生物样品前处理、制备、分离.ppt

1,生物样品前处理、制备、分离及保存器材,中国刑警学院法医系,2,1.概 述1.1 生物样品处理制备的主要特点：生物材料的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物。许多生物样品在生物材料中的含量极微，分离纯化的步骤繁多，流程长。许多生物样品一旦离开了生物体内的环境时就极易失活，因此分离过程中如何防止其失活，就是生物样品提取制备最困难之处。生物样品的制备几乎都是在溶液中进行的，温度、pH值、离子强度等各种参数对溶液中各种组成的综合影响，很难准确估计和判断。,3,1.2 生物样品的处理制备通常可按以下步骤进行：确定要制备的生物样品的目的和要求，是进行科研、开发还是要发现新的物质。建立相应的可靠的分析测定方法，这是进行生物样品制备的关键。通过文献调研和预备性实验，掌握生物样品及产物的物理化学性质。生物材料的破碎和预处理。分离纯化方案的选择和探索，这是最困难的过程。产物的浓缩，干燥和保存。,4,2.生物大分子制备的前处理2.1 生物材料的选择（1）制备生物大分子，首先要选择适当的生物材料。材料的来源无非是动物、植物和微生物及其代谢产物。（2）选择的材料应含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低，尽可能保持新鲜，尽快加工处理。（3）动物组织要先除去结缔组织、脂肪等非活性部分，绞碎后在适当的溶剂中提取，如果所要求的成分在细胞内，则要先破碎细胞。（4）植物要先去壳、除脂。（5）微生物材料要及时将菌体与发酵液分开。（6）生物材料如暂不提取，应冰冻保存。动物材料则需深度冷冻保存。,5,2.2 细胞的破碎 不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织，其细胞破碎的难易不一，使用的方法也不相同，如动物脏器的细胞膜较脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有较坚固的纤维素、半纤维素组成的细胞壁，要采取专门的细胞破碎方法。2.2.1 细胞破碎方法(1)机械法1)研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石英砂研磨或匀浆。2)组织捣碎器：这是一种较剧烈的破碎细胞的方法，通常可先用家用食品加工机将组织打碎，然后再用10000r/min20000r/min的内刀式组织捣碎机(即高速分散器)将组织的细胞打碎。,6,(2)物理法1)反复冻融法：将待破碎的细胞冷至15到20，然后放于室温(或40)迅速融化，如此反复冻融多次，由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。2)超声波处理法：此法是借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。多用于微生物材料，处理时间有数分钟到数十分钟不等，破碎细菌和酵母菌时，时间要长一些。3)压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在1000105Pa2000105Pa 的高压下使细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。4)冷热交替法：从细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可用此法。在90左右维持数分钟，立即放入冰浴中使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以被破碎。,7,(3)化学与生物化学方法1)自溶法：将新鲜的生物材料存放于一定的pH和适当的温度下，细胞结构在自身所具有的各种水解酶（如蛋白酶和酯酶等）的作用下发生溶解，使细胞内含物释放出来。2)溶胀法：细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液和低浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子大量进入细胞，将细胞膜胀破释放出细胞内含物。3)酶解法：利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶和酯酶等，于37，pH8，处理15分钟，可以专一性地将细胞壁分解。4)有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶剂或SDS（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理细胞，可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，此法也可以与研磨法联合使用。,8,细胞破碎相关的器械与器材,1)电动组织捣碎机,9,电动组织捣碎机,原理：用可调速电机驱动捣碎转子（头）在高速旋转下将组织打碎达到匀浆目的。市售仪器多数是可调速机型，有不同口径、头端式样的转子供选择，平头转子适于制备乳浊液及悬浮液，锯齿状转子适于制备组织和含纤维物质的匀浆。,10,电动组织捣碎机,应用：一般用于动物组织，植物肉质种子，柔嫩的叶、芽等材料。国产的捣碎机最高转速可达1-2万转/分，因旋转刀刃的机械切力很大，制备较大分子样品很少使用。动、植物细胞30-45秒完全破碎，酵母菌和细菌需加入石英砂加强效果。,11,2）超声波细胞破碎机,12,超声波细胞破碎机,原理：仪器发出一定频率的超声波产生振动力破碎细胞壁和细胞器。由超声波发生器和超声换能器两部分构成。相应超声换能器的长度及尖端口径也可挑选不同长短、粗细，以满足0.1250ml的容量需要。,13,超声波细胞破碎机,应用：用于各种动植物细胞、病毒细胞、细菌及组织的破碎，也可用于各类高分子物质的破碎，同时可用来乳化、分离、匀化、提取、消泡清洗及加速化学反应等。,14,超声波细胞破碎机,使用注意事项：1.长时间运转将产生过热，注意降温，可采用间歇处理方法（10-30秒）和冷却夹套选件。2.仪器发出的超声波是在液体中传递能量的，所以要保持超声换能器在液体中方能开机，避免在非液体环境中空转。3.使用后，须用蒸馏水冲洗净换能器头端。4.可能损伤细胞器，尤其是真核细胞的细胞器。,15,3）加压细胞破碎机,原理：利用高压使细胞悬液通过一个小孔（小于细胞直径的孔径）致使细胞被挤破、压碎，特别适用于厚壁细胞、细菌和较浓样品的破碎，具有快速、方便、无噪声的特点。主要技术参数电压：380V最大破碎压力：300Mpa,16,3.过滤及超滤装置,3.1 过滤原理：利用多孔介质阻留固体或大于多孔 介质孔径的分子而让液体通过，使固体和液体分离的方法。目的：1）去除不溶性杂质得到所需要的清液 以供进一步实验。2）收集固体中间产物或结晶成品。,17,3.1.1 过滤所需器材：,滤膜（滤纸）、漏斗、滤瓶，加压、减压过滤需外配气泵、蠕动泵、真空泵，并不涉及复杂的器具。,18,3.1.2 影响滤过的因素,1.液体的粘滞度：粘滞度大，则滤速慢；粘滞度随温度升高而降低，故升温可加快过滤速度。2.滤膜的材料、材质：如滤纸、滤布、玻璃纤维、石棉板、多孔陶瓷滤板等，其毛细管越长，管径越小或数目越少，则过滤速度越慢。3.压差：压差越大，过滤速度越快。4.滤渣：滤渣越厚，过滤速度越慢。5.过滤液性状：过滤液中有沉淀、胶状物或其它可压缩的物质，均能造成滤膜孔堵塞，减慢过滤速度。,19,3.1.3 提高过滤速度的常用方法,1.选择适当的过滤介质应考虑：孔径大小应适于截流被分离的固体颗粒，孔径过大，则滤液不清，过小则滤速慢。孔的数目多，孔道短且直，则滤速快，否则滤速慢。耐酸碱，化学稳定性好。有一定机械强度，易于回收。使用寿命长，成本低。过滤介质的材质：棉、麻、丝织品；玻璃纤维、垂熔玻璃、石棉或烧瓷滤板、涤纶等；滤纸（工业用和分析用，慢速、中速、快速），实验室里最常用。,20,2.加助滤剂。如硅藻土、活性炭、细砂等。3.增加过滤推动力。常压、加压、减压。加压和减压过滤在过滤介质的下面都必须有支持滤板，如强度较大的烧瓷滤板等。4.提高过滤时的温度。以减少溶液粘度，增大溶质的溶解度，但不适于热敏物质。5.离心过滤法，利用离心力促使滤液通过过滤介质，适于分离小量组织样品。,21,3.2 超滤 超过滤即超滤，自20年代问世后，直至60年代以来发展迅速，很快由实验室规模的分离手段发展成重要的工业单元操作技术。超滤现已成为一种重要的生化实验技术，广泛用于含有各种小分子溶质的各种生物大分子（如蛋白质、酶、核酸等）的浓缩、分离和纯化。,22,超滤,原理：超滤是一种加压膜分离技术，即在一定的压力下，使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到了部分的纯化。,23,超滤技术,优点：操作简便，成本低廉，不需增加任何化学试剂，尤其是超滤技术的实验条件温和，与蒸发、冰冻干燥相比没有相的变化，而且不引起温度、pH的变化，因而可以防止生物大分子的变性、失活和自溶。,应用：在生物大分子的制备技术中，超滤主要用于生物大分子的脱盐、脱水和浓缩等。超滤法也有一定的局限性，它不能直接得到干粉制剂。对于蛋白质溶液，一般只能得到1050的浓度。,24,超滤技术的关键是膜 常用的膜是由乙酸纤维或硝酸纤维或此二者的混合物制成。近年来发展了非纤维型的各向异性膜，例如聚砜膜、聚砜酰胺膜和聚丙烯腈膜等。这种膜在pH 114都是稳定的，且能在90下正常工作。超滤膜通常是比较稳定的，能连续用12年。超滤膜的基本性能指标：水通量（cm3/(cm2h)）；截留率（以百分率表示）；化学物理稳定性（包括机械强度）等。,25,超滤技术,超滤装置由若干超滤组件构成。分为板框式、管式、螺旋卷式和中空纤维式四种主要类型。由于超滤法处理的液体多数是含有水溶性生物大分子、有机胶体、多糖及微生物等。这些物质极易粘附和沉积于膜表面上，造成严重的浓差极化和堵塞，这是超滤法最关键的问题，要克服浓差极化，通常可加大液体流量，加强湍流和加强搅拌。常用有真空透析超滤、离心浓缩超滤、加压搅拌室超滤、切向流系统超滤。,26,3.2 超滤装置,本装置由蠕动泵、超滤器、压力表、调压阀及相应管路等组成。1、试样 2、蠕动泵 3、超滤器 4、超滤液 5、调压阀 6、隔膜压力表,27,4.透析,4.1 透析 自Thomas Graham 1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。透析只需要使用专用的半透膜即可完成。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。截留分子量MWCO通常为1万左右。,28,透析,透析：膜分离技术的一种，仅让小分子扩散性的选择性的通过透过膜，把小分子从溶液中分离出去而保留生物大分子的技术。应用：常用于改换大分子溶液的盐成分，除去小分子，改变溶剂成分等。,29,4.2 透析用器材,透析用器材仅涉及透析膜：常用有动物膜、羊皮纸、火棉胶、玻璃纸以及最近使用的赛璐玢膜都是用纤维或纤维素衍生物制成的。,透析膜的特点：1.在溶剂中能膨胀形成分子筛状多孔膜，只允许小分子溶质和溶剂通过，而阻止大分子通过。2.具有化学惰性，不具有能与溶质起作用的基团，在水、盐溶液、稀碱或稀酸中不溶解。3.有一定的机械强度和良好的再生性。,30,透析膜的处理：,1.从成卷的透析膜中剪下适用的长度（一般20-30厘米）。2.用过量的10mmol/L碳酸氢钠湿润透析膜并煮沸几分钟。3.在10mmol/LNa2EDTA中煮沸几分钟，重复一次。也可在稍加搅拌下浸泡30分钟替代煮沸。4.用蒸馏水或超纯水清洗数次。5.置20%-50%乙醇溶液中，储存于4，以防能分解纤维素的微生物生长。,31,32,5.生物样品的浓缩,概念：从低浓度的溶液中除去水或溶剂使之变为高浓度溶液的过程。生物样品的制备，提取后往往先要进行浓缩，然后再进行干燥和结晶。方法：1.利用亲水凝胶吸收溶液中的水分而得到浓溶液。2.超滤法利用半透膜截流大分子，适于浓缩生物大分子。3.离子交换法与吸附法是稀溶液通过离子交换柱或吸附柱，溶质被吸附后，再用少量液体洗脱、分部收集能使所需要物质的浓度提高几倍以至几十倍。4.还有冷冻融化、加沉淀剂、溶剂萃取、亲和层析等方法也能达到浓缩的目的。我们只介绍蒸发浓缩。,33,5.1 蒸发,概念：溶液表面的水和溶剂分子获得的动能超过溶液内分子间的吸引力以后，脱离液面进入空间的过程。常用方法：1.常压蒸发 2.减压蒸发,34,5.1.1 常压蒸发及常压蒸发装置,原理：在常压下加热使溶剂挥发，达到浓缩目的。方法简单，适于浓缩耐热样品。所用装置为蒸发皿和玻璃蒸馏器。,35,5.1.2 减压蒸发及减压蒸发装置,原理：通过减压使液面压力降低，而压力降低，沸点降低，蒸发速度加快。应用：适于浓缩不耐热的样品。、,36,常用减压蒸发装置,1.减压加温蒸发器：在常压蒸发用蒸馏器上加真空泵。,37,常用减压蒸发装置,2.旋转蒸发器：又称为旋转浓缩仪。它采用了旋转烧瓶，烧瓶由电机驱动缓慢旋转，液体在烧瓶内壁展开成膜溶剂得以迅速扩散蒸发，可防止溶液爆沸，蒸发率成倍提高。,38,6.生物样品的干燥及器材,干燥：除掉潮湿的固体、膏状物、浓缩液和液体样品中的水分及溶剂的过程。目的：提高样品的稳定性，以供进一步的保存分析。方法：1.常压吸收干燥 2.真空干燥 3.冷冻干燥,39,6.1 常压吸收干燥器材,常压干燥是指在密闭的空间或干燥器内使用干燥剂进行的干燥。,40,常用干燥剂及性能：,1.无水硫酸钠：中性，价廉，吸水量大，但作用慢，效力差。2.无水硫酸镁：中性，效力中等，作用快，吸水量大。3.无水硫酸钙：作用快，效率高。与有机物不发生反应，不溶于 有机溶剂，缺点是吸水量小，可用于二次干燥。4.固体氢氧化钾（或钠）：可吸收水、氨和胺类。钾比钠的吸水 能力大60-80倍。5.五氧化二磷：吸水、效力最高、作用非常快，但价格较贵。6.氧化钙：即生石灰，碱性，吸水后成为不溶的氢氧化物，价廉7.分子筛：泛指具有均一微孔而能选择的吸附直径小于其孔径的分子的那些吸附剂。如沸石分子筛，碳分子筛等，其中常用沸石分子筛。,41,常用干燥剂及其作用,42,6.2 真空干燥,原理：在抽真空的容器中压力降低则溶剂的沸点也就降低，蒸发速度加快。适用于干燥不耐热的样品。实验室内常可利用的组合器材有：真空干燥器（箱）、冷凝管及真空泵。,43,真空干燥器（箱）,1.市售有玻璃和特殊塑料两种。2.真空度不宜过高.以上盖推不动即可.3.使用新的干燥器前，一般先须作耐压试验。4.处理危险或有毒样品时，干燥器外应罩铁丝网或用布包扎。5.打开干燥器取样时放入空气不要过快，以免冲散样品。也可在通气口处放一小片洁净滤纸。6.选择合适干燥剂，待干燥物所含溶剂不止一种时，可在干燥器内同时放两种干燥剂。,44,6.3 冷冻干燥,概念：亦称“冻干”，即先将溶液或混悬液冷冻成固态，然后在低温和高真空度下使冰升华，留下干燥物质的过程。原理：水有固态、液态、气态三种态相。根据热力学中的相平衡理论，随压力的降低，水的冰点变化不大，而沸点却越来越低，向冰点靠近。当压力降到一定的真空度时，水的沸点和冰点重合，冰就可以不经液态而直接汽化为气体，这一过程称为升华。冷冻干燥就是基于这一原理。,45,冷冻干燥的特点,1.在低温高真空度下进行，样品不起泡，不爆沸。干物不粘壁，易取出，而且成为疏松的粉块，极易溶于水。2.适于对热敏感、易吸湿、易氧化及溶剂蒸发时易产生泡沫而引起变性的样品（如：蛋白质、酶、核酸等）3.并非所有生化物质都能在冻干时稳定。冻干前应先小量试验。,46,应用干燥罐进行冷冻干燥的步骤,1.将待干燥样品置于培养皿样容器内（厚度不超过1cm），先在冰箱内冻成硬块。2.准备真空干燥器，内置两个培养皿分别放固体KOH(NaOH)及P2O5,迅速取出冻块放入干燥器。3.干燥器与真空泵相连，管中要有足量的P2O5，两端塞棉花，注意切勿使P2O5和水进入油泵。4.抽真空后，经过5-10个小时，可得冻干品。,47,应用圆底瓶进行冷冻干燥的步骤,1.样品置耐压的圆底烧瓶中，将瓶浸入干冰-乙醇混合物内，使瓶内物迅速冻结成硬块，然后连接高真空度的真空泵。2.如霜层全部融化，用手接触烧瓶不感到冷，就表明升华已经停止。3.为了效果更好，可适当升温或延长真空时间以彻底脱水。,48,冷冻干燥的注意事项,1.连接泵的管道口径不宜过小，否则降低干燥效果。2.减压时加温（45）可以加速蒸发，但以不使样品解冻为限。3.烧瓶外通常蒙上一层霜，如果霜层开始融化，冻块起泡应立即停止。检查并排除故障后将样品重新冻结，继续冻干。,49,旋转冷冻离心式冻干机,其主体类似于小型离心机，转头多为六角形，有24孔或36孔位，可放1.5/2.0ml离心管，转速1800rpm.与真空泵相连。,50,旋转冷冻离心式冻干机,原理：高速旋转中的样品上面的压力降低导致迅速蒸发，利用蒸发的冷却作用可以使样品降温直至冻结。,应用：适用于快速小量的样品，而无需制冷设备，尤适于分子生物学实验室制备核酸等微量样品。,51,旋转冷冻离心式冻干机,优点：1.在常用的冻干机中，如果使样品上面的压力降低就会引起沸腾和起泡，导致样品损失量。应用旋转冷冻装置可以避免。2.旋转的离心力能够迫使部分样品沿管壁升高，从而减少样品的厚度，增加表面积。3.并不需要在整个冻干过程中连续旋转，样品冻结后转子停止旋转而冻干过程仍然继续进行。,52,真空冷冻干燥机,主要由制冷系统、真空系统、干燥室、加热系统和电器仪表控制系统组成。,53,真空冷冻干燥机,操作：1.待冻干的样品放在不同容量的干燥瓶中，连接到干燥室的接口点上，小容量的样品可放入安瓶或小瓶置于干燥室的层架上。2.冷凝管及热管连于干燥室（形成冷阱），分别用于冷却或加热样品。3.凝结器内装螺旋状冷气盘管，使其工作温度低于干燥箱内样品温度。（-60-40）4.真空泵可将系统抽至真空。5.加热系由电加热元件完成，用来除霜和辅助蒸发6.控制面板装有真空泵、温度指示器，实时监测仪器的运行情况。,54,真空冷冻干燥机,注意事项：1.样品溶液最好溶于水，而不含有机溶剂。2.样品中盐浓度高，冻块易融化，影响样品活性及延长干燥时间。可脱盐或使用挥发性盐或缓冲液。3.一些物质（如过氧化氢酶）因pH改变或低温影响可能变性失活，须加入适当的稳定剂。4.装样容器应能耐受外压并传热性能良好，常用圆底烧瓶、玻璃安瓶、青霉素瓶等。5.加液量不应超过容器的有效体积的1/5。,55,真空冷冻干燥机,条件控制：1.在并没有全部升华之前不要搅动样品液冻块。2.在除去瓶壁冰壳或移动容器时，应避免水蒸气流量徒然增加导致冲散样品。3.冻干机最好安装在有空调的房间。4.冻干过程中，容器外壁通常结霜，这表明系统工作良好。5.结束冻干时，缓慢放入空气，避免急速的气流冲散冻干品。6.结束冻干顺序：系统内部压力升至大气压后，取出样品容器，关闭真空泵。最后，关停冷冻机或移去冷阱。切记：次序不能颠倒！7.冻干品可以移入小瓶，用蜡密封，如果是安瓶，可用扁平火焰熔封，保存于冰箱内。8.真空泵是冻干机的关键组件，应注意维护保养，时常监测油标指示，按时换油。,56,7.生物样品的保存,在生物样品的保存过程中，影响样品、药物或制剂质量的因素很多，主要有空气、温度、水分、光线、酸碱度、样品的状态、微生物活动、保存时间和容器等。,57,生物样品的保存,方法：1.密闭保存 2.低温保存 3.固态干燥保存 4.避光保存 5.添加稳定剂 6.制成高稳定性的盐类或衍生物,58,注 意 事 项1.保存的样品一律要贴标签；2.定期检查；变质样品：发霉、变色、沉淀、挥发、酸 败、异味、潮解、粘结等。3.不同样品应按性质分类保存。,59,7.1 生物样品的保存器材及设备,冰箱：由箱体、制冷系统、自动控制系统及附件组成。,60,冰箱制冷原理,原理：冰箱的制冷过程，是在密封的系统内进行的。压缩机将蒸发器内的气态制冷剂压缩成为高压气体，高压气体通过冷凝器被空气冷却后放出热量成为液体，高压液体流经节流器，借毛细管的截流作用进入蒸发器后，迅速蒸发吸收热量，如此不断循环，使箱内形成低温。,61,冰 箱,种类：1.普通实验室冰箱（-204C）2.低温冰箱（-40C）3.超低温冰箱（-80C）4.程控制冷式冰箱 立式、卧式,62,电冰箱的使用1.电冰箱应放在通风干燥处，不得靠近发热体如暖气、烘箱等，并避免阳光直射。2.冰箱底部应垫10cm高的木架，箱后距墙应在15cm以上，以利于空气对流和散热。开门的时间要短，次数要少，以保持箱内温度稳定，延长使用寿命。3.保持箱内清洁，不得贮放有腐蚀性、易燃性和易爆性物品（如强酸、强碱、乙醚、丙酮等），以防其蒸汽腐蚀或发生火灾。存放热物品时，应待物品冷至室温后再放入。,63,4.当蒸发器上结冰太厚（5-10mm）,应融化冰层并清洗冰箱内壁，以免影响机器效能。融冰时，可将温度控制器上调节钮拧到“融冰”处，或将带有半自动化霜装置的温度控制器“化霜”揿扭按一下，使机械停下，蒸发器上的结冰即会自然融化。待冰霜融化，再调节旋钮至原位，使之重新工作。融冰时，禁用硬物敲击冰层，或用锐器铲除冰霜，以免损坏蒸发器。5.电源电压不能低于额定电压15%或高于5%，否则机械不能正常运转或造成电机烧坏；接电源时，要接在主电路上，箱壳要接地线，以防电路漏电，造成触电事故。6.根据箱外气温和贮存量的变化，注意调节温度控制旋钮，使箱内温度恒定在4-6。7.当冰箱发生特异响声时，应及时检查、维修。,64,8.称量用仪器：天平,65,8.1 称量技术发展,称量技术机械天平领域三大贡献：机械加码、光学读数、空气阻尼系统。1971年，精度达一亿分之一克(0.01微克)的电子天平，载入吉尼斯世界纪录大全，迄今无人打破；1972年，开发出第一台数字显示、稳定控制和数字输出的分析天平；1975年，率先将微处理机技术用于天平，被评为世界100个最有价值的研究成果之一；1985年，世界上第一台防爆天平；1991年，世界上第一台托盘式微量天平；1996年，世界第一台超微量天平，具有21,000,000 digits分辨率，0.1g debuts精确度的称量量程；1998年，发明世界最小的精密天平，尺寸只有信用卡大小,66,8.2 称量用仪器：天平,天平结构种类很多，按工作原理可分：利用杠杆原理的杠杆天平，利用弹性变形原理的扭力天平，利用液压原理的液压天平，利用力-电转换原理的电子天平。,67,称量用仪器：天平,杠杆天平一般多为单杠杆结构，它分等臂双盘天平和不等臂单盘天平。等臂天平主要由以下几部份组成：1.横梁，有天平心脏之称，横梁上有刀子、刀承、平衡铊、指针等。2.立柱。3.制动系统。4.悬挂系统，包括秤盘、吊耳、阻尼器等。5.外罩。6.光学读数系统。7.机械加码装置。,68,电子天平：通常人们把用电磁力平衡称物体重力的天平称为电子天平。主要由电磁力平衡式称重传感器、位移传感器、PID（比例-积分-微分）调节器、放大器、线圈、低通滤波器、模数转换器、秤盘等组成。电子天平具有快速称量、使用方便、功能多、计量性能稳定等优点，应用越来越广泛。,69,电子天平使用注意事项,1.天平的工作环境应无大的振动及电源干扰，无腐蚀性气体及液体。2.应保证通电后的预热时间，以使天平趋向稳定。3.电子天平在电源干扰特别大的场合使用时，内部存储的数据偶尔会被干扰并丢失。4.电子天平为精密仪器，操作时要小心，往秤盘里放置物品时手要轻。5.秤盘虽是不锈钢做的，但它很易受碱、氧化性酸和氯化物的腐蚀。要尽量避免与上述药品类的接触，当秤盘上掉有药品要及时清理干净；6.被称物品不要超过天平的称量范围；7.电子天平使用时要置于避风处。,70,8.3 砝 码,砝码根据用途和精度级别分别由不同金属制成。普通分析天平1克-50克由铜制成，1克以下由铝或镍制成。它必须借助天平等计量器具才能进行质量计量。砝码的结构应考虑到尽可能减少表面积与外界的污染及摩擦，故表面应光洁，为了确保准确度，高准确度的砝码及毫克组砝码必须制成实体，准确度稍低的砝码，则可制成具有调整腔体的空心体。对于毫克砝码，可以使成片状或线状，其形状应易于夹取。,71,砝码,72,最理想的容器：玻璃瓶、安瓿极易氧化的样品，装瓶时尽量装满，少留空隙，加塞（或盖）后蜡封保存。,73,抗菌素、抗血清和胎盘球蛋白等血清类制剂，在低温冰冻下保存最稳定。用玻璃瓶或安瓿低温保存液体时，不能装满容器，以防液体冻结时膨胀，使瓶子破裂。,74,固态干燥保存排除了水导致的不稳定，创造了不利于微生物生存的条件。一些在水溶液中容易变性或水解、氧化的样品，在干燥或低温干燥下都比较稳定。干燥后的固态样品需瓶装并放入干燥器内，必要时置冰箱内保存。干燥保存是最古老、最普遍采用的方法，在生物样品、生化药物或制剂的保存中占有重要的地位。,75,凡见光引起分解、氧化或变色的样品，均应置棕色玻璃瓶或安瓿内避光保存。棕色玻璃能阻止某些波长的光线，特别是紫外线的透过。如没有棕色瓶，也可用黑色纸包裹或暗处避光保存，以减弱光化作用。,76,防腐剂：抑制微生物生长、繁殖。选择防腐剂应以防腐能力和对样品有无影响为依据。酶和一般蛋白质的防腐剂常用甲苯、NaN3、氯仿、百里酚等。抗氧剂：本身是较强的还原剂，容易氧化。有氧存在时，其自身首先被氧化，从而保护并延缓了样品的氧化。选择的原则：不应与样品的主要成分作用。水溶性抗氧剂脂溶性抗氧剂金属鳌合剂或沉淀剂,77,样品中微量金属杂质（Cu+、Fe+）是自动氧化或水解作用的催化剂，起促进分解的作用，通常可加入某些金属鳌合剂或沉淀剂来防止。最常用于结合金属的抗氧剂是EDTA钠盐，在广泛的pH范围内它能与样品液中许多金属离子鳌合，生成稳定的水溶性鳌合物。有效地防止或延缓了氧化分解作用。惰气填充剂：是稳定样品、防止氧化的有效方法之一。充N2保存细胞色素C充CO2保存维生素C不是所有样品都能充惰气保存。Vit K充惰气后分解速度加快。,