《型别检测》PPT课件.ppt

HPV检测在宫颈癌诊治中的应用,胡飞红,在2003年，香港天后级艺人，梅艳芳身患癌症，在她刚刚过完40岁生日后离开人世,宫颈癌与HPV关系,豪森，德国人，2008年10月诺贝尔奖获得者研究了人乳头状瘤病毒与宫颈癌的关系,HPV型别与宫颈病变,HPV病毒通过皮肤表面的微小创口侵入,更多的HPV病毒侵入到创口周围组织并进入上皮细胞,病毒复制,HPV检测在宫颈癌诊治中的临床意义,常用HPV检测方法的分析,1.细胞学检查,传统巴氏涂片（CV）液基薄层细胞学技术(TCT),2.组织学检查（肉眼观察。阴道镜观察。组织检查）,3.感染组织中HPV蛋白的检测,4.HPV感染的血清学检查,检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。,检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。,HPV基因检测,5.HPV基因组检测 1.基于PCR靶向扩增 2.基于PCR产物分析,杂交分析,1。基于PCR靶向扩增,2.基于PCR产物分析,2.基于PCR产物杂交分析,（4）基因芯片技术,杂交捕获法,杂交捕获一代（HC-)试验可检测9 种高危型HPV,包括16、18、31、33、35、45、51、52 和56。所用的反应载体是试管；杂交捕获二代试验(HC)原来的试管法改为96 孔平板法，能同时检测13 种高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59 和68)。,杂交捕获法,捕获杂交法（通过对病毒DNA解链,杂交捕获,光信号放大获取结果）,基本实验步骤如下：1.样本DNA 双链被释放并分解为核苷酸单链;2.DNA 单链与RNA 探针结合为RNADNA 杂交体;3.特异性抗体将RNADNA 杂交体固定在试管壁或微孔壁上;4.结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNADNA 杂交体结合,使信号放大;5.碱性磷酸酶使酶底物发光,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNADNA 杂交体的含量。,HCII唯一通过FDA批准可在临床使用的HPV技术,DNA裂解 RNA-DNA杂交 抗体捕获 化学发光 计算机判读,新发展的一项诊断技术，在HPV分型中用寡核苷酸原位合成法，原理是将疾病的特征性基因片段或致病病原体片段固定芯片上，制成诊断芯片，提取患者样本中核酸行标记作探针，利用探针与芯片杂交，扫描杂交结果，判断基因型分型是否被感染，可诊断HPV潜在感染，行早期预防,基因芯片技术,HPV基因芯片检测,总结。,总之，目前的HPV分型检测技术主要基于聚合酶链反应。HPV特定型别在宫颈疾病发展中的重要作用，考虑到HPV型谱的多样性和多重性HPV联合感染的高发率，准确的HPV检测显得尤为重要。不断寻求更准确，快速有效的检测技术。,注：,如何对待HPV感染？,1.HPV 感染较为常见2.多数 HPV 可以被清除,“一过性”感染不致宫颈病变 3.少数持续性感染会引发宫颈病变 4.HPV致CINI、CINII、CINIII到浸润癌需要相当长的时间，一般是810年5.致宫颈癌的是高危型HPV6.HPV(+)只说明是一种感染，并非是一种疾病 7.没有HPV感染可以不得宫颈癌,因此避免HPV感染可以避免发生宫颈癌 8.目前治疗 HPV 感染的方针是“治病不治毒”,对于HPV 感染的检查与治疗的轻视和过分恐惧都不适宜,谢谢！,