显微镜直接计数法.ppt

实验三、微生物数量的测定,一、实验目的：掌握使用血球计数板进行微生物显微镜直接计数的方法了解微生物数量测量的几种方法、原理及其应用,二、实验原理,常用的微生物细胞数目的检测法血球计数板法平板菌落计数法干重法比浊法等,干重法将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来，然后烘干至恒重(干燥温度可采用105、100或80)、称重。一般干重为湿重的10%20%。注：该法适合菌浓度较高的样品。,比浊法,在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。该法适合测定大量的细胞。,显微镜直接计数法利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一种微生物计数法优点：直观、快速缺点：误差较大，不适合细菌计数（太小）其原理与计数板的构造有关每块计数板上有两个计数室（正方形），盖上盖玻片后容积是一定的（0.1mm3），深为0.1mm，边长为1mm，其上面有精确的刻度。,其刻度一般有两种规格,16个中方格，每个中方格分25个小格 1625,25个中方格，每个中方格分16个小格 2516,计数室,我们采用的是2516的，计数时查5个中方格的总菌数。如图：计算：1个计数室的总菌数=A/525B1g（ml）样品中的总菌数=A/525101000B=50,000AB个,5个方格的总菌数,稀释倍数,三 实验器材,1.菌种 酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液(已稀释100倍)2.器具 显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。,四 实验方法,1.检查计数板 检查计数板是否有破损。2.镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。,3加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。,4.显微镜计数 静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数5.清洗血球计数板 计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。,注意事项1、加样时先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；2、菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。3、计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；4、如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，作为两个菌体计算；5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为止。6、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。,特别注意,血球计数板均有编号，一人一个，务必小心使用，若损坏，需原价赔偿或赔偿原物！,显微直接计数结果,五、作业,100,100,