《生血宁生殖系统》PPT课件.ppt

1,生血宁生殖系统毒理学研究,王树荣 荀丽英 李志勇 潘卫峰 刘爱军山东中医药大学 药理教研室,2,一、生血宁一般生殖系统毒性 研究二、生血宁致畸敏感期毒性研 究三、生血宁围产期毒性研究,3,一、生血宁对动物一般生殖系统毒性实验研究,4,实验材料 实验用生血宁由武汉联合药业有限公司提供，制剂批号为20031201。该制剂为粉末状颗粒物，储存于4备用。实验动物用药分为高（H）、中（M）、低（L）三种剂量，分别为480mg/kg、120mg/kg、30mg/kg，分别相当于临床人用剂量的80倍、20倍及5倍（以公斤体重折算）。使用时将该制剂以蒸馏水配制成混悬液应用。FA1104电子天平，上海天平仪器厂。Olympus生物显微镜。实验用SPF级昆明系小鼠，由山东大学实验动物中心提供，动物合格证鲁动质字20021023。实验动物均采用灌胃给药途径，给药容量为20ml/kg。实验数据采用统计软件SASS1.0处理。,5,实验方法与结果 实验用昆明系小鼠240只，其中雌性鼠160只，雄性鼠80只，动物体重为25g3g左右。动物自购入后首先适应性饲养一周。将雌性鼠按照体重随机均衡分为4组，即生血宁高剂量组（H）、生血宁中剂量组（M）、生血宁低剂量组（L）以及空白对照组，分别灌胃2.4%生血宁、0.6%生血宁、0.15%生血宁以及蒸馏水，灌胃容量均为20ml/kg，灌胃给药时间为雌性动物交配前14天连续用药至妊娠后13天。,6,动物交配前按照每饲养笼（面积40cm25cm）放置5只雌性动物规模饲养；动物交配时按照雌雄动物2：1比例放置过夜。检查有阴栓的雌性动物单独笼具饲养。,7,观察指标：1雌性鼠：记录饮水量，食物消耗量，死亡数以及一般健康情况。每周记录体重一次。观察动物交配行为，计算受孕率。2孕鼠：在妊娠第0、6、12、18天称取记录体重；在妊娠第14天每组处死动物10只，检查统计受孕率、着床前死亡率、着床后死亡率。,8,3仔鼠：出生后24小时内，计算死、活仔鼠数，称量体重，观察仔鼠性别比例以及有无外观畸形。第四天剔除多余仔鼠，使各窝仔鼠等于8，少于6只仔鼠的窝弃之不用。在第0、4、7、14、21天称重，记录仔鼠生存情况；在仔鼠断乳时处死，解剖检查仔鼠内脏有无畸形。4雄鼠：亲代雄鼠用于交配后，脱颈椎处死，称量体重，计算睾丸及附睾重量系数；显微镜下观察附睾精子活动度、精子计数以及精子形态，并计算畸形精子百分率。实验结果见表1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13等。,9,意义,表1 雌性鼠一般情况组别 摄食量 饮水量 死亡情况 一般健康生血宁H组 每天1416g 每天40 妊娠第3天 实验第二周开始/5只 70ml/5只 死亡1只，肉眼 动物有掉毛现象 观察未见异常生血宁M组 基本同上 基本同上 妊娠第6天 基本同上 死亡1只，肉眼 观察未见异常生血宁L组 基本同上 基本同上 妊娠第8、11天 基本同上 各死亡1只，肉眼 观察未见异常对照组 基本同上 基本同上 妊娠第6天死亡 基本同上 1只，未见异常。妊娠第8天处死1 只病鼠。注：表中H、M、L分别代表高、中、低剂量，下同。,10,表2 雌性鼠交配前体重变化情况 体 重（g）组别 给药前 给药后1周 给药后2周生血宁H组 24.931.56(40)24.771.76(40)26.002.12(40)生血宁M组 24.781.50(40)24.771.72(40)25.412.19(40)生血宁L组 24.881.40(40)25.352.03(40)26.022.28(40)对照组 25.031.67(40)25.693.54(40)26.643.34(40)括号内数字为动物样本数。组间比较未见显著性差异P0.05。,11,表3 雌性鼠受孕情况比较 组别 动物数（只）受孕数（只）未受孕数（只）受孕率（%）生血宁H组 40 23 17 57.5%生血宁M组 40 24 16 60.0%生血宁L组 40 2 17 57.5%对照组 40 26 14 65.0%组间比较未见显著性差异P0.05。,12,表4 妊娠鼠体重变化情况比较 体 重（g）组别 妊娠0天 妊娠后6天 12天 18天生血宁H组 26.66 27.98 29.69 49.89 1.99(23)2.12(23)3.05(23)3.34(23)生血宁M组 25.63 27.31 29.06 50.79 2.09(24)2.42(24)3.53(24)2.35(24)生血宁L组 26.28 28.32 29.78 51.49 2.31(23)2.57(23)4.23(23)2.54(23)对照组 27.07 28.42 30.29 51.34 3.41(26)3.21(26)4.33(26)3.84(26)括号内数字为动物样本数。组间比较未见显著性差异P0.05。,13,表5 动物妊娠14天后处死检查妊娠率等结果组别 样本数（只）妊娠率 着床后死亡率（，XSD）平均着床数生血宁H组 10 100%6.4 1.2 4.87生血宁M组 10 90%10.2 2.8 4.29生血宁L组 10 100%8.5 3.4 5.04 对照组 10 90%10.2 4.7 4.65 组间比较未见显著性差异P0.05。(着床后死亡率=吸收胎数+死胎数/着床数 100%;平均着床数=着床数/孕鼠数),14,表6 仔鼠出生存活数量比较 仔鼠存活数量（只）组别 出生数量 存活率（只）出生0天 生后4天 7天 14天 21天生血宁H组 98 98 84 84 74 72 85.7%生血宁M组 103 103 72 72 70 70 97.2%生血宁L组 116 116 94 94 89 85 90.4%对照组 95 95 84 84 77 77 91.6%注：第四天剔除各窝多余仔鼠，使各窝仔鼠等于8左右，少于6只的窝 弃之不用。组间比较未见显著性差异P0.05。,15,表7 出生存活仔鼠性别比例比较 组别 存活仔鼠数 雄性仔鼠 雌性仔鼠 雄性：雌性生血宁H组 84 44 40 1.1:1生血宁M组 72 35 37 1:1.06生血宁L组 94 46 48 1:1.04 对照组 84 42 42 1:1组间比较未见显著性差异P0.05。该表仔鼠数量是以出生后第七天存活数计算。,16,表8 仔鼠体重增长情况比较 仔 鼠 体 重（g）组别 出生后0天 4天 7天 14天 21天生血宁H组 1.750.21 2.460.36 3.460.55 6.061.29 12.201.81(98)(84)(84)(74)(72)生血宁M组 1.650.26 2.250.38 4.170.77 6.751.03 10.291.42(103)(72)(72)(70)(70)生血宁L组 1.660.24 2.090.39 3.080.59 6.161.52 10.401.62(116)(94)(94)(89)(85)对照组 1.740.17 2.380.40 3.620.58 5.680.76 10.221.31(95)(95)(84)(77)(77)注：第四天剔除各窝多余仔鼠，使各窝仔鼠等于8左右，少于6只的窝弃之不用。括号内数字为动物样本数。组间比较未见显著性差异P0.05。,17,表9 解剖断乳仔鼠肉眼检查内脏情况表 组织器官 生血宁H组 生血宁M组 生血宁L组 对照组 心脏 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上 肺脏 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上胃十二指肠 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上 空回肠 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上 结肠 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上 脾脏 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上 肝脏 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上双侧肾脏 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上 膀胱 大小形态未见明显异常 同上 同上 同上 注：检查日为仔鼠生后23天；每组随机抽取35只动物进行检测。,18,表10 亲代雄鼠体重增长情况比较 体 重（g，XSD）组别 样本数（只）试验前 试验第一天 试验第七天生血宁H组 20 25.041.10 26.891.99 28.122.07生血宁M组 20 24.741.71 26.222.14 27.772.31生血宁L组 20 25.121.64 26.502.33 28.291.98 对照组 20 25.241.44 26.612.01 28.221.78组间比较未见显著性差异P0.05。,19,表11 亲代雄鼠睾丸、附睾组织重量测定结果 组织重量系数（g/10g 体重，XSD 100）组别 样本数（只）睾丸 附睾生血宁H组 20 17.04 2.18 0.5122 0.1020 生血宁M组 20 18.10 3.73 0.4819 0.1311生血宁L组 20 17.52 2.47 0.5336 0.1156 对照组 20 18.27 2.77 0.5144 0.1168组间比较未见显著性差异P0.05。,20,表12 亲代雄鼠附睾精子活动度测定结果 精子活动度分级数（XSD）组别 样本数 度 度 度 度（活动力良好）（活动一般）（活动力不良）（死精子）生血宁H组 20 71.23.5 12.34.6 13.73.8 3.81.6生血宁M组 20 73.08.2 14.55.2 10.35.1 2.82.1生血宁L组 20 70.511.2 16.17.6 11.13.8 2.42.1 对照组 20 74.213.3 12.67.2 10.35.5 2.91.8注：每个样本计数测定200个精子，表中数据为精子具体分级的数量。组间比较未见显著性差异P0.05。,21,表13 亲代雄鼠附睾精子计数及形态学检查结果组别 样本数 精子计数（百万个/毫升，XSD）畸形精子率（%，XSD）生血宁H组 20 8.2871.199 17.233.89生血宁M组 20 8.6441.290 14.784.12生血宁L组 20 8.3612.019 15.025.27 对照组 20 8.6072.153 15.814.43 注：每个样本计数1000个精子，计算其畸形精子率。组间比较未见显著性差异P0.05。,22,实验小结,试验结果显示，小鼠妊娠前后一定时间内连续灌服不同剂量的生血宁，动物一般情况良好；生血宁各组以及对照组各有极少数动物（1只）死亡，经大体解剖可见肺内有炎症，其余组织器官未见异常；考虑动物死亡原因为灌胃时不慎所致，而非药物原因。在连续灌服不同剂量的生血宁的情况下，动物的妊娠率以及妊娠动物的体重增长与对照组比较未见显著性差异（P0.05）。,23,在妊娠雌鼠妊娠后第14天，每组脱颈椎处死10只，检查妊娠率等。经比较，生血宁不同剂量组与对照组在妊娠率、着床后死亡率以及着床数方面均未见显著性差异（P0.05）。但值得提出的是，由于小鼠子宫比较小，经硫化铵着色后分辨相关黄体以及着床腺比较困难，故而有关测定可能存在一定的误差。,24,仔鼠出生后的存活率以及性别比例方面，生血宁与对照组比较未见显著性差异（P0.05）。各组仔鼠体重增长速度正常，似乎高剂量生血宁组仔鼠体重增加更加快，但统计学比较组间未见显著性差异（P0.05）。通过解剖各组断乳仔鼠，肉眼检查各组动物的内脏器官，各组动物的心脏、肝脏、肺脏、肾脏等均未见在大小形态方面出现明显异常或畸形。,25,通过检测亲代雄鼠的体重、一般状况、睾丸及附睾组织重量系数、精子活动度、精子计数以及精子形态，生血宁各组与对照组比较未见统计学显著性差异（P0.05）。试验结论,生血宁在本试验三种剂量下对妊娠小鼠无明显一般生殖毒性作用。,26,二、生血宁致畸敏感期毒性研究,27,*,试验方法与结果 实验用昆明系小鼠240只，其中雌性鼠160只，雄性鼠80只，动物体重为25g3g左右。动物自购入后首先适应性饲养一周。将雌性鼠按照体重随机均衡分为4组（每组40只动物），即生血宁高剂量组、生血宁中剂量组、生血宁低剂量组以及空白对照组，分别灌胃2.4%生血宁、0.6%生血宁、0.15%生血宁以及蒸馏水，灌胃容量均为20ml/kg，灌胃给药时间为雌性动物交配妊娠后第6天至第15天。,28,*,动物交配前按照每饲养笼（面积40cm25cm）放置5只雌性动物规模饲养；动物交配时按照雌雄动物2：1比例放置过夜。将检查有阴栓的雌性动物单独笼具饲养。,29,*,观察指标：1雌性鼠：记录饮水量，食物消耗量，死亡数以及一般健康情况（包括活动、行为、排泄物、背毛、眼睛分泌物等）。观察动物交配行为，计算受孕率。2孕鼠：在妊娠第0、6、12、18天称取记录体重。3在孕鼠妊娠第18天脱颈椎处死动物，剖取动物子宫称重；外观检查子宫内有无吸收胎、死胎。,30,*,4检查测定子宫内胎仔的身长、尾长。5将胎仔固定，组织透明化、骨骼染色，检查胎仔骨骼发育情况。6手工切割胎仔各组织断层，肉眼检查组织器官有无发育异常。实验结果见表1、2、3、4、5、6、7、8以及组织照片。,31,*,表1 雌性鼠一般情况组别 摄食量 饮水量 死亡情况 一般健康生血宁H组 每天1416g 每天40 无死亡情况 活动、行为、排泄物、/5只 70ml/5只 背毛等未见异常生血宁M组 基本同上 基本同上 基本同上 基本同上生血宁L组 基本同上 基本同上 基本同上 基本同上对照组 基本同上 基本同上 基本同上 基本同上注：表中H、M、L分别代表高、中、低剂量，下同。,32,表2 雌性鼠受孕率比较 组别 动物总数（只）受孕动物数（只）未受孕动物（只）受孕率生血宁H组 40 23 17 57.5%生血宁M组 40 28 12 70.0%生血宁L组 40 23 17 57.5%对照组 40 24 16 60.0%注：组间比较未见显著性差异P0.05。,33,表3 妊娠雌鼠体重变化比较 体 重（g，XSD）组别 妊娠 0 d 3 d 6 d 12 d 18 d生血宁H组 28.592.21 29.281.96 29.552.08 44.584.76 51.412.32(23)(23)(23)(23)(23)生血宁M组 29.181.80 29.882.25 29.981.70 43.925.48 51.651.57(28)(28)(28)(28)(28)生血宁L组 28.761.58 29.001.86 29.922.12 43.504.76 51.331.47(23)(23)(23)(23)(23)对照组 28.582.21 28.992.64 29.161.99 42.464.85 50.874.32(24)(24)(24)(24)(24)注：括号内数字为动物样本数。组间比较未见显著性差异P0.05。,34,表4 孕鼠子宫称重情况比较 组别 样本数（只）子宫净重（g，XSD）P生血宁H组 12 15.9122 1.2118 0.05生血宁M组 12 15.8160 1.0367 0.05生血宁L组 12 15.2391 2.1165 0.05 对照组 12 15.5238 2.1812 注：子宫重量中包括胎鼠重量。组间比较未见显著性差异P0.05。,35,表5 孕鼠子宫内外观检查结果 组别 样本数 子宫内检查结果生血宁H组 23 未见吸收胎、死胎等异常。生血宁M组 28 1只鼠左侧子宫发现一吸收胎，余未见异常。生血宁L组 23 1只鼠右侧子宫发现一死胎；1 只鼠左右子宫各有一吸收胎。对照组 24 1只鼠右侧子宫发现一吸收胎，余未见异常。,36,表6 孕鼠子宫内存活胎仔测量结果比较组别 样本数（只）胎仔身长（cm，XSD）尾长（cm，XSD）生血宁H组 142 2.2290 0.2512 1.0308 0.1592生血宁M组 116 2.3306 0.1824 1.0947 0.1054生血宁L组 132 2.2176 0.1968 1.0182 0.1191对照组 117 2.3472 0.2238 1.0923 0.1365注：组间比较未见显著性差异P0.05。,37,表7 胎鼠骨骼检查结果骨骼检查部位 生血宁H组 生血宁M组 生血宁L组 对照组颅骨 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常下颌骨 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常脊椎 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常胸骨 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常肋骨 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常肩胛骨 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常前肢 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常后肢 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常 未见明显异常注：后附有相关检查的骨骼组织照片。,38,表8 胎鼠徒手切片检查内脏情况 横断面所见 生血宁H组 生血宁M组 生血宁L组 对照组大脑、侧脑室、眼球、鼻腔 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形大脑、间脑、延脑 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形舌、鼻咽腔、延髓 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形气管、食管、脊髓 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形气管、食管、胸腺 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形肺、纵隔、心房、脊髓 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形肺、心室、心室中隔 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形肺、横隔 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形肝、胃（小部分）未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形胃、肝、十二指肠、肾上腺 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形胃、肝、肾、脾、胰、肠 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形生殖器、膀胱、肾 未见畸形 未见畸形 未见畸形 未见畸形注：后附有相关检查的组织照片。,39,试验小结,本试验目的是观察生血宁对动物妊娠致畸敏感期是否具有毒性作用，灌胃给药时间为雌性动物交配妊娠后第6天至第15天。,40,试验结果显示，在动物妊娠后的第6天至第15天（即致畸敏感期），给动物分别灌服高、中、低三种剂量的生血宁，服药动物的一般情况良好，体重增长速度正常，无死亡现象出现。各组孕鼠子宫称重未见组间显著性差异（P0.05）。子宫内检查发现生血宁中小剂量组以及对照组动物个别（12只）存在有吸收胎或死胎现象，而生血宁高剂量组无此情况，分析该情况认为与生血宁无关。通过测定存活胎仔的身长及尾长，未发现组间出现显著性差异（P0.05）。通过检查胎鼠的骨骼发育以及内脏器官，认为生血宁在试验剂量下不会引起胎鼠骨骼发育障碍以及内脏组织器官畸形。试验结论，生血宁在本试验三种剂量下对妊娠小鼠无明显致畸敏感期毒性作用。,41,三、生血宁围产期毒性研究,42,试验方法与结果 实验用昆明系小鼠240只，其中雌性鼠160只，雄性鼠80只，动物体重为25g3g左右。动物自购入后首先适应性饲养一周。将雌性鼠按照体重随机均衡分为4组（每组40只动物），即生血宁高剂量组、生血宁中剂量组、生血宁低剂量组以及空白对照组，分别灌胃2.4%生血宁、0.6%生血宁、0.15%生血宁以及蒸馏水，灌胃容量均为20ml/kg，灌胃给药时间为雌性动物交配妊娠后15天至分娩后21天。,43,观察指标：1雌性鼠：记录饮水量，食物消耗量，死亡数以及一般健康情况，并记录体重。观察动物交配行为，计算受孕率。2孕鼠：在妊娠第0、6、12、18天称取记录体重。孕鼠分娩时统计产仔率。3仔鼠：出生后24小时内，计算死、活仔鼠数，称量体重，观察仔鼠有无外观畸形，幼仔出生存活率，哺育成活率，性别比例。仔鼠出生时以及生后第4、7、14、21天称取并记录体重。,44,4在仔鼠断乳（哺乳期为22天）后即断乳后第二天，每组动物脱颈椎处死近二分之一，解剖检查仔鼠心脏，肝脏，脾脏，肾脏，睾丸或子宫的重量（计算脏器重量系数）以及内脏器官有无畸形。5 仔鼠生理发育指标检查：包括耳廓分离，门齿萌出，睁眼，腹毛生长，睾丸下降，阴道开口或张开，无褶耳或开耳孔。6仔鼠神经反射功能检查：包括翻正反射，痛觉反射，视觉定位反射，听觉惊愕反射，嗅觉反射，触须定位反射，断崖回避反射，瞳孔反射，吸呍能力反射，尾部悬挂反射。,45,7仔鼠断乳后行为测试：仔鼠生后第28、35、42天分别进行自主活动试验、转棒试验、游泳试验以及跳台试验。8.仔鼠生后60天进行动物交配，观察雌鼠交配行为并计算雌鼠受孕率。实验结果见表1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17等。,46,表1 雌性鼠一般情况组别 摄食量 饮水量 死亡情况 一般健康生血宁H组 每天1416g 每天40 动物交配前以及 一般状况良好/5只 70ml/5只 妊娠后无死亡生血宁M组 基本同上 基本同上 同上 同上生血宁L组 基本同上 基本同上 同上 同上 对照组 基本同上 基本同上 同上 同上 注：表中H、M、L分别代表高、中、低剂量，下同。,47,表2 雌性鼠交配后受孕情况比较 组别 动物数（只）受孕数（只）未受孕数（只）受孕率（%）生血宁H组 40 26 14 65.0%生血宁M组 40 24 16 60.0%生血宁L组 40 20 20 50.0%对照组 40 21 19 52.5%组间比较未见显著性差异 P0.05,48,表3 妊娠鼠体重变化情况比较 体 重（g）组别 妊娠0天 妊娠后6天 12天 18天生血宁H组 27.48 28.34 30.42 52.10 1.81(26)1.94(26)2.69(26)3.96(26)生血宁M组 26.73 28.46 31.34 51.99 1.42(24)1.53(24)2.84(24)3.69(24)生血宁L组 27.08 28.67 31.23 52.58 1.28(20)1.52(20)2.71(20)3.67(20)对照组 27.44 28.18 30.20 53.85 1.12(21)1.41(21)1.82(21)3.76(21)括号内数字为动物样本数。组间比较未见显著性差异P0.05。,49,表4 妊娠鼠产仔情况比较组别 动物总数（只）产仔动物数 未产仔动物数 产仔率生血宁H组 26 23 3 88.5 生血宁M组 24 24 0 100.0 生血宁L组 20 18 2 90.0 对照组 21 20 1 95.2 组间比较未见显著性差异P0.05,50,表5 仔鼠出生后一日内存活以及外观畸形情况组别 出生总仔鼠 死亡数（只）出生后存活率 外观畸形生血宁H组 135 1 99.2 未见生血宁M组 121 1 99.2 未见生血宁L组 79 1 98.7 未见 对照组 101 0 100.未见 组间比较未见显著性差异 P0.05。外观畸形系指有无肢体、眼睛、耳、尾等肉眼所见异常。,51,表6 仔鼠在母鼠哺育下成活数量比较 仔鼠存活数量（只）组别 出生数量-（只）出生0天 生后4天 7天 14天 21天 28天生血宁H组 135 134 134 130 124 109 57（99.2%）（99.2%）（96.3%）（92.6%）（81.4%）生血宁M组 121 120 120 120 116 114 63（99.2%）（99.2%）（99.2%）（95.7%）（94.2%）生血宁L组 79 78 78 78 78 77 46（98.7%）（98.7%）（98.7%）（98.7%）（97.5%）对照组 101 101 101 100 99 95 62（100%）（100%）（99.9%）（98.0%）（95.0%）组间比较未见显著性差异 P0.05。括号内数据为存活率。仔鼠生后28天处死部分动物用于解剖检查内脏。,52,表7 出生存活仔鼠性别比例比较 组别 存活仔鼠数 雄性仔鼠 雌性仔鼠 雄性：雌性生血宁H组 134 74 60 1：0.81生血宁M组 121 60 61 1：1.02生血宁L组 78 42 36 1：1.17 对照组 101 45 56 1：1.24 组间比较未见显著性差异P0.05。该表仔鼠数量是以出生后第四天存活数计算。,53,表8 幼仔哺育成活率比较 组别 4日龄仔鼠存活数 21日龄存活数 21日内死亡数 存活率生血宁H组 134 109 25 81.3 生血宁M组 120 114 6 95.0 生血宁L组 78 77 2 98.7 对照组 101 95 6 94.0 组间比较未见显著性差异 P0.05。计算公式为：哺育成活率（离乳率）（21日离乳时仔鼠存活 数4日龄仔鼠存活数）100,54,表9 仔鼠体重增长情况比较 仔 鼠 体 重（g）组别 出生后0天 4天 7天 14天 21天生血宁H组 1.630.19 2.820.46 4.100.72 6.741.20 10.161.75(134)(134)(130)(124)(109)生血宁M组 1.810.16 2.580.33 4.320.76 6.310.68 8.941.03(120)(120)(120)(116)(114)生血宁L组 1.680.16 2.510.33 3.930.58 6.500.86 9.541.25(78)(78)(78)(78)(77)对照组 1.820.14 2.530.34 3.890.64 6.080.75 9.421.36(101)(101)(100)(99)(95)括号内数字为动物样本数。组间比较未见显著性差异P0.05。,55,表10 断乳仔鼠内脏组织检查结果 组织脏器重量系数（g/10g，体重 100）组别 心 肝 脾 肺 肾 子宫或睾丸生血宁0.740.16 0.500.21 0.480.15 0.100.03 0.150.05 0.440.14H组生血宁 0.820.12 0.560.05 0.530.12 0.110.02 0.150.07 0.510.23M组生血宁 0.800.17 0.580.06 0.600.14 0.100.06 0.150.06 0.410.16L组对照组 0.820.10 0.620.08 0.600.10 0.110.03 0.160.11 0.440.25 每组样本数均为随机抽取的20只动物。因动物过小无法准确分辨雄雌，故将动物生殖器官 组织重量一并计算。组间比较未见显著性差异P0.05。经过解剖未发现有上述组织器官畸形的仔鼠。,56,表11 仔鼠生理发育指标检测结果检测项目 生血宁H组 生血宁M组 生血宁L组 对照组 备注耳郭分离率 分离率100%分离率100%分离率100%分离率100%生后4日检查门齿萌出率 86%88%86%86%生后12日检查双眼睁眼率 87%86%88%85%生后14日检查腹毛生长率 92%90%91%91%生后14日检查睾丸下降率 27%30%31%32%生后21日检查阴道开口率 82%84%88%85%生后35日检查无褶耳并开耳孔100%100%100%100%生后20日检查以上各组仔鼠检查比率均在正常范围之内。,57,表12 仔鼠神经反射功能检测结果检测项目 生血宁H组 生血宁M组 生血宁L组 对照组 备注平面翻正反射 达标日 8d 8d 7d 7d 生后8d内应达标空中翻正反射 达标日 18d 19d 18d 18d 19d内应达标尾部压痛反射 正常 正常 正常 正常 生后20日测定抓刺痛反射 正常 正常 正常 正常 生后20日测定视觉定位反射 达标日 26d 25d 25d 25d 26d内应达标听觉惊愕反射 达标日 15d 15d 16d 16d 18d内应达标嗅觉反射 达标日 14d 16d 15d 15d触须定位反射 达标日 15d 17d 17d 16d 生后20d内应达标断崖回避反射 达标日 8d 8d 8d 8d 生后8d内应达标瞳孔反射 达标日 21d 22d 21d 22d吸允能力反射 达标日 2d 2d 2d 2d尾部悬挂反射 达标日 12d 13d 13d 14d 注：达标日为该组动物全部出现阳性反射日。以上测定均未出现异常。,58,表13 仔鼠断乳后自主活动情况比较 10分钟内自主活动次数（XSD）组别 动物数（只）生后第28d 35d 42d生血宁H组 20 237.1594.83 288.3598.01 300.2770.76生血宁M组 20 251.7089.65 288.0576.67 275.2072.54生血宁L组 20 264.8590.91 275.4087.43 286.8088.95 对照组 20 273.35107.65 272.8083.51 278.4087.99 组间比较未见显著性差异P0.05。,59,表14 断乳仔鼠转棒实验结果 仔鼠在转棒上停留时间（分钟，XSD）组别 动物数（只）生后第28d 35d 42d生血宁H组 20 16.4018.8 15.6017.50 9.7311.32生血宁M组 20 13.0014.02 16.6514.19 11.7316.70生血宁L组 20 10.9114.49 12.3516.31 11.6017.41 对照组 20 15.459.87 14.6019.23 12.3311.78 注：转棒转速设定为16 转/分。组间比较未见显著性差异P0.05。,60,表15 35日龄断乳仔鼠游泳试验结果 组别 动物数（只）动物游泳时间（分，XSD）P生血宁H组 20 142.80 10.12 0.05生血宁M组 20 141.71 11.57 0.05生血宁L组 20 149.60 12.88 0.05 对照组 20 139.50 10.96-注：动物游泳场所水深35厘米，水温18；游泳时间计算是 以动物头部第一次没入水中为准。组间比较未见显著性差异P0.05。,61,表16 断乳仔鼠跳台试验结果 动物在10分钟内对电击反应的次数（XSD）组别 动物数（只）生后第28d 35d 42d生血宁H组 20 2.702.79 1.601.19 1.330.90生血宁M组 20 2.701.95 1.500.92 1.471.13生血宁L组 20 2.852.50 1.250.72 1.471.25 对照组 20 2.351.81 1.501.15 1.130.64 组间比较未见显著性差异P0.05。,62,表17 仔雌鼠生后60天交配后受孕率比较 组别 雌性动物总数 受孕动物数 未孕动物数 受孕率生血宁H组 28 17 11 60.7%生血宁M组 34 23 11 67.6%生血宁L组 27 18 9 66.7%对照组 39 25 14 64.1%组间比较未见显著性差异P0.05。,63,试验小结,本试验目的是观察生血宁对动物围产期是否存在毒性作用，灌胃给药时间为雌性动物交配妊娠后15天至分娩后21天，生血宁给动物应用高、中、低三种剂量。,64,试验结果显示，雌鼠妊娠前后一般情况良好，无异常情况出现。生血宁各组以及对照组动物妊娠受孕率正常，组间比较未见显著性差异（P0.05）。各组受孕动物在用药前后体重增长速度正常，组间比较未见显著性差异（P0.05）。各组妊娠动物产仔率在88.5%100%之间，尽管生血宁高剂量组的产仔率比较低（88.5%），但经统计学处理组间比较未见显著性差异（P0.05）。,65,生血宁各组以及对照组仔鼠出生后一日存活率均在98.7%以上，仔鼠外观未见明显畸形。通过对仔鼠在母鼠哺育下存活率比较，所观察到的问题类似于产仔率，即生血宁高剂量组的存活率比较低（81.3%）仅指哺乳第21天（计算公式见正文），但经统计学处理组间比较未见显著性差异（P0.05）。分析原因可能与生血宁高剂量组产仔数量多于其他各组，母鼠哺育有一定困难；而且试验中也观察到母鼠有食仔现象。生血宁各组以及对照组仔鼠的性别比例以及体重增长速度方面未见异常情况，经统计学处理组间比较未见显著性差异（P0.05）。,66,通过对仔鼠生理发育指标检查（包括耳廓分离，门齿萌出，睁眼，腹毛生长，睾丸下降，阴道开口或张开，无褶耳或开耳孔）以及仔鼠神经反射功能检查（包括翻正反射，痛觉反射，视觉定位反射，听觉惊愕反射，嗅觉反射，触须定位反射，断崖回避反射，瞳孔反射，吸呍能力反射，尾部悬挂反射），各组均未见异常。通过随机抽样检测生血宁各组以及对照组断乳仔鼠心脏、肺脏、脾脏、肝脏、肾脏、生殖器器官重量系数未发现异常情况以及畸形。,67,通过随机抽样检测生血宁各组以及对照组仔鼠断乳后行为测试（仔鼠生后第28、35、42天分别进行自主活动试验、转棒试验、游泳试验以及跳台试验），试验数据显示组间比较未见显著性差异（P0.05）。通过对生血宁各组以及对照组仔雌鼠生后60天交配后受孕率比较，显示受孕率在60.7%67.6%之间，组间比较未见显著性差异（P0.05）。而且与其各亲代母鼠受孕率（50.0%65.0%）比较，似乎亲代仔雌鼠受孕率有轻微增高，但统计学处理无显著性差异（P0.05）。试验结论，生血宁在本试验三种剂量下对妊娠小鼠无明显围产期毒性作用。,68,参考文献（略）,