茎尖培养脱毒技术.ppt

,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,2茎尖大小与脱毒效果 用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最大直径0.lmm；通常是带13个叶原基的茎尖（约0.30.5mm）。茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但不带叶原基的过小，外植体离体培养存活困难，生长缓慢，操作难度大。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，而分生组织以下的13个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素。因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖外植体过大，脱毒效果差。,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,1取样：用于脱毒的植株应是患病群体中病害相对较轻的植株。可直接从选定的植株上取梢段进行消毒接种。也可从室内培养12月并进行热处理的盆栽扦插苗上，采顶芽与侧芽消毒接种。2消毒：剪取梢段（也可用侧芽）35cm，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75酒精中浸泡 30s左右，用1 3次氯酸钠或 57的漂白粉溶液消毒1020min（或用 0.1HgCl2消毒数分钟），最后用无菌水冲洗材料 45次。,（二）茎尖脱毒的方法,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,3剥取茎尖与接种 在超净工作台上，将已消毒的芽放在垫有无菌滤纸的培养皿中（已灭菌）。在双筒解剖镜下，用解剖针或镊子将材料固定于视野中，用解剖刀尖仔细剥去幼叶，至出现裸露的生长点。用刀尖切下带12个叶原基的生长点（约0.30.5mm)。用解剖针或解剖刀尖将切下的茎尖转至培养基上（顶部向上)，每管接12个茎尖。为防止茎尖失水，可用无菌水润湿滤纸。操作中注意随时更换滤纸和接种工具，剥取茎尖时切勿损伤生长点。,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,5生根诱导 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不定根。而另一些植物不产生不定根，必须将无根绿苗再诱导才能生根成为完整植株。诱导生根的方法是将23cm高的无根苗转入生根培养基，继续培养12个月即可形成根。一些植物茎尖离体培养极难生根，即使转入生根培养基诱导也难奏效（如桃、苹果），这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖（可大于第一次切取的茎尖），再培养，即二次茎尖培养脱毒率可达 100。,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,茎尖分生组织剥离,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,4培养 接种后材料置 252，光照度 15005000lx，每日光照1016h条件下培养。温度对茎尖培养的影响不及光照。不同植物茎尖培养适宜的光强与光照时间不同，但一般光照培养比暗培养效果好。培养两个月左右，大的茎尖再生出绿芽，小的（0.10.5mm）茎尖则需3个月以上，有的甚至更长时间才发生绿芽。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度，可形成大量丛生芽。,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,（三）培养基与培养方式 1培养基 合适的培养基对茎尖诱导成完整植株有重要影响。MS培养基适于多种植物茎尖培养。White、Morel等培养基也有广泛的应用。植物应严格控制培养基中糖的浓度。培养基中加入生长素（IAA、NAA）和细胞分裂素（KT、BA）或椰乳，对促进不同大小的茎尖外植体生长和分化是必要的。GA3的适当配合，促进效果良好。2,4-D常导致愈伤组织发生，应避免使用。,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,2培养方式 茎尖培养一般常采用半固体（琼脂培养基）培养，但去掉琼脂的液体培养基效果（滤纸桥）更好。,植物脱毒技术,一、茎尖培养脱毒,