循环免疫复合物测定.ppt

实验三 循环免疫复合物测定,目的,1.掌握循环免疫复合物测定原理2.熟悉循环免疫复合物检测的临床意义,免疫复合物(immune complex，IC)抗原抗体复合物，在正常情况下，机体防御系统作为清除异物抗原的一种方式，清除体内免疫复合物对机体有利。,原理,在某些情况下，体内形成的免疫复合物不能被及时清除，沉积在机体某一部位称为局部免疫复合物，游离于体液中称为可溶性免疫复合物，随血液循环的免疫复合物称循环免疫复合物(circulating immune complex，CIC)。免疫复合物沉积可引起多种疾病。,原理,聚乙二醇比浊法 聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)是非离子型亲水剂，为乙二醇的聚合物。分子式HO(CH2CHO)nH，有较强脱水作用，破坏蛋白质表面的水化层和电子云，用于沉淀蛋白质，沉淀具有选择性。,在pH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG浓度越小。血清中加入终浓度为35的聚乙二醇，能相对选择性地沉淀免疫复合物。PEG还可抑制CIC解离，促进CIC进一步聚合成更大的凝聚物，使溶液浊度增加。用分光光度计测定浊度，可反映CIC含量。不能进行抗原特异性免疫复合物的测定，故仅适用于免疫复合物的粗筛,材料,硼酸缓冲液 4.1聚乙二醇(PEG)溶液微量加样器、试管等分光光度计、普通冰箱待检血清 不同CIC含量血清可由临床筛选获得，不宜冻融,操作步骤,样品稀释（0.2ml血清+0.4ml硼酸缓冲液）,测A495nm值,硼酸缓冲液调零,表1 PEG比浊法测CIC方法 测定管 对照管稀释血清（ml）0.4 0.44.1%PEG（ml）4.0 pH8.4硼酸缓冲液（ml）4.0,按表1加样混匀,4冰箱lh,室温1015min,结果判断,待测血清浊度值=（测定管吸光度-对照管吸光度）100以大于正常人浊度值的均值加2个标准差为CIC阳性大于或等于8.3为CIC阳性,注意事项,低密度脂蛋白可引起浊度增加，应空腹采血，高球蛋白血症和标本反复冻融也可引起浊度增加。2PEG只能沉淀较大分子，4PEG能沉淀较小分子的循环免疫复合物，大于5PEG，选择性沉淀循环免疫复合物特性消失；当温度4 时，循环免疫复合物沉淀最佳，室温每升高1，A值就下降0.02,临床意义,不是疾病诊断的主要指标，但在发病机制研究，了解病情进展，判断治疗效果方面能提供有意义的帮助对有蛋白尿、关节痛、血管炎、浆膜炎、紫癜症状且诊断不明确的病人，可考虑检测循环免疫复合物,思考题,试分析循环免疫复合物测定实验过程中有何因素将影响实验结果？采取什么措施保证实验的准确性？,