丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制.ppt

丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制,主讲人：葛静制作人：胡波,实验目的,实验原理,实验材料与仪器,实验步骤,实验结果记录,注意事项,实验讨论,实验目的：,1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。,实验原理,化学结构与酶作用的底物结构相似的物质，可与底物竞争结合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。,琥珀酸脱氢酶：是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶，其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用,实验材料与仪器：,器材：大白鼠、手术剪、滴管 镊子、纱布、漏斗、量筒、烧杯、研钵 刻度吸量管 试管及试管架、恒温水箱、,试剂：0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液0.2mol/L丙二酸溶液0.02mol/L丙二酸溶液、1/15mol/LPH=7.4磷酸盐缓冲液、0.02%甲烯蓝,1、酶提取液的制备：取大白鼠的骨骼肌，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸缓冲液pH 在7.4。在研钵中碾碎，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。,实验步骤:,2、取试管6支，编号，在按图步骤操作,试管6：酶提取液在100 水浴中保温,3.各管溶液立即混均匀，沿试管壁加入液体石蜡，约0.5cm，各管置于37的水浴中保温，切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录褪色时间。,实验结果记录：,【注意事项】：,1、酶提取液的制备应操作迅速，以防止酶活性降低。2、加入液体石蜡的作用是隔绝空气，以避免空气中的氧气对实验造成影响，因此加石蜡时试管壁要倾斜，注意不要产生气泡。3、37水浴保温过程中，不能摇动试管，避免空气中的氧气接触反应溶液，使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。4.、37水浴保温过程中，要注意随时观察各试管的褪色情况。5、实验结果结束后，一定要洗干净试管内的液体石蜡。,实验讨论：,1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性，表1所示，在试管1中没有抑制剂，但琥珀酸依然能脱氢，使得甲烯蓝反应得甲烯白。2、各管的褪色有明显的时间差别，褪色时间随I/S逐渐增大，而增大。3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制，其特点：最大反应速率Vmax不变，米氏常数Km增大，竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度。4、本实验中5号、6号试管的作用是做对照，5号试管和1号试管做对照，说明酶提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在，6号试管中的酶提取液在100的水浴加热煮沸过，所以琥珀酸脱氢酶是失活的。,谢谢聆听！,