱滴定液来控制药物中的碱性、酸性杂质的限量,六、酸碱度检查法,主要检查检查药物中的酸性、碱性杂质（三）pH测定法 按照中国药典2010年版通则中的规定用电位法（使用酸度计）测定溶液的pH，以控制其酸碱性杂质的限量,六、酸碱度检查法,干燥失重系指药物在规定的条件下，经干燥后所减失重量的百分率，该法主要检查吸湿水、结晶水及在该条件下能挥发减失的物质(如乙醇等),七、干燥失重测定法,常用的干燥方法有：1.恒温常压干燥法（烘箱干燥法）2.干燥剂干燥法 3.恒温减压干燥法,（一）操作方法,（一）常压恒温干燥法适用范围：受热较稳定的药物操作方法：扁形称量瓶(W1)、干燥箱（烘箱）供试品（研细）平铺于扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定(W2)。干燥温度一般为105，达指定温度后干燥24小时，取出置干燥器中放冷至室温,称重，再干燥（1h），直至恒重，称重W3。,六、干燥失重测定法,（一）常压恒温干燥法,六、干燥失重测定法,六、干燥失重测定法,（一）常压恒温干燥法,1.药物含有较大量的水分，熔点又低硫代硫酸钠Na2S2O35H2O先在4050加热，使结晶水缓缓释去；然后逐渐升高温度，在105干燥至恒重，减失重量不得超过32.0 37.0%2.药物含有较大量的水分，熔点较高枸橼酸钠（2个结晶水）：180 干燥,特殊情况,六、干燥失重测定法,（二）干燥剂干燥法适用范围：受热易分解或易挥发的药物操作方法：将供试品置于干燥器内，利用干燥器内的干燥剂（变色硅胶，硫酸和五氧化二磷）吸收供试品中的水分，干燥至恒重,六、干燥失重测定法,（三）减压干燥法1.减压恒温干燥法适用范围：熔点低，受热不稳定、能耐受一定温度及水分难赶除的药物2.减压室温干燥法适用范围：熔点低并且不能加热的药物,六、干燥失重测定法,（三）减压干燥法,减压干燥器,真空干燥箱,甲睾酮，熔点：163167Ch.P规定取本品，在105干燥2h，减失重量不得超过1.0%。苯佐卡因，熔点：8891Ch.P规定在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重，减失重量不得超过0.5%。布洛芬，熔点：74.577.5Ch.P规定在五氧化二磷干燥器中减压干燥至恒重，减失重量不得超过0.5%。,互动：干燥失重测定方法选择,六、干燥失重测定法,（四）热重分析法热重法是在程序控制温度下，测量物质质量与温度关系的一种技术记录质量变化对温度的关系曲线即热重曲线。,G,（二）记录和结果计算,1.供试品干燥时应注意的问题2.从干燥器中取出供试品后应注意的问题3.干燥器中常用的干燥剂为硅胶、五氧化二磷或无水氯化钙。干燥剂应及时更换,使其保持有效状态,（三）注意事项,氯化物检查、硫酸盐检查、铁盐检查、重金属检查、砷盐检查常用的沉淀（显色）剂、标准溶液分别是什么？反应的现象是什么？,点滴积累,水分测定法,干燥失重与水分测定区别,（一）测定原理：费休法非水溶液中的氧化还原滴定费休试液：碘、二氧化硫、吡啶和甲醇终点指示：自身指示法（I2浅黄色出现）永停法,水分测定法,（二）操作方法,水分测定法,A:供试品消耗滴定液体积，mlB:空白实验消耗滴定液体积，mlW:供试品取样量F:滴定度,（三）注意事项吡啶和甲醇的作用：由于反应是可逆的，为使反应向右进行完全，加入无水吡啶定量地吸收HI和SO3，形成氢碘酸吡啶（C5H5NHI）和硫酸酐吡啶（C5H5NSO3）但生成的硫酸酐吡啶不够稳定，加入无水甲醇可使其转变成稳定的甲基硫酸氢吡啶（C5H5NHSO4CH3）,水分测定法,精密称取本品0.7540g，置干燥具塞玻瓶中，加无水甲醇5ml充分振摇后，用费休试液滴至溶液由浅黄色变为红棕色，消耗费休试液2.15ml；另取无水甲醇5ml，同法测定，消耗费休试液0.15ml，求青霉素钠的含水量（已知每1ml费休试液相当于3.52mg的水）。,互动：注射用青霉素钠水分测定,炽灼残渣：检查非金属有机药物中的非挥发性无机杂质(主要是金属氧化物、无机盐),八、炽灼残渣检查法,炽灼至完全炭化,加硫酸，700800炽灼使完全灰化,八、炽灼残渣检查法,注意事项：1.重金属在高温下易挥发，如供试品需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度须控制在5006002.含氟药物对瓷坩埚有腐蚀，需用铂坩埚,0.1%0.2%,检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质方法：药物加H2SO4炭化后与对照液比较，同置白色背景前，平视观察比较对照液：“溶液颜色检查”项下的标准比色液；由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；高锰酸钾液,九、易炭化物检查法,控制药物在生产过程或贮藏过程中产生有色杂质限量的方法（一）目视比色法K2CrO7、CoCl2、CuSO4溶液5种色调标准贮备液5种色调各10个色号标准比色液,十、溶液颜色检查法,不同比例,不同量水稀释,十、溶液颜色检查法,对乙酰氨基酚乙醇溶液的颜色检查,取本品1.0g，加乙醇10ml溶解后，如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准比色液比较，不得更深,（二）分光光度法单一波长定量（三）色差计法全波长范围定量本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法测色仪器一般为光电积分型色差计,十、溶液颜色检查法,检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查检查方法：对照法对照液：浊度标准液,十一、澄清度检查法,（一）酸碱滴定法,十二、酸碱度检查法,NaCl酸碱度检查,溴麝香草酚兰2d,pH=6.07.6,（二）指示剂法,十二、酸碱度检查法,纯化水的酸碱度检查,10ml纯化水,甲基红2滴（红-黄）,溴麝香草酚兰2滴（黄-蓝）,不得显红,不得显蓝,10ml纯化水,（三）pH测定法 药典中规定注射液、注射用水、灭菌注射用水必须用酸度计测定pH值 5%葡萄糖注射液pH值应为3.26.5 而原料药规定用滴定法,十二、酸碱度检查法,残留溶剂：原料药或辅料生产以及制剂制备过程中使用的、在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂测定方法：GC,十三、残留溶剂测定法,中国药典规定：某些中药及其制剂需要进行灰分检查生理灰分：将纯净而无杂质的中药或其制剂经粉碎后高温炽灼至灰化，其细胞组织及其内含物（各种盐类）成为灰烬而残留在生理灰分相对稳定的前提下，如果总灰分含量超限，则说明药品含有过多的泥沙（主含硅酸盐）等外来杂质,十四、灰分检查法,灰分检查：总灰分和酸不溶性灰分总灰分：主要为生理灰分和少量允许存在的外来无机杂质（泥沙等）酸不溶性灰分：总灰分加盐酸处理后，得到的不溶于盐酸的灰分,十四、灰分检查法,按化学成分分为：有机氯化合物、有机磷化合物、氨基甲酸酯、有机氮化合物、拟除虫菊酯、有机氟化合物、有机锡化合物等采用气相色谱法测定中药及其制剂中部分有机氯类、有机磷类和拟除虫菊酯类农药的限量,十五、农药残留量检查法,
