槐花米中芦丁的鉴定.ppt

上次实验报告的修订,4,5,图1 聚酰胺色谱柱层析后的收集液的聚酰胺薄膜层析分析图 说明：图1中的1表示收集液1；2表示收集液2；3表示收集液3；4表示芦丁标准品；5表示槲皮素标准品。,上次实验报告的修订,结论：因为Rfa=Rfd，说明收集液1是芦丁。因为Rfb1=Rfd；Rfb2=Rfe，说明收集液2是 芦丁和槲皮素的混合物。因为Rfc=Rfe；说明收集液3是槲皮素。所以，用聚酰胺柱层析的方法分离芦丁和槲皮素，用50%的乙醇，90%的乙醇梯度洗脱时，先从柱子流出的是芦丁，其次是槲皮素。,实验五 槐花米中芦丁的鉴定,一、实验目的,掌握硅胶薄层层析鉴定鼠李糖和葡萄糖的方法。掌握芦丁和槲皮素的化学检识方法。,二实验原理,1.根据鼠李糖和葡萄糖在硅胶板上的分配系数不同达到分离的目的。2.根据芦丁和槲皮素的理化性质来检识芦丁和槲皮素。,三实验操作,（一）糖液的硅胶薄层层析 1.硅胶板的活化；2.配制展开剂，正丁醇：醋酸：水 4：1：53.将展开剂倒入层析缸中，展开缸中展开 剂的高度4mm左右。4.画基线，基线距底边1.01.5cm；,（一）糖液的硅胶薄层层析,5.点样（点样顺序为：糖液、鼠李糖、葡萄糖），点样一般为圆点，点样直径一般不大于2mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。6.将硅胶板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距圆点5mm为宜，一般展距为8cm，取出薄层板，晾干。,（一）糖液的硅胶薄层层析,7.喷苯胺邻苯二甲酸试剂，在105下烘10min。8.实验结果见图1。,（二）芦丁、槲皮素及糖的化学检识,1.浓硫酸和浓盐酸反应 取芦丁或槲皮素数毫克于比色瓷板上，分别加浓硫酸或浓盐酸1滴，注意呈色变化，研磨后溶解成橙色溶液，加较多量的水稀释后转为浅黄色，析出黄色沉淀。,2.酸性试验：,取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加入芦丁1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每组试管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2ml，振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。再加浓盐酸滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊。,3.莫氏（molish）反应,取试样1mg置小试管中，加乙醇1ml溶解，加-萘酚1-2滴，摇匀，倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓H2SO4约1ml，静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的结构（糖和苷类均呈阳性反应）。比较芸香苷和槲皮素的不同。,4.镁粉盐酸试验：取芦丁1mg，加乙醇2ml在水浴上加热溶解，加入少许镁粉，滴加数滴浓HCl，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。5.三氯化铝反应：取样品1mg溶于1ml乙醇中，加1%三氯化铁乙醇液2-3滴，黄酮类呈鲜黄色。,6.醋酸镁反应,取样品乙醇液与醋酸镁试剂作纸上反映，观察荧光。二氢黄酮，二氢黄酮醇类可显天蓝色荧光，若有5-OH，色泽更明显。而黄酮，黄酮醇和异黄酮类等显黄色橙色褐色荧光。,7.三氯化铁反应,取样品1mg溶于1ml乙醇中，加1%三氯化铁乙醇液1-2滴，注意呈色变化。一般对黄酮类3-羟基者呈褐色，5-羟基者呈绿色，3、5-二羟基者呈深蓝色。,