试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察.ppt

试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察,一实验目的：1学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。2观察骨髓细胞染色体，计数染色体。,二原理：,活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理，可得到清晰的中期染色体标本。,三材料试剂,1材料：小白鼠；2试剂：Giemsa染色液，0.4KCl，2柠檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸3：1）。,四操作步骤,1实验前48h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml（0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和对二氯苯。2脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。用细针头注射器吸取2柠檬酸钠1ml，反复冲洗骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl低渗10min（8ml,37）。3离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块分散，静置10min，再离心10min，弃上清液，重复一次。,4用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依沉淀量定）。5取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液（取悬液前吸打均匀），单向吹气展开，酒精灯上文火烘干。6加Giemsa染液染色810min，流水冲去染液（注意水流不可急，细流冲去即可），干燥（晾干），观察，可见分散良好的染色体。,小白鼠的保定和注射,五结果与讨论,1结果：（1）选取分散良好的染色体绘实物图，上传图片1幅）。（2）染色体计数（2n=40）。2讨论：（1）实验前注射秋水仙素的作用？不作此步会怎样？（2）为何要用冷冻片？烘烤片的作用？,小鼠骨髓细胞染色体,