癌细胞转移与浸润.ppt

癌细胞的转移、浸润及实验技术,肿瘤细胞与癌细胞的区别,肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤，在恶性肿瘤中，有上皮分化而来的称为癌，由间叶组织分化而来称为肉瘤。癌是起源于上皮细胞的分化程度低 恶性程度高的恶性肿瘤细胞。癌细胞是恶性肿瘤的一种。,肿瘤,上皮组织良性肿瘤-腺瘤上皮组织良性肿瘤-腺瘤上皮组织恶性肿瘤-鳞状细胞癌上皮组织恶性肿瘤腺癌 癌细胞上皮组织恶性肿瘤-基底细胞癌间叶组织良性肿瘤-脂肪瘤间叶组织良性肿瘤-血管瘤,浸润与转移,具有局部浸润和远程转移能力是恶性肿瘤特有的性质它是引起患者死亡的的主要原因，研究肿瘤浸润和转移机制对临床治疗有十分重要的意义。癌细胞转移和癌细胞浸润是二个不同的病理过程，浸润是转移的前提，但不等于定发生转移，而转移则必定包含一个浸润的过程。,癌细胞浸润,人体浸润-人体组织内侵入了异常细胞或出现了正常情况下不应出现的机体细胞，以及某些病变癌细胞浸润-细胞可以转移到其他组织中，并在其他组织中继续分裂繁殖，也就是癌细胞转移。,癌细胞浸润过程机理,(1)癌细胞的增生和运动：癌细胞的不断增生是癌细胞浸润的前提。增生导致肿瘤组织内部压力增高，细胞趋向于向周围扩展。癌细胞同时能够移动，并具有与细胞浆内微管系统有关的阿米巴运功。移动的潜力与癌基因的表达有关。,癌细胞浸润过程机理,(2)癌细胞的分离：其分离倾向与细胞结构的变化和粘附力的下降有密切关系癌细胞表面负电荷高、与钙离子结合能力差、部分上皮性肿瘸的细胞桥粒体发育不全等，均促使细胞的彼此排斥和分离。,癌细胞浸润过程机理,(3)间质对浸润的作用：间质中除含有癌细胞自身产物外，基质的各种成分对癌细胞的浸润有一定的作用。层连蛋白与恶性程度高的肿瘤细胞有亲和性，有介导癌细胞与基底膜型胶原粘连的作用，同时能促进癌细胞的移动。,转移,概念及过程：癌细胞转移指癌细胞脱离其原发部位，通过各种途径到不连续的靶组织继续增殖生长，形成同样性质肿瘤的过程。,转移,转移包括脱离、转运、生长三个主要环节，是一个非常复杂的过程：癌细胞脱离原发癌群体，粘连侵袭基底膜并在周围间质中浸润生长;与局部毛细血管或毛细淋巴管内皮细胞密切接触并穿透其管壁，或突入腔道(浆膜腔)，在血管、淋巴管内继续存活并被转运，癌细胞与血管或淋巴管内皮细胞和基底膜粘连，穿透毛细血管或毛细淋巴管壁，向周围间质浸润，在基底膜不断增生。,转移类型,淋巴管转移：癌细胞侵袭基底膜，并在周围间质中浸润生长，与毛细淋巴管内皮细胞粘连，穿过内皮细胞间的暂时裂隙，在淋巴管内存活并被转运，进而粘连并穿过窦内皮细胞和基底膜进入淋巴结实质内生长。血行转移：癌细胞侵袭基底膜、在周周间质中浸润，然后通过血管内皮细胞间隙，在血管内形成瘤栓，随血液循环转移到全身各处。种植性转移：胸腔或腹腔肿瘤累及浆膜时，瘤细胞可以脱落入浆膜腔，种植于邻近或远处浆膜面继续生长，并可引起血性积液及粘连.,细胞浸润实验,Transwell实验RTCA技术,细胞浸润实验,Transwell细胞迁移及浸润实验1、Transwell小室制备（细胞浸润实验所需，迁移实验无此步骤）（1）包被基底膜（2）水化基底膜,细胞浸润实验,2、制备细胞悬液，具体细胞密度需要通过多次实验自己摸索。3、细胞接种到transwell小室中，含趋化因子的培养基加入细胞培养板中。4、细胞培养12-48小时（主要依癌细胞迁移及侵袭能力而定）。5、结果统计：（1）直接计数法：A用棉签擦去基质胶和上室内的细胞B染色：常用染色方法有结晶紫染色、台盼兰染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色。C细胞计数：选取5-10个视野计数。（2）间接计数法：A用棉签擦去基质胶和上室内的细胞B细胞培养板中加入含0.5mg/ml MTT的培养基，将小室置于其中，膜浸没在培养基中，37 4小时后取出。C 加入DMSO，将小室置于其中，使膜浸没在DMSO中，振荡10分钟，使甲臜充分溶解。取出小室，酶标仪上测OD值。,细胞浸润实验,Transwell 细胞迁移实验结果图片（很难做到对细胞准确计数）：,细胞浸润实验,RTCA实时无标记技术细胞迁移及浸润实验检测流程,小结,癌细胞的生长特性：转移、浸润。关系：浸润是转移的前奏，但不一定等于转移。浸润与迁移：,