医学微生物学实验二抗酸染.ppt

医学微生物学实验二,微生物学教研室：3029130 科教科：3029945,实验内容,1.实验一结果的观察和分析；2.细菌内毒素的检测技术；3.抗酸染色；4.实验考试。,一、实验一结果的观察和分析,空气中细菌,咽喉部细菌,二、内毒素的检测技术（鲎试验）,1.内毒素检测方法 家兔发热法，鲎试验。,2.鲎试验原理3.材料 鲎试剂，内毒素试剂，鲎试剂专用溶解水，无菌无热源质吸管,4.方法步骤（每4个人一组，两支鲎试剂，一支实验一支对照）（1）取两支鲎试剂打开，分别加入0.1ml 鲎试剂 溶解水，使之溶解。（2）其中一支加入0.1ml内毒素，标记上实验组，另一支加入0.1ml溶解水，作为对照。（3）垂直放入37温箱，20-30min观察结果。5.结果及应用 实验组出现凝固，对照组不出现凝固,三、抗 酸 染 色 Acid fast stain,（一）实验目的 1.掌握分枝杆菌抗酸染色的操作方法和意义。2.熟悉抗酸染色的原理。（二）实验原理 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色，同时分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。,1.细菌：卡介苗（BCG）。2.抗酸染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱 性美兰溶液。3.其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。,（三）实验材料,（四）方法与步骤1.细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2.染色1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红23 滴，在火焰高处（210cm）徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热35min，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：3%盐酸酒精脱色30s1min；用水冲洗。3）复染：用碱性美兰溶液复染1min；用水冲洗。4）玻片用吸水纸吸干，油镜观察。,（五）实验结果,红色为抗酸染色阳性；蓝色为抗酸染色阴性。,结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。,（六）注意事项,1.无菌操作；2.染色要充分，掌握好时间；3.初染时加热勿使染液沸腾，干涸。,实验报告,1.内毒素的检测（鲎试验）原理，材料，方法及结果。2.抗酸染色的原理，材料，方法和结果（画图）。,实验考试,