《疫沉淀反应》PPT课件.ppt

免疫电泳试验,免疫电泳是一种将区带电泳和双向免疫扩散相结合的免疫化学分析技术。,实验原理,实验原理,先将抗原样品在琼脂平板上进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而被分离成肉眼不可见的区带。停止电泳后，在与电泳方向平行的槽内加入相应抗血清，使抗原和抗体呈双向扩散，已分离的各抗原与相应抗体在琼脂中扩散而相遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的沉淀弧。,实验原理,根据沉淀弧的数量、位置和形状与已知标准抗原进行比较，可分析、鉴定样品中所含的抗原成分及其性质。,人全血清兔抗人全血清1.5琼脂、0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液移液管玻片、刀片、打孔器电泳槽、电泳仪、水浴箱,主要的试剂和器材,制板 将洁净玻片置于水平台面上，用移液管吸取4-4.5ml熔化的1.5琼脂加于载玻片上，待冷凝。,实验步骤,2-5mm,打孔及开槽，挑去孔内的琼脂，槽内琼脂暂不挑出。（打一个孔即可）,45mm,10mm,中央偏右,2mm,3mm,加样 用微量进样器吸取10l稀释的正常人全血清于小孔中。电泳 以0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液为电泳缓冲液，将加样后的琼脂板置于电泳槽上，样品孔靠近阴极端，用缓冲液浸湿的双层纱布搭桥电泳。一般稳定端电压100V，电泳1h，即可终止电泳。双扩散 取出电泳后的琼脂板，挑出中间槽内的琼脂，取100兔抗人全血清充满槽内，注意勿外溢。将琼脂板放于湿盒内，水平置于37水浴箱中进行双扩散，24h后观察结果。,观察沉淀弧的位置和条数，并画出沉淀弧。,实验结果,抗原与抗体浓度比例应适当，否则会使某些成分不出现沉淀线。当蛋白质抗原浓度高于20g/L，应用缓冲液稀释后再进行电泳和扩散。所用抗血清最好用两只或两只以上免疫动物的混合血清，增加抗血清的抗体谱。浇板时要求厚度均匀，无气泡。打孔挖槽时要求外壁整齐，防止琼脂破裂。扩散过程中需要在不同时间进行结果观察，做好记录。每次电泳后应倒换正负电极或将两槽缓冲液混合后再使用。,注意事项,应用,粗略分析纯化抗原或抗体的纯度。正常及异常体液中蛋白质分析。免疫后抗体组分的动态变化研究。,