纳洛酮影响大鼠心脏缺血后处理保护作用.ppt
纳洛酮影响大鼠心脏缺血后处理保护作用,刘光军 胡烨文 黄晓洁 黄美霞 浙江大学医学院临床一系2班第五组,实验背景,20世纪80年代中期，Murry等提出心肌在经受多次短暂缺血再灌后，能减少心肌损伤，且已被很多实验证实。其中很多文献都证实阿片受体在其中的重要作用。,阿片受体的机制,阿片受体,G蛋白,PKC,KATP channels,HSP 70,Ca 2+overload,Ischemia-inducedMyocardial injury,纳洛酮,纳洛酮是一种特异性的阿片受体阻滞剂,但较大剂量时可对细胞直接作用,产生膜稳定性等效应,而与阿片受体无关。,实验目的,缺血后处理的保护作用（有 OR 无）阿片受体参与保护作用？（用纳洛酮来验证）,实验分组,ischemia 30min reperfusion 30min Control PostcondNal Nal+post 6s 6times,10 只/组,心脏灌流,心室动力学指标,压力换能器,dP/dtmax LVEDP LVDP RPP,酶学指标,乳酸脱氢酶（LDH）的测定：取缺血前，rep5min，rep10min，rep20min冠脉流出液,每样本两管各50L,基质250L,37孵育3min,加H2O 50L37 15min,加辅酶I 50L37 15min,37 孵育15min,2，4-二硝基苯肼250L,0.4mol/LNaOH2.5mL,静置3min 440nm测吸光度,心肌线粒体渗透性转换孔道(MPTP)的开放程度,心脏剪碎匀浆,4 1000 g离心 10 min,取上清液4 8000 g离心10 min,取沉淀重悬液重悬再次4 8 000 g高速离心10 min,取沉淀重悬液中行考马斯亮兰蛋白测定法测定蛋白含量,肿胀液稀释至0.25 g/L 蛋白质浓度,200 mol/L 和1mmol/l的CaCl2分别作用于线粒体，连续观察在520 nm处线粒体吸光度的变化,LDH数据表,Fig1 不同实验处理下不同时间点冠脉流出液LDH含量,Fig2 各组心脏缺血后复灌10分钟灌流液LDH含量统计图(与Postcond组比较*P0.05，与Nal+IR组比较，*P0.05),Fig3 不加钙组吸光度比值随时间变化图（每隔30秒测一次）,Fig4 不加钙组15分钟末吸光度比值统计图（各组t检验比较均无显著性差异）,Fig5 低钙组吸光度比值随时间变化图(每隔30秒测一次，2min 后滴加200 mol/L 钙溶液),Fig6 低钙组15分钟末吸光度比值统计图(与IR组比较*P0.05，与Nal+Postcond组比较，*P0.01),Fig7 高钙组吸光度比值随时间变化图(每隔30秒测一次，2min 后滴加1 mmol/L 钙溶液),Fig8 高钙组15分钟末吸光度比值统计图(与IR组比较*P0.05，与Nal+Postcond组比较，*P0.01),动力学数据表,Fig9 对照组和预处理组RPP随时间变化图,min,Fig10 对照组和预处理组dp/dtmax随时间变化图,min,Fig11 对照组和预处理组-dp/dtmax随时间变化图,min,Fig12 对照组和预处理组LVEDP随时间变化图,min,结论,缺血后处理在缺血复灌中对心脏有保护作用。阿片受体参与了缺血后处理的保护作用，纳洛酮为阿片受体阻断药，使缺血后处理的 保护作用减弱。,
