《卵清白蛋白提取》PPT课件.ppt

卵清白蛋白提取的工艺,组员：阮金丽 刘碧娇 魏徐丽 梁倩萍,蛋清中各种蛋白的理化性质,工艺流程,分离蛋清,离子交换层析,脱盐,预处理,收集，检测,材料和试剂新鲜鸡蛋 Q-Sepharose F.F 凝胶G-25 Tris-HCl(20mmol/L)HCl（1M）NaOH（1M）Tris-HCl(20mmol/L,pH8.0)NaCl（0.15M）仪器设备离心机 紫外检测仪 色谱柱,分离蛋清,将新鲜鸡蛋洗干净，敲碎蛋壳（大头），小心分离出蛋清和蛋黄，取蛋清,预处理,1 将蛋清缓慢搅拌（以不引起泡沫为准）至胶状部分破坏用蛋清两倍体积的20mmol/LTris-HCl稀释（取样SDS-PAGE 测蛋白含量）2 用1mol/L的HCl调pH至6.0，在2条件下缓慢 搅拌3h，以沉淀伴清蛋白3 在4、转速为6000r/min条件下，离心5分钟去 除沉淀；4 上清液用1mol/LNaOH调整到pH8.0，在4，转速15000r/min条件下，离心30min，沉淀卵黏蛋白，取上清液备用。,离子交换,Q-Sepharose F.F阴离子柱分离1 溶胀在体积分数为20%乙醇中的强阴离子填料Q-SepharoseFF搅匀，取所需量，静置2 用pH8.0的20mmol/L的Tris-HCL起始缓冲液置换20%的乙醇溶液3-5次，最终缓冲液与胶体的体积比为1：3备用。3 将Q-SepharoseFF装入色谱柱中，最终体积为40mL。用20mmol/LTris-HCL（pH8.0）平衡色谱柱上样 将蛋清制备液以3mL/min加入Q-SepharoseFF色谱柱中 待吸附饱和后，用20mmol/LTris-HCL（pH8.0）缓冲液冲洗未结合到Q-SepharoseFF 色谱柱上的蛋白，直到记录仪记录线回到基线7 洗脱 用含0.15mol/LNaCL的20mmol/LTris-HCL（pH8.0）进行洗脱，收集各洗脱液,脱盐,凝胶柱层析脱盐称取凝胶G-25 30g，用0.02mol/L的PBS（pH8.0）500mL热溶胀2h平衡 用0.02mol/L PBS（pH8.0）40mL倒进 柱，排气泡3 装柱 待 PBS流出20-30min后4 上样 上样量为床体积的30%洗脱 用0.02mol/L PBS（pH8.0）控制速 度，保证凝胶上方液面高度为106 收集洗脱液,收集，检测,收集洗脱液SDS-PAGE检测卵清白蛋白的纯度自己好好看一下，一定要弄清楚每一步的作用，要思考！SDS-PAGE 的操作步骤以及所用溶液的配制方法自己找哦。用到层析技术的，装好柱后如何测柱效？结合分离或者仪器分析的课本即可找到相应的资料。加油哦！里面有些参数不一定都是正确的。,谢谢,