【教学课件】第八章杂环类药物的分析.ppt
2023/8/7,1,第八章 杂环类药物的分析,新疆医科大学药学院分析/药分教研室,The Analysis of Hetero drugs,2023/8/7,2,第八章 杂环类药物的分析,第一节 吡啶类药物,第二节 喹啉类药物,第三节 托烷类药物,第四节 吩噻嗪类药物,第五节 苯并二氮杂卓类药物,第六节 含量测定,返回主目录,基本要求,练习与思考,2023/8/7,3,基本要求,一、掌握吡啶类、喹啉类、托烷类、吩噻嗪类苯并二氮杂卓类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉本类药物中典型药物国外药典收载的鉴别和含量测定方法。三、了解本类药物的体内分析方法。,返 回,2023/8/7,4,第八章 杂环类药物的分析,2023/8/7,5,第一节 吡啶类药物的分析,吡啶环具碱性、可开环,苯硝基：具还原性；二氢吡啶环：受光易分解,结构与性质,2023/8/7,6,1.弱碱性 吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的pKb值为8.8（水中）。尼可刹米除了吡啶环上氮外，位上被酰氨基取代。酰氨基化学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。,主要化学性质,2023/8/7,7,2还原性 异烟肼的吡啶环位上被具有还原性酰肼取代，可被氧化剂氧化，可与含羰基的化合物发生缩合反应。3吡啶环的特性 异烟肼和尼可刹米的吡啶环、位未取代，而或位被羧基衍生物所取代；硝苯地平的吡啶环、位被甲酸甲酯所取代，其吡啶环可发生开环反应。,2023/8/7,8,鉴别试验吡啶环反应戊烯二醛反应（适用于，未取代者）,衍生物的颜色 随芳香伯胺的不同而不同,二硝基氯苯反应 紫红色,形成沉淀反应（与重金属离子）,取代基反应,2023/8/7,9,黄色,2023/8/7,10,异烟肼，需先氧化成异烟酸,2023/8/7,11,尼可刹米 ChP（2005）【鉴别】（2）取本品 1 滴，加水 50 ml，摇匀，分取 2 ml，加溴化氰试液 2 ml与 2.5%苯胺溶液 3 ml，摇匀，溶液渐显黄色。,2023/8/7,12,二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）,吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯,紫红色,无水条件,采用本法鉴别异烟肼、尼可刹米时，需适当处理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。如异烟肼鉴别：,2023/8/7,13,紫红色,二硝基氯苯反应 紫红色,2023/8/7,14,异烟肼不经处理的反应：,异烟肼+2，4-二硝基氯苯,乙醇,OH-,紫红色,2023/8/7,15,与重金属离子的沉淀反应,2023/8/7,16,尼可刹米 ChP（2005）,【鉴别】（3）取本品 2 滴，加水 1 ml，摇匀，加硫酸铜试液 2 滴与硫氰酸胺试液 3 滴，即生成草绿色沉淀。,尼可刹米+CuSO4+硫氰酸铵,草绿色,尼可刹米异烟肼,+HgCl2,白色,2023/8/7,17,酰肼基的反应银镜反应异烟肼+氨制AgNO3 Ag+N2缩合反应异烟肼+香草醛 黄色,mp为228231,黄色结晶,2023/8/7,18,异烟肼 ChP（2005）【鉴别】（2）取异烟肼约10 mg，置试管中，加水2 ml溶解后，加氨制硝酸银试液1 m1，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。,银镜反应,异烟肼+亚硒酸,硒,（红色）,异烟肼+AgNO3,异烟酸银,+,N2,+,(白色）,银镜,Ag,2023/8/7,19,异烟肼 ChP（2005）【鉴别】（1）取本品约0.1 g，加水5 ml溶解后，加10香草醛的乙醇溶液1 m1，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶，滤过，用稀乙醇重结晶，在105干燥后，测定熔点，其熔点为228231，熔融时同时分解。,缩合反应 ChP和BP（2000）均采用本法鉴别.,2023/8/7,20,-NH2活性-CH2-,+1，2-萘醌-4-磺酸,OH-,红色,异烟肼,2023/8/7,21,分解产物反应尼可刹米+NaOH 二乙胺，,石蕊试纸红色蓝,颜色反应硝苯地平-丙酮溶液+NaOH 橙红色,2023/8/7,22,尼可刹米 ChP（2005）【鉴别】（1）取本品 10 滴，加氢氧化钠试液 3 ml，加热，即发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。,本类药物的分子结构中均含有芳杂环，在紫外光区有特征吸收，其最大、最小吸收波长及百分吸收系数可供鉴别。本类药物的紫外特征吸收鉴别方法见下表。,本类药物的紫外特征吸收鉴别方法 药 物 溶 剂 max（nm）min（nm）E1cm1%异烟肼 HCl（0.01mol/L）265 约420 水 266 234 378 尼可刹米 HCl（0.01mol/L）263 285 NaOH（0.1mol/L）255 840 260 860 硝苯地平 无水乙醇 333 140,紫外吸收光谱特征,2023/8/7,24,IR,尼可刹米 ChP（2005）【鉴别】（4）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 135 图）一致。,2023/8/7,25,有关物质检查异烟肼中游离肼的检查TLC（ChP法）比浊法（JP法）差示分光光度法（文献法）,2023/8/7,26,对照硫酸肼显色对二甲氨基苯甲醛规定在硫酸肼斑点相应的位置上，供试品不得显黄色斑点。样品液：50mg异烟肼/ml，点样：10ul杂质对照液：50ug游离肼/ml，点样：2ul限量计算：,ChP,2023/8/7,27,取本品，加水制成每 1ml 中含 50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每 1ml中含 0.20mg（相当于游离肼50g 的溶液，作为对照溶液。吸取供试品溶液 10l 与对照溶液 2l 分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙酮（32）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。,ChP(2005),异烟肼中游离肼的检查,2023/8/7,28,JP,原理 游离肼+水杨醛水杨醛腙（浑浊）,规定 异烟肼样品+水杨醛5min内不得浑浊,灵敏度法,比浊法,此法专属性差，因异烟肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。,2023/8/7,29,原理：,文献,两者灵敏度不同，同时丙酮可与肼形成无色缩合物，在上述反应中加一定量丙酮，使游离肼缩合物的吸收度发生变化，而同样条件下异烟肼缩合物的吸收度不变,差示分光光度法测定,2023/8/7,30,肼缩合物,异烟肼缩合物,A=0,可在456nm波长处测定并计算二者的差示吸收度A456，同时以对照品比较法计算游离肼含量。,2023/8/7,31,具体测定法：对照品溶液：硫酸肼CR1g/ml 5 ml+丙酮 max=456nm 测A1+对-二甲氨基苯甲醛(A456A2A1)AR 5 ml max=456nm 测A2 供试品溶液：异烟肼C2mg/ml 游离肼 CX=As/ARCR 1份+丙酮 max=456nm 测A1+对-二甲氨基苯甲醛(A456A2A1)As 2份 max=456nm 测A2,参比：异烟肼+游离肼+对二甲氨基苯甲醛+3%丙酮 样品：异烟肼+游离肼+对二甲氨基苯甲醛,2023/8/7,32,以各自空白溶剂为对照，测定A计算：A样=A测 A参以硫酸肼为对照，同法测得：A对=A测 A参,C肼=A样/A对 C对杂质%=C肼/W异 100%,杂质限量？,2023/8/7,33,尼可刹米中有关杂质检查 因有关杂质的化学结构不明，故Ch.p采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。,2023/8/7,34,硝苯地平中有关物质检查（HPLC法）,分解物A,分解物B,硝苯地平,2023/8/7,35,色谱条件与灵敏度调节 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：甲醇-水（3：2）；检测波长：235nm。取对照品溶液20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使杂质A和B组分色谱峰的峰高为满量程的20%；杂质A和B组分之间，杂质B与硝苯地平之间的分离度均符合规定。,2023/8/7,36,溶液配制:供试品液1：1mg/ml供试品液2：0.2mg/ml杂质对照品液1:杂质A和B各10mg/50ml杂质对照品液2:,杂质对照品液2中：硝苯地平2ug/ml，杂质A和B各2ug/ml,2023/8/7,37,判断供试液1中杂质A，B峰杂质对照品液2中杂质A，B峰面积供试液1中其他杂质峰杂质对照品液2中硝苯地平峰面积,供试品液1进样记录至主峰tR的2倍,2023/8/7,38,A B 样,A B 样 杂1 杂2,tR,杂质对照品液2：硝苯地平2ug/ml杂质A和B各2ug/ml,供试品液1：1mg/ml,100500%,2tR,2023/8/7,39,1.下列药物中，哪一个药物加氨制硝酸银能产生银镜反应A.地西泮B.阿司匹林C.异烟肼D.苯佐卡因E.苯巴比妥,2023/8/7,40,2用于吡啶类药物鉴别的开环反应有A.茚三酮反应B.戊烯二醛反应C.坂口反应D.硫色素反应E.二硝基氯苯反应,2023/8/7,41,例1.能和硫酸铜及硫氰酸铵反应，生成草绿色沉淀的药物为A.对乙酰氨基酚B.异烟肼C.尼可刹米D.地西泮E.维生素E,2023/8/7,42,例2.经高锰酸钾或溴水氧化后，可发生开环形成戊烯二醛反应的药物为A.葡萄糖B.皮质酮C.维生素CD.土酶素E.异烟肼,2023/8/7,43,例3.异烟肼可由原料反应不完全或贮藏中的降解反应而引入哪种杂质A.间氨基酚B.水杨酸C.对氨基苯甲酸D.游离肼E.其他甾体,2023/8/7,44,例4.可用于异烟肼鉴别的反应有A.与氨制硝酸银的反应B.戊烯二醛反应C.坂口反应D.硫色素反应E.二硝基氯苯反应,2023/8/7,45,第二节 喹啉类药物,硫酸奎宁（左旋）（奎尼丁为右旋）碱性，旋光性，荧光特性,盐酸环丙沙星碱性，无旋光性，无荧光,2023/8/7,46,主要化学性质1.碱性 喹啉环上的氮原子具有碱性，与强酸形成稳定的盐。环丙沙星与盐酸成盐，奎宁和奎尼丁可与二元酸成盐，结构中喹核碱含脂环氮，碱性强，可与硫酸成盐；而喹啉环系芳环氮，碱性较弱，不与硫酸成盐。奎宁pKb1为5.07，pKb2为9.7，饱和溶液的pH值为8.8。奎尼丁pKb1为5.4，pKb2为10。,2.旋光性 硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为-237o至-244o；硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为+275o至+290o；而盐酸环丙沙星无旋光性。3.荧光特性 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。,2023/8/7,47,鉴别试验绿奎宁反应荧光反应酸根反应,硫酸奎宁硫酸奎尼丁,溴水(氯水),+氨试液翠绿色,+,硫酸奎宁/硫酸奎尼丁+稀硫酸 蓝色荧光,硫酸根（SO42-）反应盐酸根（Cl-）反应,2023/8/7,48,翠绿色,加酸成中性,蓝色,加酸,紫红色,硫酸奎宁/硫酸奎尼丁,2023/8/7,49,6-羟基喹啉,2023/8/7,50,光谱特征1.UV Ch.P采用本法鉴别盐酸环丙沙星。2.荧光光谱特征 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀H2SO4中均显蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。3.IR Ch.P中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。,2023/8/7,51,特殊杂质检查硫酸奎宁其他金鸡钠碱TLC 高低浓度法氯仿-乙醇中不溶物控制无机盐与醇中不溶性杂质。其在氯仿-乙醇中不溶，过滤，干燥，称定残渣重量。盐酸环丙沙星有关物质HPLC归一化法主要控制本品中可能引入结构不清的有关杂质。,2023/8/7,52,色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱流动相：0.05mol/L枸橼酸-乙腈(82:18)用三乙胺调节pH值3.检测器：UV检测波长为277nm；按盐酸环丙沙星峰计算n2000;盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度R 1.5.测定方法：取本品适量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的2-4倍，记录时间应为主成分峰保留时间的2倍。按面积归一化法计算，杂质总量不得超过1.5%。,返 回,2023/8/7,53,第三节 托烷类药物,硫酸阿托品酯键可水解，碱性，无旋光（外消旋化）,氢溴酸东莨菪碱酯键可水解碱性，有旋光,2023/8/7,54,主要化学性质1.水解性 本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇()和莨菪酸()。,2.碱性 阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有 叔胺氮原子,具有较强的碱性,易与酸成盐。如阿托品的pKb1为4.35。,3.旋光性 氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子，呈左旋体，比旋度为-24至-27，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。,2023/8/7,55,鉴别试验Vitali反应（托烷类生物碱的一般鉴别）氧化反应 本类药物水解后生成莨菪酸,与硫酸和重铬酸钾发生氧化反应，生成苯甲醛。沉淀反应 与生物碱沉淀试剂作用 阿托品+氯化汞醇黄色 东莨菪碱+氯化汞醇白色复盐,2023/8/7,56,黄色,深紫色,水解,2023/8/7,57,苦杏仁,2023/8/7,58,特殊杂质检查硫酸阿托品莨菪碱旋光法(阿托品无旋光性，莨菪碱为左旋体)其他生物碱（利用其他生物碱碱性弱于阿托品，加氨试液被游离析出，使发生浑浊而检出）,2023/8/7,59,氢溴酸东莨菪碱其他生物碱检查原理同硫酸阿托品中其他生物碱的检查易氧化物主要检查阿扑阿托品及含不饱和双键的有机物 样品液+KMnO410min内红色不得全消失,2023/8/7,60,基本结构-化学性质-鉴别试验,第四节 吩噻嗪类药物,(烃胺),硫氮杂蒽,2023/8/7,61,SCH3,盐酸硫利达嗪,2023/8/7,62,本类药物具有下列性质：具有多吸收峰的紫外吸收光谱特征R取代基上N原子具有碱性环上硫原子易被氧化成亚砜和砜环上硫原子可与某些金属离子形成有色络合物,以上性质1，3，4可用作鉴别试验,2023/8/7,63,紫外特征吸收有三个吸收峰205nm，254nm(强)，300nm,吩噻嗪,亚砜,砜,2023/8/7,64,显色反应 H2SO4，HNO3，Br2水，H2O2，FeCl3,2023/8/7,65,2023/8/7,66,鉴别试验紫外光谱法与氧化剂或金属离子的显色反应分解反应 含氟药物经与碳酸钠、碳酸钾在600C炽灼，分解成氟化物，与茜素锆作用成ZrF62-，游离出茜素，使溶液由红色黄色,紫外特征吸收和红外吸收光谱 本类药物可用UV和IR鉴别，Ch.P中UV鉴别实例如下：药物名称 溶 剂 浓度（g/ml）max（nm）A E1%1cm盐酸氯丙嗪 盐酸（9 1000）5 254 0.46 915 306 盐酸异丙嗪 盐酸（0.01mol/L）6 249 883937奋乃静 无水乙醇 7 258 0.65 癸氟奋乃静 乙醇 10 260 盐酸氟奋乃静 盐酸（9 1000）10 255 553593 盐酸三氟拉嗪 盐酸（1 20）10 256 630盐酸硫利达嗪 乙醇 8 264与315,2023/8/7,68,奋乃静 ChP（2005）鉴别（2）取本品，加无水乙醇制成每1ml 中含 7g 的溶液，照分光光度法（附录A）测定，在258nm 的波长处有最大吸收，吸收度约为0.65。,（3）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 243 图）一致,显色反应 1.与氧化剂的显色反应 药物名称 硫 酸 硝 酸 过氧化氢 盐酸氯丙嗪 显红色,渐变淡黄色 盐酸异丙嗪 显樱桃红色,放置 生成红色沉淀,加热即溶解,后颜色渐变深 溶液由红色转变为橙黄色 奋乃静 显深红色;放置后 红色渐褪去 盐酸氟奋乃静 显淡红色,温热 后变成红褐色 盐酸三氟拉嗪 生成微带红色的白色沉淀;放 置后,红色变深,加热后变黄色 盐酸硫利达嗪 显蓝色,2023/8/7,70,奋乃静 ChP（2005）鉴别（1）取本品 5mg，加盐酸与水各 1ml，加热至80，加入过氧化氢溶液数滴，即显深红色；放置后，红色渐褪去。,盐酸异丙嗪 ChP（2005）鉴别（1）取本品约 5mg，加硫酸5ml 溶解后，溶液显樱桃红色；放置后，色渐变深。（2）取本品约 0.1g，加水 3ml 溶解后，加硝酸 1ml，即生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为橙黄色。,2023/8/7,71,2.与钯离子络合显色反应 利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。,癸氟奋乃静 ChP（2005）鉴别（2）取本品约 5mg，加甲醇2ml 溶解后，加 0.1%氯化钯溶液 3ml，即有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。,2023/8/7,72,2023/8/7,73,癸氟奋乃静 ChP（2005）鉴别（1）取本品 15 20mg，加碳酸钠与碳酸钾各约0.1g，混匀，在 600 炽灼 1520分钟，放冷，加水2ml 使溶解，加盐酸溶液（12）酸化，滤过，滤液加茜素锆试液 0.5ml，应显黄色。,2023/8/7,74,特殊杂质检查,盐酸异丙嗪中有关物质检查主要指合成过程中副产物（异构体）盐酸硫利达嗪中有关物质检查,均采用TLC高低浓度法,2023/8/7,75,薄层板硅胶GF254 供试液10mg/ml对照液 0.15 mg/ml（1）0.05 mg/ml（2）点样各10ul，紫外254nm检测,规定：杂质斑点不得多于3个 荧光强度不得较对照液2强 如有一点超过，不得深于对照液1,（0.5%）,(1.5%),盐酸异丙嗪中有关物质检查,例,2023/8/7,76,第五节 苯并二氮杂卓类药物,环庚三烯,卓,2023/8/7,77,第五节 苯骈二氮杂卓类药物,结构特征与典型药物,（1955年合成）,1959年合成,2023/8/7,78,阿普唑仑,奥沙西泮,2023/8/7,79,性质,1.苯并二氮杂卓母核 弱碱性，UV 2.结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。可用于鉴别和比色测定。,3.含卤素,4.本品多为游离碱，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。,(一)化学鉴别试验 1。沉淀反应 氯氮卓 橙红色沉淀 阿普唑仑 盐酸氟西泮 KBiI4 也生成橙红色沉淀 氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深，因此可以相互区别。,鉴别试验,阿普唑仑+遇硅钨酸 白色沉淀，药典中也用于鉴别。,2023/8/7,81,氯氮卓 ChP（2000）【鉴别】（2）取本品约 10mg，加盐酸溶液（91000）10ml 溶解后，加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,阿普唑仑 ChP（2000）鉴别（1）取本品约 5mg，加盐酸溶液（91000）2ml 溶解后，分为两份：一份加硅钨酸试液 1 滴，即生成白色沉淀；另一份加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,2023/8/7,82,2.水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：,氯氮卓 ChP（2005）鉴别（1）取本品约 10mg，加盐酸溶液（12）15ml，缓缓煮沸 15 分钟，放冷，溶液显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）。,2023/8/7,83,3.硫酸-荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，显不同颜色的荧光。例如：,地西泮 黄绿色 黄色 氯氮卓 黄色 紫色 艾司唑仑+H2SO4 亮绿色+稀硫酸 天蓝色 硝西泮 淡蓝色 蓝绿色 奥沙西泮 淡黄绿色,5.氯化铜焰色反应 分子结构中含有氯元素的药物，在铜网上燃烧 发出CuCl2绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。,地西泮 ChP（2005）鉴别（2）取本品 20mg，用氧瓶燃烧法（附录 C）进行有机破坏，以 5%氢氧化钠溶液 5ml 为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸 2 分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录）。,4.分解产物的反应 本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。Ch.P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。,（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱 药物名称 溶 剂 浓度（g/ml）max（nm）A 地西泮 0.5%硫酸甲醇溶液 5 242 约0.51 282 约0.23 366 氯氮卓 盐酸溶液(91000)7 245,308 阿普唑仑 盐酸溶液(91000)12 264 盐酸氟西泮 硫酸甲醇(136)10 2392,2842 比值1.952.50 3622 氯硝西泮 0.5%硫酸甲醇溶液 10 2392,3072 奥沙西泮 乙醇 10 229,3152(较弱)红外吸收光谱:已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西 泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。,2023/8/7,86,（三）TLC法 1.常用的五种苯并二氮杂卓类药物的TLC法 按常规法点样10l于硅胶G薄层板上，以苯-丙酮（3：2）为展开剂,饱和15min，用上行法展开15cm，挥发溶剂，用稀硫酸喷雾，于105干燥30min，置紫外灯下检视荧光斑点，结果见下表。,2023/8/7,87,薄层色谱法硅胶G薄层板,苯-丙酮为展开剂,荧光检视,s,m,w代表荧光强度强,中,弱,2023/8/7,88,2.酸水解产物的TLC法 利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的二苯甲酮衍生物进行鉴别。由于不同的苯并二氮杂卓类药物水解后可能会获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的专属性较差。,2023/8/7,89,有关物质检查 Ch.P 收载的八种本类药物，除氯氮卓外，其余均作此项检查。其检查方法除了三唑仑采用GC法外，其余均用TLC法进行检查。USP(24)和BP(2000)中对氯氮卓都规定了此项检查，而且均用TLC法进行检查。,特殊杂质检查,2023/8/7,90,1.地西泮中有关物质的检查 地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化学结构不清的有关物质，可采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。2.氯氮卓中有关物质的检查 USP(24)用TLC法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得过0.01%；中间体7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮-4-氧化物含量不得过0.1%。,2023/8/7,91,3.氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法 色谱条件：色谱柱为250mm2.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱；n=3000；流动相为甲醇-磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氢氧化钠溶液调pH为6.0；流速为1ml/min;紫外检测器波长为254nm。检测结果：氨基物（）的tR为12.0min、氧化物（）的tR为4.3min，痕量杂质（、）的tR为13.8、3.6、4.7min。,2023/8/7,92,降解产物的检查 地西泮注射液列入此项检查，因本品在贮藏过程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等杂质。采用HPLC法进行检查。,返 回,三唑仑中有关物质的检查 中国药典和美国药典采用GC峰面积归一化法p224,2023/8/7,93,非水溶液滴定法（原料药）紫外分光光度法（制剂）色谱法溴酸钾法（异烟肼原料、制剂）铈量法（吩噻嗪类药物）比色法酸性染料比色法钯离子比色法,第六节 含量测定,2023/8/7,94,非水溶液滴定法基本原理,第六节 含量测定,当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。,BH+A-,+,HClO4,BH+ClO4,+,HA,游离碱类盐,被置换出的弱酸,因此，要根据不同情况采用相应测定条件。,2023/8/7,95,一般方法,供试品,+,冰醋酸,10ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml,结果,高氯酸滴定液滴定,以空白试验校正,2023/8/7,96,非水溶液滴定法(碱量法）常用溶剂：冰醋酸，醋酐，丙酮，二氧六环等常用滴定剂：HClO4-冰HAc溶液常用指示剂：结晶紫-冰HAc溶液或电位法终点颜色蓝色/蓝绿色/绿色/黄绿色注意温度影响,N测=N标/1+0.0011（t测-t标）,2023/8/7,97,适用范围主要用于Kb10-8的有机碱盐,对于不同碱性的杂环类药物只有选择合适的溶剂和指示终点方法才能获得满意的滴定结果。一般：,此外，在冰醋酸中加入不同量甲酸也能增大突跃范围。,2023/8/7,98,冰醋酸溶液中各酸根的酸性强弱如下：高氯酸 氢溴酸硫酸盐酸 硫酸氢根硝酸 磷酸、有机酸,注意酸根的影响！,2023/8/7,99,采取措施：HX加 HgAc2 HgX2 H2SO4生物碱的硫酸盐通常为2分子生物碱与1分子硫酸成盐,可直接滴定至HSO-4（注意摩尔比）HNO3 可氧化指示剂，妨碍终点观察，改用电位法测定。磷酸、有机酸无需处理，直接滴定,2023/8/7,100,滴定剂的稳定性 非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致，温差未超过10时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正：,N测=N标/1+0.0011（t测-t标）,终点指示方法 常用电位法和指示剂法。Ch.P收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。,应用实例 1.游离弱碱性药物测定 异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。药物名称 取样量(g)溶 剂 指示剂 终点颜色 尼可刹米 0.15 冰醋酸10ml 结晶紫 蓝绿色 地西泮 0.2 冰醋酸、酸酐10ml 结晶紫 绿色 氯氮卓 0.3 冰醋酸10ml 结晶紫 蓝色,2.氢卤酸盐类药物测定 当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强，对测定有干扰，必须先加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下：药物名称 取样量(g)溶 剂 加入醋酸汞试液(ml)指示剂 终点颜色 盐酸氯丙嗪 0.2 醋酐10ml 5 橙黄 玫瑰红色 盐酸异丙嗪 0.3 冰醋酸10ml 4 结晶紫 蓝色 盐酸氟奋乃静 0.3 冰醋酸20ml 5 结晶紫 蓝绿色 盐酸环丙沙星 0.2 冰醋酸25ml 5 橙黄 粉红色 氢溴酸东莨菪碱 0.3 冰醋酸20ml 5 结晶紫 纯蓝色 盐酸硫利达嗪 0.3 丙酮100ml 5 电位滴定法,2023/8/7,103,3.硫酸盐类药物测定 硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成SO42-，但在非水介质中，只显示一元酸解离为HSO4-即只供给一个H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。,2023/8/7,104,（1）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的一元碱药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以简写为BH+)2SO42-，用高氯酸直接滴定时的反应式为：,(BH+)2SO42-+HClO4(BH+)ClO4-+(BH+)HSO4-,可根据1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的关系计算其含量。,2023/8/7,105,（2）硫酸奎宁测定：奎宁为二元碱，其中喹核碱的碱性较强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，1mol的硫酸奎宁消耗3mol的高氯酸。其反应式如下：(C20H24N2 H+)2SO4+3HClO4(C20H24N2 2H+)2ClO4-+(C20H24N2 2H+)HSO4-ClO4-Ch.P和USP(24)都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。,2023/8/7,106,(3)硫酸奎宁片的测定：硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高氯酸标准溶液直接滴定。此时1摩尔的硫酸奎宁可消耗4摩尔高氯酸，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不同。,2023/8/7,107,4.硝酸盐的测定 硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般不用指示剂法而用电位法指示终点。,5.磷酸盐与有机酸盐 磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接滴定。,2023/8/7,108,例 硫酸奎宁的含量测定Q2.H2SO4+3HClO4 1:3,2023/8/7,109,硫酸阿托品的直接滴定(1:1),若采用碱化、有机溶剂提取后再滴定，此时摩尔比是?例硫酸奎宁片的测定,高氯酸-硫酸奎宁(4:1)高氯酸-硫酸阿托品(2:1),2023/8/7,110,紫外分光光度法,直接分光光度法萃取后分光光度法萃取-双波长分光光度法导数分光光度法,本章五类药物，Ch.P原料药仅奥沙西泮采用本法，其他药物及制剂均采用本法,2023/8/7,111,紫外分光光度法直接分光光度法 例：盐酸异丙嗪片、注射液的含量测定片剂249nm处测定，按E值910计算含量.注射液299nm处测定，按E值108计算.,注射剂处方中加有维生素C作抗氧剂，由于维生素C在249nm也有吸收（维生素C的max=243nm），干扰测定，故选择299nm处测定。,为什么？,2023/8/7,112,萃取-双波长分光光度法（消除氧化产物的干扰）,例：盐酸氯丙嗪注射液的含量测定(USP)在氨碱性溶液中用氯仿提取利用氯丙嗪在254nm有max，氧化物在254nm和277nm处有等吸收,采用双波长分光光度法测定.以标准对照法计算含量。,2023/8/7,113,双波长分光光度法波长选择：测定波长测，参比波长参,A标,A样,A样=A测-A参 A标=A测-A参,2023/8/7,114,方法：注射液Vml(100mg)500ml取10ml 氨液碱化乙醚提取盐酸提取 合并提取液 250ml（供试品溶液）取盐酸氯丙嗪对照品 8ug/ml（对照液）以盐酸为空白，于254nm和277nm处测定两溶液的吸收度注射液含量（mg/ml）=,HCl,w/500*10/250*1000=w/12.5,2023/8/7,115,二阶导数光谱法(消除抗氧剂影响),2023/8/7,116,样品与杂质的紫外吸收光谱,样品与杂质的导数光谱,D,D,2023/8/7,117,对于非线性干扰，可近似地用二次曲线表示:A=ECL+t+u+w2,2阶,0阶,1阶,2023/8/7,118,254nm,266nm,例 盐酸氯丙嗪注射液的含量测定,绘制样品的0阶、1阶、2阶导数光谱;绘制抗氧剂的0阶、1阶、2阶导数光谱。,以峰-谷距离D对浓度C绘制标准曲线,计算样品含量.,2023/8/7,119,溴酸钾法（异烟肼）溴酸钾标准液(0.01667mol/L)甲基橙-不可逆指示剂滴定度T=3.429mg异烟肼分子量=137.13,3：2,T=3M/2*mol/L,2023/8/7,120,铈量法吩噻嗪类药物在酸性溶液中用硫酸铈滴定，被测物溶液红色消褪指示终点。,红色自由基,二阶阳离子,滴定度 T=M/2 mol/L,硝苯地平的铈量法与吩噻嗪类的铈量法有何不同?,2023/8/7,121,比色法酸性染料比色法原理：在适当的pH介质中 B+H BH+HIn H+In(BHIn)水(BHIn)有,+,+,+,-,测定有机相吸收度或将有机相碱化后测定释放出来的有机染料的吸收度，按标准对照法计算含量。,碱性药物,酸性染料,离子对,2023/8/7,122,本法的关键提取是否完全BH+In-(BH In-)有提取常数E=BH In-有/BH 水In-水BH In-有/BH 水=分配比（D）D=E In-水,2023/8/7,123,有机溶剂的选择对络合物有大的溶解度，即与离子对形成氢键的能力强，不与或极少与水相混溶。,实验的主要条件（影响因素）水相pH值要使有机碱以BH形式，染料以 In-形式存在。酸性染料的选择与有机碱定量结合，生成的络合物在有机相中有较大的溶解度和较高的吸收度。,常用的酸性染料有：溴麝香草酚蓝（BTB）溴甲酚绿（BCG）溴酚蓝（BPB）溴甲酚紫（BCP）等,常用有机溶剂：氯仿二氯甲烷等,水分影响,2023/8/7,124,应用ChP采用酸性染料比色法测定：硫酸阿托品片，氢溴酸东莨菪碱片，氢溴酸山莨菪碱片等含量。,特点（1）选择性高（选用适当pH缓冲液可消除干扰）（2）灵敏度高、供试品用量少（3）准确度差，不能用于原料药的测定，只能用于制剂分析,2023/8/7,125,钯离子比色法选择性地测定未被氧化的吩噻嗪类药物原理：,标准对照法计算含量,2023/8/7,126,色谱法 HPLC法采用反相HPLC法测定本类药物含量时，常常会产生拖尾现象，这是因为ODS固定相表面未被硅烷化的硅醇基与碱性药物发生了吸附或离子交换作用。解决的方法有：调整流动相pH，使呈弱碱性（pH7-8）加扫尾剂，最常用的扫尾剂为三乙胺更换固定相，用硅胶柱或金刚烷基硅烷化硅胶固定相离子对HPLC法(常用反离子为烷基磺酸盐),2023/8/7,127,中国药典仅用于地西泮注射液USP(24)收载本类药物数十个品种,地西泮注射液：曾用萃取后分光光度法。1995版中国药典改用HPLC,硫酸阿托品原料：中国药典采用非水滴定硫酸阿托品片剂：中国药典采用酸性染料比色法硫酸阿托品片剂：文献报道HPLC,2023/8/7,128,GC法大部分生物碱均可用GC法测定含量，但需注意：生物碱的盐类必须经碱化，用有机溶剂提取，使成为游离碱后再进样。因为生物碱的盐类在气化过程中生成的酸对色谱柱和检测器有不良反应。含酚羟基的生物碱药物在固定相上有吸附，需进行衍生化反应后再进样。,2023/8/7,129,液质联用法,LC-MS P239LC-MS/MS P240,练习与思考,A型题,1.异烟肼中国药典的鉴别方法是A.三氯化铁反应 B.水解反应 C.沉淀反应 D.重氮化-偶合反应 E.与硝酸银试液反应2.异烟肼中国药典规定的含量测定方法为A.非水溶液滴定法 B.溴酸钾法 C.碘量法 D.紫外分光法 E.亚硝酸钠滴定法,B型题,A。与硝酸银试液反应 B.硫酸-亚硝酸钠反应 C.戊烯二醛反应 D.水解后重氮化-偶合反应 E.重氮化-偶合反应 1.异烟肼 2.苯巴比妥 3.尼可刹米 4.氯氮卓,A,B,C,D,2023/8/7,132,A。溴酸钾法 B.紫外分光光度法 C.非水滴定法 D.HPLC法 E.双相滴定法5.异烟肼6.尼可刹米注射剂7.苯甲酸钠8.地西泮注射剂,A,B,E,D,X型题,1.中国药典规定用紫外分光光度法测定的药物有A。苯巴比妥 B.盐酸氯丙嗪片 C.地西泮片 D.盐酸氯丙嗪注射剂 E.氯氮卓片2.可用非水溶液滴定法测定含量的药物有A。尼可刹米 B.盐酸氯丙嗪 C.奋乃静 D.地西泮 E.氯氮卓,返 回,2023/8/7,134,练习思考题吡啶类药物的结构与性质根据异烟肼的结构，简述其鉴别和含量测定（溴酸钾法）的原理，滴定度的计算等。试述异烟肼中游离肼的检查方法和各方法的检查原理。喹啉类和托烷类药物的结构与特性吩噻嗪类药物的结构特征-理化性质-分析方法如何消除吩噻嗪类药物中氧化产物，抗氧剂等对含量测定的干扰？苯骈二氮杂卓类药物的结构与理化性质。,2023/8/7,135,非水滴定法测定本类药物时要注意哪些问题？常用非水溶剂、滴定剂和指示剂是什么？非水碱量法测定有机碱药物的氢卤酸盐、硫酸盐、硝酸盐时会有何干扰？如何消除干扰（分别叙述）。试述硫酸奎宁以冰醋酸为溶剂，用HClO4直接滴定时的反应当量。试述酸性染料比色法测定药物含量的原理及影响定量测定的关键因素。比较铈量法测定吩噻嗪类药物与硝苯地平的异同点。,2023/8/7,136,The end,
