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    猪繁殖与呼吸综合征疫苗选择及其防控.ppt

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    猪繁殖与呼吸综合征疫苗选择及其防控.ppt

    猪繁殖与呼吸综合征疫苗选择及其防控,广东大华农动物保健品股份有限公司 梅启竹(高级兽医师)手机:2009年11月26日,目 录,一、高致病性蓝耳病概述(1)临床表现(2)流行现状(3)蓝耳病危害二、蓝耳病疫苗的种类及其特点(1)疫苗种类及疫苗特点(2)高致病性蓝耳病活疫苗特点三、高致病性蓝耳病活疫苗的使用(1)免疫程序(2)注意事项(3)免疫失败因素(4)防控措施四、关于PRRS免疫的几个问题,(1)各年龄段猪都可以发病,发病猪出现41 以上持续高烧;(2)造成母猪的不孕、流产、产死胎、木乃伊 胎、弱仔等,母猪流产率可达30%以上,严重影响种用性能;(3)对仔猪更是可以造成毁灭性打击,出现高发病率和高死亡率,发病率可达100%,死亡可达50%以上。,高致病性蓝耳病概述-临床表现,高致病性蓝耳病概述-临床表现,母猪:发热、厌食、呼吸困难、发绀;流产、死胎、木乃伊胎,仔猪:发热、3941,体弱消瘦、沉郁、眼结膜水肿,高致病性蓝耳病概述-临床表现,育肥猪:(1)厌食,部分猪出现发绀,易继发感染;(2)生长缓慢。死亡率比平时增多(1220%);(3)常见继发气喘病(支原体肺炎)、链球菌性脑膜炎、副猪嗜血杆菌感染、胸膜肺炎;放线杆菌、多杀性 巴氏杆菌等.,高致病性蓝耳病概述-临床表现,我国流行的PRRSV均属于美洲型,CH-1a1996,高致病性蓝耳病概述-蓝耳病流行现状,PRRSV在中国的流行现状,20062008历年分离株统计表,1,高致病性蓝耳病概述-蓝耳病流行现状,2007年秋防检查中猪蓝耳病调查情况,2007年秋防期间,除西藏外,各地均主动开展了高致病性猪蓝耳病病原学监测,共监测8.3万份样品,检出高致病性猪蓝耳病阳性3951份,阳性检出率为4.75%。我国周边的越南等一些国家也有相似疫情发生,经诊断为同源性很高的高致病性猪蓝耳病。,高致病性蓝耳病概述-蓝耳病流行现状,高致病性PRRSV疫情-2008,疫情较之2007年显著降低;点状散发为流行特点;大规模暴发流行的风险较低;仔猪调运过程中易发;耐过母猪所产仔猪带毒普遍。,高致病性蓝耳病概述-蓝耳病流行现状,(1)2009年蓝耳病流行范围:安徽、江西、湖北、河南、江苏、湖南等 省,较2008年发病率高。(2)发病特点:多点、散发、死亡率高、临床症状典型。变异株检测率占 65%以上。防控形势非常严峻!,高致病性蓝耳病概述-蓝耳病流行现状,(1)各年龄段猪都可以发病,发病猪出现41以上 持续高烧;(2)造成母猪的不孕、流产、产死胎、木乃伊胎、弱仔等,母猪流产率可达30%以上,严重影 响种用性能;(3)对仔猪更是可以造成毁灭性打击,出现高发 率和高死亡率,发病率可达100%,死亡可达 50%以上。,高致病性蓝耳病概述-蓝耳病流行现状,蓝耳病疫苗的种类及其特点-疫苗种类及疫苗特点,疫苗主要有以下几种:活 苗:VR2332、Ch-a1、sd1、JXA1-R 灭活苗:Ch-a1、JXA1-R、sd1,灭活苗安全:灭活苗不存在毒力返祖、返强的危险,只要灭活彻底,不会散布病毒和造成新的疫源并且储存和运输方便,受母源抗体的干扰作用不明显。灭活疫苗免疫4周后可诱导体液免疫,6周以上可产生部分的细胞免疫;不能减少或阻止蓝耳病病猪排毒,灭活苗免疫与未免疫病猪在病毒血症严重程度与持续时间上无差异。不能减少感染公猪的精液排毒。灭活疫苗需经过多次免疫后,才能产生部分综合免疫抗体。但免疫空白期较长(5周以上);此阶段遇强毒感染同样发病。灭活苗经多次免疫后对种猪的繁殖障碍有较好的保护率。灭活疫苗佐剂对机体存在较大的刺激(猪肌肉组织最为典型),由佐剂引起 的应激易造成潜伏期各种疾病的早发及爆发。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-疫苗种类及疫苗特点,灭活苗(1)从理论上说,灭活苗使用后不会产生安全性问题,虽可刺激猪机体产生体 液免疫反应,但对清除PRRSV感染的巨噬细胞是有限的。因此仅仅依靠灭 活苗的免疫给猪机体建立牢固的免疫力是远远不够的。(2)在生产实践中,PRRS的灭活疫苗也存在灭活、佐剂材料及生产工艺等方 面诸多问题,导致对灭活疫苗尤其是高致病性猪蓝耳病灭活疫苗的使用存 在恐惧。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-疫苗种类及疫苗特点,活苗特点(1)免疫应激小(稀释液因素)(2)活疫苗免疫2周后可诱导体液免疫,4周后可产生细胞免疫;可减少或阻止蓝耳病病猪排毒,缩短蓝耳病病猪的排毒期及病毒血症的持续期。能减少感染公猪的精液排毒。(3)活疫苗经过1次足够剂量的免疫,3-4周后可产生综合免疫抗体,产生可靠的保护。但对不同源性的变异株缺乏保护力。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-疫苗种类及疫苗特点,高致病性猪蓝耳病活疫苗生产背景(1)2006年,“高热病”在我国多个猪场爆发。经过病原的实验室分离鉴定最终证实猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株是本病的主要病因,随后将由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的猪“高热病”命名为高致病性蓝耳病。(2)20062008期间,专家登录了全基因序列的PRRSV分离株我国有37株,其中33株为高致病性PRRSV,且基因序列高度同源,说明高致病性猪蓝耳病在我国流行广泛。(3)全国高致病性蓝耳病发病最早在华东地区,安徽、江西。随即迅速扩散到全国29个省市自治区,在江苏、安徽、浙江、江西、湖北、湖南、广东、广西等省份最为严重。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-疫苗种类及疫苗特点,高致病性猪蓝耳病活疫苗生产背景(4)发病与死亡:F5、F10代毒的发病率均为100%,死亡率分别为100%和50%,F15代毒的发病率为50%,死亡率为25%,F20之后没有发病和死亡;(5)大体剖检:F5、F10代毒的病变阳性率均为100%,F15、F20、F35代毒的病变阳性率均为50%,F49、F70、F95代毒感染猪均无临床症状和病理变化。(6)结果表明,F49代之后的病毒液感染仔猪无致病性。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-疫苗种类及疫苗特点,高致病性猪蓝耳病活疫苗生产背景2008年8月,农业部兽药评审中心组织完成了针对现有在研疫苗的免疫效力评价试验-3 种变异株疫苗:疫控中心:80%、其他:60%、50%-2 种基因工程疫苗:50%、40%-2 种经典株疫苗:HB-1(2002)40%CH1-r(1996)10%,蓝耳病疫苗的种类及其特点-疫苗种类及疫苗特点,高致病性蓝耳病活疫苗特点(1)变异毒株、特效预防高致病性蓝耳病,有效预防经典株蓝耳病;(2)疫苗毒株安全、稳定性好;(3)一次疫苗有效,规避不良反应,体现高性价比;(4)疫苗质量稳定、副作用小;(5)病毒含量稳定、抗体产生快、有效保护时间长;(6)生产工艺先进。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,毒株安全、稳定性好 制造本品的生产用毒种为猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1-R 株,检验用强毒为NVDC-JXA1株F5代,均由中国动物疫病预防 控制中心鉴定、保管和供应。疫苗株通过6次同居感染试验和6代毒力返强试验证明本疫苗 毒株充分致弱,在猪体内毒力不返强。疫苗弱毒通过5次攻毒 试验,均未发生感染。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,毒株安全、稳定性好本毒株通过90代异源动物的传代致弱。疫苗毒不感染同居猪群也不会垂直传播。对配种前母猪、怀孕后期母猪(产前30天)及临产母猪(产前15天)单剂量和超剂量免疫,未发现免疫母猪流产、死胎或其它不良反应。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,毒株安全、稳定性好对仔猪单剂量和超剂量免疫,免疫仔猪均采食正常、局部和全身未见任何不良反应。对临床经典PRRS阳性猪群单剂量和超剂量免疫,猪群精神食欲良好,均未见与疫苗相关的局部反应(接种部位无皮肤发红、肿胀)。对临床高致病性猪蓝耳病(变异株)阳性猪群单剂量和超剂量免疫,猪群精神食欲良好,均未见与疫苗相关的局部反应(接种部位无皮肤发红、肿胀)。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,生产工艺先进 本产品严格按照中华人民共和国兽用生物制品流程、中华人民共和国兽用生物制品质量标准和中华人民共和国兽药典进行生产和检验,采用先进的纯化技术、配合冻干保护剂、稳定剂、免疫增效剂的使用生产出的优质产品。生产工艺:将PRRSV JXAI-R株接种Marc-145细胞,经转瓶培养,收获感染细胞培养物后,加入冻干保护剂,经冷冻真空干燥制成。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,抗原含量高、抗体产生快、保护时间长抗原含量:每头份病毒含量105.0-7.0 OTCID50 抗体产生:1周产生体液免疫,2周可部分细胞免疫,3周产生 保护力,4周产生坚强保护力。保护时间长:有效抗体可维持180天以上。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,表1 不同企业猪蓝耳病活疫苗效果对比试验的抗原抗体比较,表2 不同企业蓝耳病活疫苗攻毒保护率比较,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,交叉保护 通过农业部有关部门多次同源性测试和攻毒试验验证,本疫苗株与我国流行的经典美洲野毒株有93%以上的同源性,与变异株有98%-100%的同源性。所以高致病性蓝耳苗对目前我国流行的经典美洲野毒株和变异株均有95%以上的保护力。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,实用性广 对母猪繁殖障碍(早产、流产、死胎、木乃伊、弱仔、无乳 症、返情等)有显著效果。可以有效控制仔猪、小猪、育肥猪的呼吸系统疾病。可有效改善各种病原造成的免疫抑制。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,实用性广不干扰猪瘟疫苗的免疫效果。先注射高致病性猪蓝耳病活疫苗,或同时接种猪瘟细胞苗均不会影响猪瘟免疫保护抗体的产生;先免疫猪瘟疫苗,后接种高致病性猪蓝耳病活疫苗,只会使猪瘟免疫保护抗体的产生时间延迟12周。可用于紧急免疫接种。能缩短蓝耳病的发病持续时间,缩小发病范围。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,实用性广对不同品种、不同猪群都有很好的免疫效果。不同季节均可免疫。根据临床实践证明:接种后能减少野毒排放,缩短病毒血症的持续时间。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,储存、运输方便 本产品内含耐热保护剂,可在4温度下保存30天以上。,蓝耳病疫苗的种类及其特点-高致病性蓝耳病活疫苗特点,公猪:每6个月免疫一次、每次1头份;经产母猪:配种30天后至怀孕90天内和产后15天时各0.5至1 头份;后备母猪:配种前2次,间隔34周,每次1头份;配种后同 经产母猪;仔猪:15日龄0.20.5头份,间隔34周加强免疫一次,每次 0.51头份;育肥猪免疫1次,1头份。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-猪蓝耳活疫苗免疫程序,紧急免疫程序:公猪及不同阶段的育肥猪:紧急免疫1头份;流产后经产母猪:紧急免疫1头份;先免疫假定健康猪,后免疫有临床症状猪群;剂量1头份。(注:免疫后同时做好隔离、封锁、消毒等工作,避免猪群调 动。),高致病性蓝耳病活疫苗的使用-猪蓝耳活疫苗免疫程序,注意事项:免疫前后应做好抗应激保健(维B,E,C类);使用前做好做抗体检测;初次应用本品的猪场,应先做小样试验;严格按照推荐剂量使用,不得加量;公猪接种后2周内不得配种。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-注意事项,注意事项:本产品2周龄前仔猪不宜使用;免疫后如有体温升高、厌食等症状,不要立即使用药物(2-3天仍不退烧,可用头孢或阿莫西林、柴胡注射液等产品,最好不使用氟苯尼考、磺胺类、安乃近等产品)。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-注意事项,注意事项:如出现严重免疫应激症状,可用肾上腺素和地塞米松解救;病、僵、残猪不免或缓免;免疫部位准,剂量足,尽量减少免疫时的应激。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-注意事项,注意事项:疫苗在运输、保存、使用过程中应防止高温、消毒剂和阳光直射;接种用器具应无菌,注射部位应严格消毒;疫苗稀释后应避免高温,限1小时内用完;剩余的疫苗及用具,应经消毒处理后废弃;屠宰前30日不应进行接种。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-注意事项,1、蓝耳病免疫后机体体液免疫与细胞免疫都具有延迟性的特征(21天以上)产生抗体前被感染的猪群;2、蓝耳病毒有抗体依赖性增强作用,即抗体的存在可介导和加强感染,此时抗体对病毒在细胞和体内的复制有增加作用。活跃期的猪群免疫后可提前发病。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-免疫失败因素,3、严重的继发感染:蓝耳病主要侵染各种组织的巨噬细胞肺泡巨噬细胞是蓝耳病毒的靶细胞,病毒进入细胞后,在细胞内增殖,使巨噬细胞破裂、崩溃、溶解、减少,肺泡壁增厚,淋巴组织呈衰竭状态,降低了肺泡巨噬细胞对其它病源的免疫力,形成继发感染,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-免疫失败因素,4、蓝耳病与圆环病毒2型有协同致病作用和免疫抑制作用;蓝耳病毒与支原体肺炎、猪流感病毒、猪瘟病毒存在相互继发与免疫应答干扰作用;5、各种应激、霉菌毒素降低猪群免疫力;,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-免疫失败因素,6、隔离、消毒、管理等各项措施不到位;7、接种程序不合理、操作不规范、疫苗质量和运输问题等因素,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-免疫失败因素,1、疫情爆发造成严重损失的原因分析;2、加强日常管理工作;3、制定合理的免疫程序,正确使用疫苗。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-防控措施,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-防控措施,1、疫情爆发造成严重损失的原因分析为防控高致病性蓝耳病疫情,需加强猪场的日常管理,减少和消除各种致病因素和致病条件,对2006年“高致病性蓝耳病”疫情爆发造成严重损失的原因进行分析:1.1江西部分地市在疫情爆发之初,部分养殖户将发病猪乱扔或卖到其他市场,导致疫情扩散;1.2猪舍设计不合理、通风不良,空气中氨浓度高,呼吸道损伤,抗病力下降,造成继发感染;1.3霉菌和霉菌毒素的影响,导致抗病力下降。,1.4高温因素导致死亡率高。高温地区由于没有通风导致高热潮湿,病菌繁殖,使得疫情更趋严重;缺水或水管在阳光下暴晒,水温高引起缺水,部分猪出现猪休克、肺水肿死亡;1.5其他因素如用药治疗不当,用药过量,加重死亡;1.6毒株变异,毒力变强。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-防控措施,2、加强日常管理工作日常管理工作要防止以上情况发生。具体措施如下:2.1建立合理的猪群流动制度及相关管理;2.2建立病猪隔离区;2.3淘汰病猪,避免感染猪与健康猪群之间的接触传播;2.4加强后备种猪管理,对新引进的后备猪实行“闭群管理”,隔离并使后备猪适应新环境;2.5不要将流产母猪的胎盘喂食其他猪吃;2.6仔猪在出生24小时内实施寄养;,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-防控措施,2.7及时清除病、弱仔猪;2.8分娩舍及保育舍执行严格的“全进全出”管理;2.9注射时每头猪更换一次针头;2.10夏季应严防中暑,猪热应激综合征、猪感光过敏、流感、圆环病毒病、皮炎肾病综合征、猪日本乙型脑炎、猪瘟、霉变饲料中毒、蓝耳病、副红细胞体病、弓形体病、钩端螺旋体、副猪嗜血杆菌病、传染性胸膜肺炎、败血性链球菌病等,做好常规预防工作,减少疾病的发生:冬春严寒季节,搞好防寒保暖与通风;,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-防控措施,2.11发生疫情的地区应采取综合防治措施:严格实施隔离封锁;严格猪舍、场地及用具的消毒和搞好杀虫灭鼠工作;对病死猪及污物进行无害化处理;强化猪瘟、蓝耳病的免疫;建立猪场发生疫情的紧急处置预案。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-防控措施,3、制定合理的免疫程序,正确使用疫苗 鉴于高致病性蓝耳病的高死亡率和高传染率,目前 要求各类猪只都要进行免疫接种,因它是变异毒株 引起,建议应用高致病性猪蓝耳病疫苗进行免疫预 防。,高致病性蓝耳病活疫苗的使用-防控措施,关于PRRS免疫的几个问题,4.1疫苗弱毒会感染健康猪吗?根据我公司6次同居感染试验证明疫苗弱毒 安全稳定,不会感染健康猪。,4.2如何看待变异蓝耳病疫苗?目前使用的变异蓝耳病疫苗毒株是经过中国动物疫病预防控制中心自06年至今,通过纯化、传代、致弱,证明该疫苗安全稳定。对预防目前国内流行的蓝耳病不同基因型的美洲株具有显著保护效果。是目前控制高致病性蓝耳病唯一产品。,关于PRRS免疫的几个问题,4.3蓝耳病仅免疫母猪对吗?对母猪的繁殖障碍和哺乳期仔猪有显著效果,但对断奶后及整个育肥期的猪群没有保护。母源抗体的持续时间一般不超过6周。母源抗体的下降阶段,仔猪对野毒没有抵抗力。,关于PRRS免疫的几个问题,4.4高致病性灭活苗和活苗是否会出现同样的免疫反应?疫苗稀释液对猪机体的应激程度不同;灭活苗投入使用时是变异蓝耳病大规模爆发时期;猪群提高了对变异株的主动免疫力(尤其是种猪)。,关于PRRS免疫的几个问题,4.5感染PRRS的猪场可以不做蓝耳苗吗?有人认为发生PRRS以后猪群就获得了免疫,就不会发生流产、死胎等危害的错误观点,所以对阳性猪群不再进行免疫。这些猪场不愿意进行免疫是导致PRRS不断蔓延的重要原因。一旦遇到野毒感染可再次发病。,关于PRRS免疫的几个问题,4.6提高非特异性免疫力,就可不进行免疫吗?非特异性免疫又称先天免疫,是动物一生下来就具有的,其对任何细菌、病毒感染都有一定防护作用,而且对病原体入侵反应迅速,是机体的第一道放防线。包括机体屏障、免疫细胞、细胞因子、补体系统等。,关于PRRS免疫的几个问题,机体屏障:主要有皮肤粘膜、血脑屏障、胎盘屏障,起机械阻挡作用,表面正常微生物菌群的拮抗作用;免疫细胞:主要有巨噬细胞、吞噬细胞,起吞噬、消化病原体作用;细胞因子:主要有干扰素、白细胞介素、溶菌酶、吞噬细胞杀菌素、调理素等,起杀菌、抗病毒、活跃免疫器官、增强特异性免疫的作用;补体系统:起溶菌、杀菌作用,参与抗体中和病毒致病力,显著增强抗体对病毒的灭活。,关于PRRS免疫的几个问题,如果遇到免疫抑制、不良应激、营养不良等因素,非特异性免疫力就会降低,一些本来对机体无害的细菌、病毒也会引起严重疾病;特异性免疫是人工预防接种或后天感染而使机体获得抵抗感染的能力,这种免疫只针对一种病原,分为体液免疫和细胞免疫两类;特异性免疫是通过T淋巴细胞和B淋巴细胞起作用。,关于PRRS免疫的几个问题,通过以上介绍,我们可以断定:提高非特异性免疫力可能会使发病率降低,症状轻些,发病稍缓慢,但不会防止广泛感染;疫苗可防止感染,因为只有疫苗注射才能产生特异性免疫(即抗体或细胞免疫),所以提高非特异性免疫力只应该作为注射疫苗的基础。不可不进行免疫。,关于PRRS免疫的几个问题,4.7认为注射疫苗可能会影响猪的生长,所以 不打疫苗,对吗?生长的影响严重吗?很轻微,在有问题存在下,反而促进生 长;生长快的基础是什么?(健康无病)变异蓝耳病的影响大还是注射疫苗可能对生长的影响大?,关于PRRS免疫的几个问题,4.8为什么变异株活苗可以保护经典株野毒感染?病毒变异后原有疫苗对其保护效果下降,甚至失去效 果,已被大家公认。蓝耳病虽发生了变异,它不是新病,仍然是蓝耳病。因高致病性疫苗的毒株与经典毒株的基因同源性仍在 93以上,所以有保护。,关于PRRS免疫的几个问题,4.9感染蓝耳病后生产基本稳定是否要打疫苗?生产上的基本稳定只是一段时间(不到一年)抗体高时 的暂时表现;抗体依赖增强效应决定了生产的不稳定性;往往抗体水平不一致;注射疫苗可是抗体水平整齐,保持高抗体水平。,关于PRRS免疫的几个问题,4.10我们如何选择蓝耳病疫苗?目前的蓝耳病疫苗主要包括:经典毒株蓝耳灭活苗、国家免费变异蓝耳灭活苗、经典毒株蓝耳活疫苗、变异毒株蓝耳活疫苗四种;被检测猪场广泛使用猪蓝耳病疫苗,随抗体阳性率达到了72.14%,但不能视为保护性抗体,因为野毒抗原的检测感染率为50%,而且这些猪场多数受到高致病性蓝耳病的危害;,关于PRRS免疫的几个问题,由于病毒的变异,交叉保护性缺乏,疫苗免疫力不高及混合感染的存在,导致对该病的防控困难,猪场发生该病急性期过后,猪场呈一种慢性感染方式在猪场群中反复循环传播;选择:有变异株存在就要使用变异株,活苗效果好于灭活苗。所以就目前疫病流行及疫苗研究的情况下,选择变异株的活疫苗进行免疫是最好的选择。,关于PRRS免疫的几个问题,4.11如何看待个别猪场使用蓝耳苗有少量母猪流 产?都是使用政府免费疫苗的猪场的反映,灭活苗佐剂的 因素最大;部分母猪的健康度差;合理使用弱毒苗和正确的免疫程序不会出现母猪流产。,关于PRRS免疫的几个问题,4.12发生过变异蓝耳病后不用疫苗,生产上有何表现?有的仔猪生下来就是弱仔,解剖肾脏就有出血点,可 能还有肺部深色病变;仔猪猪瘟超免效果差;母猪抗体水平高时产仔基本正常,母猪抗体时,除仔 猪问题外,母猪可能出现明显的繁殖问题(抗体依赖 增强效应的表现)。,关于PRRS免疫的几个问题,谢谢,

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