【教学课件】第三节基本原理.ppt

第三节 基本原理,一、Lamber-Beer定律 二、吸光系数和吸收光谱 三、偏离Beer定律的因素四、透光率的测量误差,一、Lamber-Beer定律：吸收光谱法基本定律,描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系,假设一束平行单色光通过一个吸光物体,续前,取物体中一极薄层,续前,讨论：,1Lamber-Beer定律的适用条件（前提）入射光为单色光 溶液是稀溶液2该定律适用于固体、液体和气体样品3在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 应用：多组分测定,二、吸光系数和吸收光谱,1吸光系数的物理意义：单位浓度、单位厚度的吸光度,讨论：1）E=f（组分性质，温度，溶剂，）当组分性质、温度和溶剂一定，E=f（）2）不同物质在同一波长下E可能不同（选择性吸收）同一物质在不同波长下E一定不同 3）E，物质对光吸收能力,定量测定灵敏度 定性、定量依据,续前,2吸光系数两种表示法：1）摩尔吸光系数：在一定下，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度 2）百分含量吸光系数/比吸光系数：在一定下，C=1g/100ml，L=1cm时的吸光度 3）两者关系,3吸收光谱（吸收曲线）：A,续前,4吸光度测量的条件选择：,1）测量波长的选择：2）吸光度读数范围的选择：3）参比溶液(空白溶液)的选择：,选A=0.20.7,注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和 界面反射等因素对透光率的干扰,三、偏离Beer定律的因素,依据Beer定律，A与C关系应为 经过原点的直线偏离Beer定律的主要因素表现为 以下两个方面,（一）光学因素（二）化学因素,（一）光学因素,1非单色光的影响：Beer定律应用的重要前提入射光为单色光,照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度,续前,续前,讨论：入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状,结论：选择较纯单色光（，单色性）选max作为测定波长（E，S且成线性）,续前,2杂散光的影响：杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度 范围内，与所选波长相距较远杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值,3反射光和散色光的影响：反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光 直接对T产生影响散射和反射使T，A，吸收光谱变形注：一般可用空白对比校正消除4非平行光的影响：使光程，A，吸收光谱变形,（二）化学因素,Beer定律适用的另一个前提：稀溶液浓度过高会使C与A关系偏离定律,四、透光率的测量误差T,影响测定结果的相对误差两个因素：T和T,T影响因素：仪器噪音 1）暗噪音 2）讯号噪音,续前,1）暗噪音与检测器和放大电路不确切性有关 与光讯号无关,续前,2）讯号噪音与光讯号有关,表明测量误差较小的范围一直可延至较高吸光度区，对测定有利,第四节 紫外分光光度计,1光源：,2单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件,续前,3吸收池：玻璃能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）4检测器：将光信号转变为电信号的装置,5记录装置：讯号处理和显示系统,类型：,1单光束分光光度计：,特点：使用时来回拉动吸收池 移动误差对光源要求高比色池配对,续前,2双光束分光光度计：,特点：不用拉动吸收池，可以减小移动误差对光源要求不高可以自动扫描吸收光谱,续前,3双波长分光光度计,特点：利用吸光度差值定量消除干扰和吸收池不匹配引起的误差,